GUS基因在转基因棉花中的表达

通过农杆菌介导法,以棉花下胚轴切段为外植体,将Bt杀虫晶体蛋白基因导入新疆陆地棉品种新陆早1号、新陆中2号中,获得了在含有卡那霉素MS培养基上诱导的愈伤组织,经GUS基因检测部分转化愈伤表达GUS阳性。     

巨桉下胚轴诱导不定芽与植株再生的研究

研究了以巨桉 (Eucalyptusgrandis)的子叶、下胚轴作外植体诱导愈伤组织产生不定芽及植株再生的过程 ,结果表明 :下胚轴在改良H培养基 +2 .4 -D 1 0mg/L +BA 1 0mg/L +NAA 0 1mg/L的诱导下容易获得有诱导价值的愈伤组织 ,并在改良H培养基 +BA 1 0mg/L +NAA 0 1mg/L的诱导下发生月增殖率 8～ 10倍的丛生苗     

Bacillus thuringiensis杀虫基因在花椰菜愈伤组织的整合与表达

 本文利用双元载体系统，通过土壤根癌农杆菌A281和B6S3菌株的介导，将B.t. aizawai 7-29杀虫蛋白基因导入我国栽培花椰菜品种瑞士雪球，得到转基因愈伤组织及其再生植株。Southern分子杂交证明B.t.杀虫蛋白基因已整合到花椰菜基因组中。用组织化学法检测GUS活性，观察到愈伤组织的转化细胞呈蓝色，由于B.t.杀虫蛋白基因与GUS基因翻译融合，GUS基因的表达为杀虫蛋白基因在花椰菜组织中表达提供了证据。     

落葵组织培养研究

以落葵子叶和胚轴为外值体 ,在 MS基本培养基中添加不同浓度激素培养。结果表明 ,胚轴在 NAA0 .1～ 0 .3 mg/ L和 BA1～ 3 mg/ L范围内能产生愈伤组织 ,而子叶在上述培养基上均不能产生愈作组织。胚轴愈伤组织在 NAA0～0 .3 mg/ L 和 BA3 mg/ L 及 KT3 mg/ L 上分化出芽 ,在 1 / 2 MS NAA0 .3 mg/ L培养基上 ,生根率和根的质量均最好 ,再生小植侏移栽成活率达 1 0 0 %。     

不同植物生长调节剂对莴苣愈伤组织的诱导与植株再生的影响

探讨了莴苣组织培养中不同植物生长调节剂对莴苣愈伤组织的诱导及植株再生的影响.试验结果表明,采用下胚轴为外植体进行愈伤组织诱导,MS 2,4-D 1.0 mg/L 6BA 0.5 mg/L NAA 0.1 mg/L有利于下胚轴愈伤组织的生成,诱导率达95%;MS 6BA 1.0 mg/L NAA 0.2 mg/L培养基有利于从愈伤组织上诱导出芽,诱导率可达100%;幼苗经1/2MS NAA 0.5 mg/L培养基诱导生根后成为完整的植株.     

紫花苜蓿的组织培养与快繁技术研究

以紫花苜蓿为材料,研究了不同外植体和不同激素处理对苜蓿愈伤和胚状体分化的影响。结果表明,子叶和下胚轴作外植体,在MS+2,4-D 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L培养基上愈伤组织诱导率较高,下胚轴的诱导率要高于子叶;下胚轴在MS+BA 3.0mg/L培养基中胚状体分化率最高。     

霍乱毒素B亚基对胡萝卜的遗传转化

以胡萝卜无菌幼苗的下胚轴为外植体,通过携带CTB基因的根癌农杆菌的介导进行转化,在Kan50mg/L和Carb500mg/L的MS3-1固体培养基上诱导形成胚性愈伤组织,转至Kan100mg/L和Carb100mg/L的MS0固体培养基上形成植株,同时还进行了以经过预处理的下胚轴为外植体进行转化的试验,发现低温处理4d的下胚轴的抗性愈伤诱导率较高。经PCR检测、PCR-Southern杂交检测以后,表明CTB基因已整合进胡萝卜的基因组中。RT-PCR检测初步证明了CTB基因的转录。     

猬实下胚轴愈伤组织的生长和器官分化研究

通过对猬实下胚轴离体培养的研究 ,结果表明 :在Ms培养基上 ,BA (1～ 3)mg/l和NAA (0 1～ 1 )mg/L配合能诱导愈伤组织生长良好。在BA (1～ 3)mg/L和NAA (0 1～ 0 2 )mg/L配合下能诱导愈伤组织芽分化。0 2mg/LNAA或IBA诱导无根苗生根效果明显。通过愈伤组织芽分化途径可以获得完整植株     

