东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs活性的影响

[目的]探讨东莨菪内酯对家蚕中肠组织谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）活性的影响,为桑园使用东莨菪内酯防治虫害的安全性及家蚕抗性品系选育提供理论依据.[方法]采用毒叶法对家蚕进行添毒,测定东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs活性的影响,并通过离体抑制试验求出东莨菪内酯对GSTs的抑制中浓度（IC50）.[结果]摄食不同浓度东莨菪内酯（0.026～0.104 mol/L）处理桑叶的家蚕表现出相似的中毒症状（吐液和拒食）,但在添毒36h后中毒症状完全消失.相对于正常的家蚕,摄食东莨菪内酯处理桑叶后家蚕中肠组织的GSTs比活力呈前期降低、中期升高、后期降低的变化趋势.不同浓度（0.001～0.016 mol/L）的东莨菪内酯均显著抑制家蚕中肠组织离体GSTs活性,且抑制率随东莨菪内酯浓度的增加而增加.东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs的IC50为0.00474 mol/L.[结论]东莨菪内酯可抑制家蚕中肠组织GSTs活性.     

东莨菪内酯对家蚕乙酰胆碱酯酶活性的影响

用不同浓度天然产物东莨菪内酯处理桑叶饲喂家蚕(Bombyx mori)后,通过测定家蚕头部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,研究东莨菪内酯对家蚕的影响。结果表明,12 h时家蚕出现摆头、吐液等轻微中毒症状,24 h时中毒症状减轻,48 h时中毒症状消失,家蚕恢复正常;5龄第三天家蚕饲喂浸过不同浓度东莨菪内酯的桑叶后,头部AChE比活力变化趋势与对照变化趋势相反,且除了药后24 h时的比活力高于对照外,其余时间段比活力均显著低于对照,表现为抑制作用;在一定浓度范围内,东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制作用呈剂量效应关系,且抑制率随东莨菪内酯浓度的升高而升高。5.0×10-2、2.5×10-2mol/L东莨菪内酯对家蚕头部离体AChE活性的抑制率分别达到99.4%、90.6%,当东莨菪内酯浓度小于5.0×10-4 mol/L时,其对家蚕头部离体AChE活性的抑制趋势逐渐变缓,抑制中浓度IC50为4.03×10-3mol/L。     

HPLC法测定一匹绸中东莨菪苷和东莨菪内酯的含量

建立了一匹绸中东莨菪苷和东莨菪内酯的含量测定方法。色谱柱为ODS-C18,用甲醇-0.2%磷酸梯度洗脱,流速为0.8 m L/min,柱温30℃,检测波长为346 nm。东莨菪苷、东莨菪内酯0.019 2~0.096 0mg/m L(r=0.999 9)、0.004 48~0.022 40 mg/m L(r=0.999 5)呈现良好的线性关系,方法学验证结果符合要求。本方法简便准确,精密度和重复性好,可作为一匹绸药材的含量检测方法。     

中平树中东莨菪内酯的分离鉴定及含量测定

采用硅胶柱色谱分离纯化的方法从中平树[Macaranga denticulata(Bl.)Muell.Arg.]中分离得到一种香豆素类化合物,根据理化性质及光谱数据鉴定其为东莨菪内酯。并采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇∶0.1%冰醋酸(39∶61)为流动相,流速1.0 m L/min,检测波长345 nm的色谱条件,用HPLC法测定中平树中东莨菪内酯的含量。结果表明,东莨菪内酯在1.45~7.24μg/m L范围内与其峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为99.18%,RSD为1.18%(n=6)。该方法简便、准确、快速,可用于中平树药材的质量控制。     

土壤特征对黄花蒿酚类物质的影响

为探索影响黄花蒿酚类组分累积的土壤因素,测定了黄花蒿东莨菪内酯、猫眼草酚、猫眼草黄素含量及土壤养分含量、酶活性、微生物标记性磷脂脂肪酸(PLFAs)含量,并对其进行相关性及因子分析。结果表明,不同样地黄花蒿东莨菪内酯含量、猫眼草酚含量、猫眼草黄素含量、根际土壤养分含量、酶活性及微生物PLFAs含量存在差异;土壤有效磷含量与东莨菪内酯含量呈显著正相关(P0.05),与黄花蒿猫眼草酚、猫眼草黄素含量呈极显著正相关(P0.01);速效钾含量与猫眼草黄素含量呈显著正相关(P0.05);有速效钾、有效磷是影响黄花蒿东莨菪内酯、猫眼草酚、猫眼草黄素含量的主要因子。人工栽培黄花蒿可结合当地土壤实际状况,适量增施磷肥与钾肥,可促进黄花蒿东莨菪内酯、猫眼草酚、猫眼草黄素含量的增加,这为人工栽培黄花蒿,提高黄花蒿的品质提供了科学的理论依据。     

