铁皮石斛的组培技术研究

为了研究铁皮石斛最佳的组织培养方法,本试验以铁皮石斛带节茎段作为外植体,探寻铁皮石斛的最佳基本培养基,最优消毒时间,以及不同浓度的NAA和6-BA对腋芽诱导、丛芽增殖、生根壮苗的影响.结果表明:以铁皮石斛带节茎段作外植体时,最佳的基本培养基是1/2MS培养基,在1‰HgCl2中浸泡消毒的最优时间为10 min;诱导腋芽时以1/2MS+10 g·L-1蔗糖+0.6 mg·L-1 NAA+1.5 mg·L-16-BA为最佳培养基;诱导丛芽增殖的最佳培养基为1/2MS+0.6 mg·L-1 NAA+1.5 mg·L-16-BA;诱导生根的最佳培养基为1/2MS+0.5 mg·L-1 IBA+0.9 mg·L-1 NAA.     

铁皮石斛茎段快繁技术研究

为建立铁皮石斛快速繁殖体系,实验以其茎段为外植体材料,研究不同外源激素配比对铁皮石斛芽诱导增殖及生根的影响。结果表明,芽诱导增殖以MS+0.1 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-16-BA为最好,茎段外植体生长健壮,芽分化数和诱导率较高,诱导率可达86.7%,为茎段最适初代培养基;最适生根培养基为1/2 MS+NAA0.5 mg.L-1+0.5%活性炭。     

铁皮石斛种子快繁培养体系的优化

以铁皮石斛种子为基础材料,建立铁皮石斛快速成苗的组培技术体系.通过调整组织培养过程中的激素种类及浓度配比,找出不同生长阶段最适的培养基配方.结果表明,诱导种子萌发、原球茎的最适培养基配方为1/2MS+0.1 mg/L NAA,9～10 d时种子开始萌发,30 d后种子萌发率达94.4％.原球茎增殖与分化的最适培养基配方为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,15 d后原球茎增殖率为8.0％,55 d后分化率达73.6％.生根壮苗阶段的最适培养基为MS+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA,生根率达92.0％.研究结果为铁皮石斛快繁技术奠定了理论基础.     

铁皮石斛茎段原球茎的诱导、分化与植株再生

为建立铁皮石斛Dendrobium officinale茎段原球茎途径的快繁技术体系,以带腋芽的无菌茎段为材料,利用正交试验的方法,研究基本培养基、植物生长调节剂、蔗糖质量浓度和添加物对原球茎的诱导、增殖与分化和生根的影响。结果表明,原球茎诱导的最佳培养基为1/2MS+6-BA4mg·L~(-1)+NAA0.1mg·L~(-1);原球茎增殖与分化的最佳培养基分别为MS+蔗糖30g·L~(-1)和1/2MS+蔗糖10g·L~(-1)+马铃薯泥10%;生根的最佳培养基为1/2MS+NAA1mg·L~(-1)+马铃薯泥10%+香蕉泥10%,成功建立了铁皮石斛茎段从原球茎诱导到植株再生的组培技术体系。     

铁皮石斛组培快繁技术的研究

为了建立铁皮石斛快速繁殖体系,以其茎段为材料,研究了不同培养基组分、激素浓度对铁皮石斛增殖和生根的影响。结果表明:铁皮石斛在初代培养中用酒精消毒30s后再用0.1%升汞杀菌6min最为适宜;最适培养基为MS基本培养基;在MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA中铁皮石斛的增殖效果最佳,在MS培养基中添加3.0mg·L-1 IBA生根效果最好,生根率可达100%;试管苗移栽的最佳基质为苔藓,单独使用成活率可达90.6%。     

铁皮石斛茎段快繁技术研究

以铁皮石斛(Dendrobium officinale)带节茎段为外植体，比较了不同消毒方法、培养基、激素、天然有机添加物对丛生芽诱导、增殖和生根的影响，建立了铁皮石斛茎段无性快繁体系。结果表明:茎段外植体最佳消毒方法为 75% C2H6O 30 s+0.1% HgCl28min，污染率为 24.45%，发芽率为 62.22%；诱导腋芽的最佳激素组合为 2.0 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1NAA，腋芽诱导系数为 1.65；最适合铁皮石斛丛生芽增殖的培养基为 Hyponex2+1.5 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1 NAA+20%香蕉泥，增殖系数为 5.46；最佳生根激素组合为 1.0 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1IBA，生根率为 95%。     