银合欢组织培养研究初报

以银合欢(Leucaena leucocephla(Lamarck)de Wit)无菌实生苗子叶和胚轴切段为外植体,以MS为基本培养基,研究不同BA和NAA浓度组合对银合欢组织培养效果的影响。结果表明:愈伤组织诱导培养中,以子叶的培养反应性最好,其愈伤组织诱导率在各种组合中都达到100%,其中以附加0.1 mg/L NAA和2.5-7.0 mg/L BA效果最好;胚轴在添加0.1 mg/L NAA及3.0-4.5 mg/L BA的MS培养基上培养时愈伤组织诱导率较高。子叶愈伤组织在MS+3.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA的培养基中培养时芽分化率只有6.7%;胚轴愈伤组织则未能实现芽的分化。     

苦菜的组织培养与快速繁殖

通过对苦菜的组织培养 ,研究了外植体不同取材部位及不同激素种类、浓度对愈伤组织及芽诱导和增殖的影响。结果表明 :苦菜根的繁殖能力很强 ,但分化时间稍长 ;2 ,4 -D对愈伤组织的诱导能力较强 ,NAA对芽的诱导能力较强。同时 ,试验还筛选出了诱导愈伤组织的适宜培养基 :MS + 6 BA 2 .0mg/L + 2 ,4 -D 0 .2mg/L ;芽分化培养基 :MS + 6 BA 2 .0mg/L +NAA 0 .0 5mg/L ;继代培养基 :MS + 6 BA2 .0mg/L +NAA 0 .2mg/L。     

谷子茎尖愈伤诱导优化及转化影响因素浅析

目前谷子组织培养和转化研究相对较少,不同外植体愈伤诱导以及转化效率相对较低。采用不同谷子品种茎尖作为外植体进行愈伤诱导,分析影响愈伤形成的因素并对诱导条件进行优化,结果表明优化后胚性愈伤诱导率最高可达75.4%,愈伤分化率达15%左右。此外对根癌农杆菌介导转化愈伤进行GUS染色分析,结果表明转化愈伤GUS的瞬时表达效率最高在22.3%。由于用茎尖做外植体不受季节和地域的限制,初步研究结果表明优化后愈伤诱导率大大提高,初步GUS检测表明转化效率也有所提高。该结果为今后谷子组织培养和遗传转化研究提供参考数据。     

谷子茎尖愈伤诱导优化及转化影响因素浅析

目前谷子组织培养和转化研究相对较少,不同外植体愈伤诱导以及转化效率相对较低。采用不同谷子品种茎尖作为外植体进行愈伤诱导,分析影响愈伤形成的因素并对诱导条件进行优化,结果表明优化后胚性愈伤诱导率最高可达75.4%,愈伤分化率达15%左右。此外对根癌农杆菌介导转化愈伤进行GUS染色分析,结果表明转化愈伤GUS的瞬时表达效率最高达22.3%。由于用茎尖做外植体不受季节和地域的限制,初步研究结果表明优化后愈伤诱导率大大提高,初步GUS检测表明转化效率也有所提高。该结果为今后谷子组织培养和遗传转化研究提供参考数据。     

玉米自交系幼胚培养与基因枪转化研究

玉米自交系幼胚在添加 1～ 2mg/L 2 ,4-D的N6培养基上能够诱导形成不同类型的胚性愈伤组织。愈伤组织的诱导率与基因型和 2 ,4-D浓度有关 ,6个自交系的诱导率在 5 2 %～ 89%。将淡黄色颗粒状结构致密型愈伤组织在N6诱导培养基上继代培养 2 0个月 ,仍具有较强的分化能力。在附加 2mg/L 6 -BA和0 .2mg/LNAA的N6分化培养基上 ,有 2 7%～ 41%的愈伤组织分化成苗。通过基因枪轰击成功地将 pbarGUS基因转入玉米细胞 ,获得了大量的转化胚性愈伤组织。用 0 .4mol/L的甘露醇高渗处理幼胚 ,能显著提高pbarGUS基因在细胞中的表达 ,高渗处理转化率较对照提高了 3倍     

中华猕猴桃华优遗传转化系统建立研究

为了更好的利用遗传转化技术进行猕猴桃品种改良研究,以中华猕猴桃华优组培苗幼嫩叶片为材料, 研究了外植体分化不定芽再生途径所需的培养条件及转化效率提高方法。结果表明,在叶片不定芽诱导培养基中加 入浓度为0.75~1.0 mg/L 的TDZ 时,叶片愈伤发生率达85.7%~90.1%,不定芽发生率达41.8%~44.6%;在TDZ 1.0 mg/L 基础上,补充0.1~0.4 mg/L IAA 可使叶片愈伤发生率提高到96.7%~100%,不定芽发生率提高到67.4%~71.9 %; 在农杆菌侵染液与共培养基中同时加入75~100 滋mol/L 浓度的AS,可使GUS 瞬时表达率及卡那抗性芽发生率分别 提高至27.9%、14.5%;外植体被农杆菌侵染前,的预培养2~3 d有利于提高GUS 表达率与卡那抗性芽发生率。GUS 染色与PCR 扩增检测结果显示,Shiva A基因已转化至中华猕猴桃华优转基因植株。     