姜黄素和东莨菪内酯对朱砂叶螨形态变化和水分损失的影响

为明确植物源杀螨活性物质姜黄素和东莨菪内酯对朱砂叶螨的作用方式,测定了阿维菌素、哒螨灵、螺螨酯、姜黄素、东莨菪内酯对朱砂叶螨的毒力,并研究了药剂处理后朱砂叶螨的形态变化和水分损失.结果表明:阿维菌素、哒螨灵、螺螨酯、姜黄素和东莨菪内酯对朱砂叶螨的48hLC50分别为0.009 5,0.955,661.20,3 055.85和1 886.40mg/L;用各药剂的48hLC50质量浓度处理朱砂叶螨后发现,在形态上,经姜黄素和东莨菪内酯处理后其体长皱缩率在72h分别达到23.17%,19.46%,在168h分别达到35.94%,35.79%,与其他药剂和对照的差异具有统计学意义;在水分损失上,螺螨酯、姜黄素和东莨菪内酯处理后朱砂叶螨的水分损失率在96h内与其他药剂和对照相比差异具有统计学意义.该研究证实姜黄素、东莨菪内酯能够明显地影响朱砂叶螨的形态与体内水分含量,且两种药剂对朱砂叶螨的某些症状与神经毒剂和生长调节剂相似,其作用机理有待于下一步研究证实.     

山莓东莨菪内酯的提取工艺

为更好地开发利用山莓的食药用价值,以东莨菪内酯提取率为指标,采用正交试验法,考察乙醇浓度、乙醇用量、超声时间、超声功率对东莨菪内酯的提取率。结果表明:山莓中东莨菪内酯的最佳提取工艺为100mL的75%乙醇浸渍12h,在80 W功率下超声提取60min,该条件下的提取率为0.333%。     

东莨菪素对朱砂叶螨的毒力及杀螨机理初探

采用玻片浸渍法测定东莨菪素对朱砂叶螨的触杀毒力,观察东莨菪素对朱砂叶螨的致毒症状,并测定其对朱砂叶螨神经系统靶标酶(乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性的影响。结果表明,东莨菪素对朱砂叶螨24 h的触杀LC50值为1.24 mg/mL;中毒试螨表现出神经毒剂的致毒症状,如兴奋、痉挛等。在活体和离体试验中,东莨菪素均显著抑制试螨乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性。研究还发现东莨菪素会引起试螨乙酰胆碱含量增加,可能是东莨菪素显著抑制试螨乙酰胆碱酯酶活性引起。据此推测东莨菪素对朱砂叶螨可能有神经毒性。     

桑树东莨菪素体外抗假丝酵母菌活性初步研究

试验运用生长速率法，初步测定了桑树活性物质东莨菪素体外抗假丝酵母菌活性。结果表明，东莨菪素对假丝酵母菌具有明显的抑制作用，其MIC=7．81，作用时间和作用浓度分别在48—72h、500—1000ug／ml间为宜。这为东莨菪素抗菌活性的进一步研究奠定了基础。     

PMT 和H6H 双基因共转化提高三分三托品烷类生物碱质量分数

三分三是我国特有的托品烷类生物碱药源植物.采用基于发根的外源基因表达技术,农杆菌介导遗传转化 三分三,获得转烟草PMT 和莨菪H6H 基因的发根、基因组PCR鉴定转基因发根、液体摇床培养后,HPLC检测 发根中莨菪碱和东莨菪碱质量分数.结果发现:在三分三转基因发根中,能够同时检测到1177bp的莨菪H6H 基 因片段和451bp的烟草PMT 基因片段,而非转基因发根没有检测到这2个基因,表明外源PMT 和H6H 这2个 基因整合进了三分三基因组.转基因发根系T11中东莨菪碱质量分数最高,比非转基因发根系高出近6倍,比自然 根高出近25倍;转基因发根系T25中莨菪碱质量分数最高,比非转基因发根系高出近8倍,比自然根高出近75 倍;转基因T25中东莨菪碱和莨菪碱总量最高,比非转基因发根系高出近7倍,比自然根高出近44倍.     