野生湖北百合不定芽诱导及再生植株的建立

为加强野生湖北百合资源保存与利用,选用黔东南州野生湖北百合为材料,选用鳞茎及茎段为外植体,探讨不同浓度激素配比对其不定芽诱导、增殖及生根的影响。结果表明:诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA,但茎段诱导不定芽高于鳞片,出芽率分别为66.67%和59.63%,单块外植体出芽个数分别为2和1,且茎段污染率比鳞片的污染率低。茎段诱导最佳增殖培养基为MS+0.1mg·L-16-BA+1.0mg·L-1 NAA,增殖率为83.33%,平均增殖系数为2.11,其生长状况良好,为最佳增殖培养基。茎段诱导最佳生根培养基为1/2MS+0.3mg·L-1 NAA,诱导生根率高达93.33%,平均生根数为3.18。     

NAA和KT对铁皮石斛原球茎增殖与分化的影响

为探讨铁皮石斛原球茎再生的理想培养基,以铁皮石斛原球茎为试材,研究了NAA和KT对铁皮石斛原球茎增殖与分化的影响。结果表明：铁皮石斛原球茎增殖较理想的培养基为MS＋KT1.0 mg.L-1＋NAA0.5 mg.L-1。铁皮石斛原球茎分化较理想的培养基为MS＋KT 1.0 mg.L-1＋NAA 0.1 mg.L-1。     

铁皮石斛抗寒品种的快速繁殖

以铁皮石斛抗寒品种茎段为外植体,运用组织培养技术建立铁皮石斛无性快繁体系,筛选出铁皮石斛快繁的最佳培养基。结果显示,以铁皮石斛茎段为外植体诱导原球茎,最佳诱导培养基为MS+6-BA 2 mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1)+IBA 0.2 mg·L~(-1),诱导率为66.67%。原球茎最佳分化培养基为MS+6-BA 0.5mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1)+IBA 0.1 mg·L~(-1),苗整齐健壮,叶片大而浓绿。试管苗生根的最佳培养基为1/2 MS+IBA 0.2 mg·L~(-1)+NAA 0.3 mg·L~(-1),生根率为100%。驯化移栽基质为碎砖瓦15%+松树皮50%+刨花25%+羊屎10%。     

国兰“绿蕙红舌”的组织培养技术

采用不同培养基对国兰"绿蕙红舌"的种子进行组织培养试验研究,综合分析不同培养基配方在国兰"绿蕙红舌"组织培养过程中对种子萌发与原球茎诱导、原球茎继代增值、原球茎分化及生根壮苗的影响。结果表明,种子萌发与原球茎诱导最适宜培养基为MS+BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+水解酪蛋白100 mg·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎继代增值最适培养基为KC+BA0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+活性碳2g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎分化最适培养基为KC+BA1.0 mg·L-1L+NAA 0.2mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;生根壮苗最适培养基为1/2 MS+NAA 0.5mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1。以上培养基pH均为5.1～5.4。     

翅萼石斛组织培养及快繁技术研究

以翅萼石斛蒴果为外植体,通过对其种子无菌萌发和原球茎诱导、原球茎增殖及丛生芽诱导、生根壮苗以及移栽驯化的研究,建立翅萼石斛的组培快繁技术体系。结果表明:翅萼石斛种子萌发和原球茎诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖20 g/L;原球茎增殖和丛生芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖20g/L+活性碳1.0g/L,接种45 d后增殖系数约5.8个、生长情况良好;生根壮苗的培养基配方为MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+香蕉泥100 g/L+活性碳1.0 g/L,生根率达100%,根系及幼苗长势良好。桂林地区移栽驯化宜在3~4月进行,选择水苔做基质,60 d后成活率为76.7%。     

铁皮石斛种子试管苗的快速繁殖研究

为研究铁皮石斛种子试管苗的快速繁殖技术,以铁皮石斛的种子为外植体。在不同培养基、不同的激素组合进行诱导产生试管苗,用松树皮作为移栽基质。结果表明:铁皮石斛种子在不同激素的培养基上均能萌发;不同培养基对铁皮石斛原球茎的增殖、分化有明显差异,其顺序依次为改良MS>N6>MS>1/2N6>1/2改良MS>1/2 MS,以改良MS培养基最好;不同激素组合对铁皮石斛原球茎的增殖、分化有明显差异,其顺序依次为B5>B2>B3>B1>B4;不同激素组合对铁皮石斛生根有影响,其顺序依次为C2>C3>C1。因此,比较适合铁皮石斛种子萌发的激素是1/2MS+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L;适于铁皮石斛原球茎增殖、成苗的培养基及激素组合为改良MS+6-BA0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L;适于铁皮石斛原生苗生根的培养基为改良MS+ABT60.6 mg/L+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖15 g/L。在改良MS培养基中不加任何水果汁诱导铁皮石斛种子,获得了大量试管苗,移栽成活率达到90%以上。     