根癌农杆菌介导的甘蔗遗传转化体系的研究

采用根癌农杆菌介导法将苏云金氏芽孢杆菌毒蛋白B.t基因cryIA转入甘蔗胚性愈伤组织中,建立农杆菌转化甘蔗的遗传转化体系,获得13棵再生植株。经GUS及PCR检测,cryIA确实已转移到甘蔗幼苗中,GUS在再生植株中也得到瞬时表达。     

橡胶树HbHMGR1基因克隆及其愈伤组织转化

[目的]克隆橡胶树HbHMGR1基因,转化橡胶树易碎愈伤组织,为橡胶树遗传转化和品种改良打下基础.[方法]根据已经报道的HbHMGR1基因序列（NCBI登录号X54659.1）设计特异引物,通过RT-PCR克隆HbHMGR1基因,构建pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1植物表达载体.再用EHA105（携带pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1,内含NPTⅡ和uidA基因）侵染橡胶树易碎愈伤组织,数月筛选后对抗性易碎愈伤组织系进行GUS染色和分子检测.[结果]成功克隆了HbHMGR1基因,双酶切重组质粒、重组质粒的PCR扩增结果证明成功地构建了该基因的植物表达载体pCAMBI-A2301-35S-HbHMGR1.侵染后抗性橡胶树易碎胚性愈伤组织GUS检测为蓝色,且分子检测呈现阳性,共获得15个抗性易碎愈伤组织系.[结论]橡胶树HbHMGR1基因在愈伤组织阶段开始表达,有效提高了HbHMGR1基因在橡胶中的表达量.     

根癌农杆菌介导茶树转基因体系的建立

利用茶树[Camellia sinensis(L.)O.Kuntze]品种"农抗早"的叶片进行培养,诱导形成愈伤组织。选择生长旺盛、致密的愈伤组织块与根癌农杆菌EHA105进行共培养,通过潮霉素(Hygromycin)抗性筛选、GUS染色及PCR的验证,获得部分转基因愈伤组织。在添加100μmol·L-1的乙酰丁香酮(AS)处理后,转化率约为10%。同时试验结果证明,AS可以提高农杆菌的转化效率,增加渗透压却不能提高转化率。     

基因枪法导入Bar基因转化小麦幼胚的研究——抗性愈伤组织与再生植株的遗传转化

在前文研究基础上 ,轰击的 2 80 4个幼胚经 L - PPT筛选后共获得 2 5 9个抗性愈伤 ,对其中 2 0 0个抗性愈伤组织和再生的 32个植株 GU S gene的表达进行组织化学检测 ,以及再生植株的 PCR检测。研究结果表明 ,有 4 5个抗性愈伤组织呈 GUS阳性。32株再生植株中获得 4个抗性株系 ,经 X- Gluc染色 ,在花药中检测到 GU S基因表达 ,PCR检测也呈阳性 ,而在对照和其它再生植株中未发现 GU S和 BAR基因表达     

农杆菌介导的百合ACO反义基因遗传转化的研究

以东方百合‘索邦’(Liliumoriental‘Sorbonne’)无菌苗鳞茎、鳞片叶及愈伤组织为外植体,通过EHA105和GV3101两种根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株介导,将ACO反义基因导入东方百合"索邦"。结果表明,愈伤组织预培养7 d,侵染30 min,EHA105菌液浓度OD=0.8,共培养5 d,可获得7.14%的转化率。经GUS、PCR、PCR-Southern及基于梯状胶回收的PCR法检测证明ACO反义基因已转入转化植株基因组中。     

Studies on Genetic Transformatiom of Embryogenic Suspension Cultures of Sweetpotato

Genetic transformation of embryogenic suspension cultures of sweetpotato cv. Lizixiang wasconducted by using Agrobacterium tumefaciens strain A208SE harboring the binary vectors pROA93 with β-glucronidase (GUS) and neomycin phosphotransferase (NPT Ⅱ ) genes. The results indicated that embryogenicsuspension cultures precultured for 1 -3 d were suitable for the transformation. The optimal cocultivation timewas 4 - 5 d. The optimal concentration of kanamycin was 50-75 mg L-1 for suspension culture and 100 mg L-1for embryogenic callus proliferation and plant regeneration. The optimal concentration of carbencillin was 100mg L-1. Transgenic plants identified with GUS assays and PCR analyses were obtained.