不同品种烤烟多酚类物质差异性研究

[目的]探索云南省主栽烤烟品种中主要多酚化合物含量的差异.[方法]采用高效液相色谱法测定了云南地区普遍种植的4个烤烟品种烟叶样品中6种多酚化合物的含量,并对检测结果进行了统计分析.[结果]试验得出,各烤烟品种的多酚物质含量相对稳定,并按照一定的规律逐渐递减,其中红大的多酚类物质绿原酸含量明显高于其他品种.4个烤烟品种烟叶中多酚物质莨菪亭含量都低,检测值存在较大变异.烟叶中芸香苷含量品种间差异不明显,绿原酸、新绿原酸、奎宁酸、山奈酚苷、莨菪亭5种多酚类物质含量品种间差异显著.[结论]研究可为卷烟企业在云南科学地建设烟叶生产基地、合理利用各种烤烟原料进行叶组配方提供一定的参考依据.     

Biochemical Evidences for Scopoletin Inhibits Ca~(2+)-ATPase Activity in the Carmine Spider Mite,Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)

[Objective] This study aimed to investigate the acaricidal effect of scopoletin, and provide the biochemical evidences of scopoletin influences Ca2 +-ATPase activity and gene expressions in the Carmine Spider Mite, Tetranychus cinnabarinus.[Method] The acaricidal effects of scopoletin were investigated by slip-dip method.Exposeed to different concentrations of scopoletin(0.16-2.5 mg/ml), Ca2+-ATPase activity in vivo and protein contents were investigated. For assessing the in vitro effect, Ca2+-ATPase enzyme(200 μl) prepared from normal mites were incubated with different concentrations of scopoletin reagents. [Result] Scopoletin exhibited significant inhibitory effect on Ca2+-ATPase activity both in vivo and in vitro, and resulted in increased protein contents; kinetic analysis showed that the catalytic capability of Ca2+-ATPase was significantly reduced by scopoletin. [Conclusion] Scopoletin exhibits a significant inhibitory effect on Ca2 +- ATPase, and its acaricidal effect against T. cinnabarinus might be due to the direct inhibition of Ca2+-ATPase.     

磷脂酶C参与ParA1诱导的烟草悬浮细胞死亡和防卫反应

【目的】研究寄生疫霉Phytophthora parasitica分泌的蛋白激发子ParA1诱导烟草悬浮细胞后,磷脂酶C(phospholipase C,PLC)参与ParA1诱导烟草过敏细胞死亡(hypersensitive cell death,HCD)和防卫反应。【方法】采用药理学方法,在烟草悬浮细胞中添加PLC抑制剂,比较烟草悬浮细胞受ParA1诱导后细胞死亡和多种防卫反应的差别。【结果】PLC特异性抑制剂U73122能完全抑制ParA1引起的烟草悬浮细胞死亡,氧迸发、胞外基质碱化和植保素scopoletin(7-羟基-6-甲氧基香豆素)积累都能显著地被抑制,5种防卫基因hin1、hsr203J、PR(pathogenesis-related)-1a、PR-1b和PAL等的转录表达也都受到U73122不同程度的抑制。【结论】ParA1处理烟草悬浮细胞后,PLC参与了ParA1诱导细胞死亡和防卫反应的信号传导过程。     

海拔高度对烟叶多酚和类胡萝卜素含量的影响

为全面掌握不同海拔烟叶的质量状况,指导卷烟配方用烟,选取3个不同海拔高度进行大田试验,研究了海拔对烟叶中的多酚、类胡萝卜素含量影响.结果表明:随海拔高度的增加,中、上部烟叶中莨菪亭含量呈显著降低趋势,其他多酚类物质及总酚含量呈上升趋势;不同海拔烟叶中的类胡萝卜素含量中部叶与上部叶的变化存在差异,中部叶中海拔烟叶的类胡萝卜素含量最高,而上部叶中海拔的最低.结论:高海拔有利于提高烟叶中除莨菪亭外的多酚类物质含量,海拔对烟叶中类胡萝卜素含量的影响因烟叶部位而异.     

烤烟生长过程中多酚及相关酶活性的动态变化

研究了吉烟九号在延边不同地区生长发育过程中烟叶多酚物质及其相关酶活性的变化,结果表明:烟叶中的绿原酸含量在叶龄60 d时达到峰值,之后出现小幅下降,在叶龄90 d时达到最大;芸香苷和莨菪亭在叶龄60 d时达到最大值,芸香苷在小幅下降后又上升,莨菪亭则持续下降;烟叶中多酚氧化酶和过氧化物酶活性在叶龄60 d时达到最高,此后逐渐降低,POD在叶龄90 d后仍有较高活性,敦化烟叶的多酚物质含量最高,汪清次之,龙井最低。     

核黄素诱导烟草悬浮细胞酚类物质和木质素的积累

 【目的】阐明核黄素对烟草悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性以及抗病相关的酚类物质、木质素等次生代谢产物含量的影响。【方法】1 mmol?L-1的核黄素处理烟草悬浮细胞,用生物化学、细胞化学和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等方法测定苯丙烷代谢有关的生理和生化指标。【结果】核黄素处理后,PAL和POD活性明显升高,处理12 h 和24 h后酶活性分别达到峰值;荧光观察细胞壁积累了更多的酚类物质,胞内和胞外scopoletin(7-羟基-6-甲氧基香豆素)含量明显升高,在处理12 h后都达到峰值,分别是对照的3.6和3.9倍;细胞染色和含量测定表明,核黄素处理后烟草悬浮细胞沉积了更多的木质素,处理24 h和48 h后,木质素含量分别为对照的1.5和1.8倍。【结论】核黄素处理后提高了烟草悬浮细胞PAL、POD活性,积累了更多与抗病有关的次生代谢产物。     

烟草抗虫机制研究进展

烟草是重要的经济作物,而烟草的害虫种类在中国已达300 余种,严重制约了烟草的生产。植物抗虫性是防治害虫最为经济有效的手段,为更好了解目前国内外在烟草抗虫机制方面的研究情况,笔者总结了烟草对害虫的基础性组成防御和诱导化学防御、烟草抗虫信号途径及分子机制。提出烟草上的主要害虫已经由鳞翅目害虫逐步向刺吸式害虫转变,而目前国内外关于烟草的抗虫性以及抗虫育种,是对单一害虫的研究,因此要加大烟草对多种害虫的综合抗性的研究以及多抗性品种的选育工作。同时分析指出光合作用是植物防御昆虫的一个程序化反应,在研究提高植物烟草抗虫性以及烟草抗虫品种选育的过程中,烟草的初级代谢过程特别是光合作用,也应该是重点考虑的方面,在烟草抗虫性研究上应有效地进行多学科结合,从多个角度去研究阐述这个问题,特别是与植物生理学、分子生物学、烟草栽培学以及烟草育种学的结合。     

烟草品种辣椒叶脉斑驳病毒病的症状与抗病性鉴定

 辣椒叶脉斑驳病毒（Chilli veinal mottle virus,ChiVMV）为马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的确定种,在我国烟草上的危害呈上升趋势,了解ChiVMV侵染烟草品种的症状和品种的抗性有利于病害防治。本文通过塑料大棚内摩擦接种,分析了21个烟草品种的症状特征和对ChiVMV的抗性。ChiVMV侵染烟草的典型症状为褪绿黄化、花叶、疱斑和叶缘下卷。按照国家标准GB/T 23224—2008,依据接种ChiVMV后14 d的平均病情指数,各品种对ChiVMV的抗性分别为：MD609,巴斯玛1号和云烟97为感病,MSK326,MS云烟87,MS云烟85,红花大金元等18个供试品种为高感。云南省烟草主栽品种缺乏对ChiVMV的抗性,ChiVMV的危害需要引起重视。     

烟草抗病性与防御酶活性间的关系研究进展

烟草病害是制约烟草生产的难题,研究烟草的抗病性和选育抗病品种是解决这一难题的有效途径。植物的抗病性是一个复杂的过程,其中一些相关酶类起着很重要的调控作用,如超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),过氧化氢酶(catalase,CAT),过氧化物酶(peroxidase,POD),抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidease,APX),多酚氧化酶(polyphenoloxidas,PPO)和苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyas,PAL)等。烟草病害发生的严重程度与这些酶活性的变化有着密切的关系。由于在测定酶活性的过程中存在人为因素等限制条件,到目前为止还没有得出这些防御酶活性可以作为烟草抗病性签定指标的定论。为了进一步明确烟草与病原物互作中防御酶活性的变化,综述了烟草抗病性与活性氧清除酶类(SOD、CAT、POD、APX)和次生代谢有关酶类(PPO、PAL)间的关系,还对当前烟草感病后有关防御酶活性变化研究的前景进行了分析展望。