铁皮石斛组培诱导研究

利用植物组织培养技术,对铁皮石斛的种子及外植体进行组培诱导试验。结果表明:铁皮石斛种子诱导最佳增殖培养基配方为1/2MS+NAA0.2mg/L+马铃薯汁100mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂;外植体中茎段较适宜诱导,最佳培养基配方为MS+NAA1.0mg/L+BA1.0mg/L+马铃薯汁100mg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂。     

铁皮石斛毛状茎分化和生根试验

以铁皮石斛毛状茎为外植体,研究不同激素配比和不同外源添加物对铁皮石斛毛状茎分化和生根的影响。结果表明,铁皮石斛毛状茎最适宜分化培养基为MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA 0.03 mg·L-1,最适宜分化培养基的添加物为10%土豆提取液,最适宜生根培养基添加物为熟香蕉皮。     

铁皮石斛丛生芽增殖的均匀试验

通过均匀试验筛选出铁皮石斛丛生芽增殖的适宜培养基,采用U9(95)试验表,考察6-BA、NAA、KT等激素及其浓度对铁皮石斛丛生芽增殖的影响。运用SPSS 17.0软件进行统计学分析,并建立多元回归方程。结果表明,植物激素6-BA、NAA、KT对铁皮石斛丛生芽的增殖均有一定的影响,其中,6-BA>NAA>KT,当6-BA、NAA、KT浓度分别为2.7、0.1、0.1mg·L-1时,丛生芽的增殖系数最大。并分析了不同附加物培养基对铁皮石斛丛生芽增殖的影响,得到最优培养基配方为:1/2MS+2.7 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA+200 g·L-1土豆汁。     

石斛兰叶片再生体系的建立

以石斛兰叶片为材料,建立了叶片外植体的离体再生体系.结果表明:KC+4 mg·L-16-BA+1 mg·L-1NAA是石斛兰叶片诱导原球茎的最佳培养基,诱导率为11.99%;原球茎适宜的增殖培养基为KC+2 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA,增殖倍数达到8.02;分化培养基为1/2 MS+0.5 mg·L-16-BA;最佳的壮苗生根培养基为1/2 MS+1 mg·L-1NAA,最佳移栽基质为棕树皮,成活率达到93.33%.     

生长调节剂对铁皮石斛优化快繁体系的影响

以温室盆栽铁皮石斛茎切段为外植体,采用交叉分组设计试验方法,以MS+香蕉泥培养基,添加不同质量浓度NAA、IBA和6-BA诱导铁皮石斛丛生芽,观察对丛生芽增殖和生根的影响.结果表明:铁皮石斛丛生芽诱导培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;丛生芽增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L;生根壮苗培养基为1/2 MS+IBA 1.5 mg/L,移栽基质为珍珠岩+森林腐叶土+松针叶(1∶1∶1).     

铁皮石斛茎段类原球茎的诱导及植株再生

以铁皮石斛幼嫩的带节茎段为外植体,通过研究植物生长调节剂对类原球茎诱导、增殖和分化的影响,筛选出适宜铁皮石斛类原球茎植株高效再生的条件。结果表明:类原球茎诱导的最适培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L+土豆泥60 g/L+活性炭0.5 g/L+蔗糖25 g/L+琼脂6.5 g/L,茎段接种45 d后,类原球茎诱导率为97.78%;类原球茎增殖和分化的最适培养基为MS+6-BA 2.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L,培养30 d,增殖倍数为7.94,培养至60 d,丛生芽诱导率为97.33%;再生苗在MS+NAA 0.5 mg/L培养基中培养30 d,生根率达到100%。     

桔梗植株再生体系的建立及试管内开花现象

以桔梗种子无菌萌发的试管苗为材料,利用桔梗无菌苗叶片、茎段为外植体,建立了桔梗植株再生体系,并使桔梗组培苗在试管内开花。结果表明:叶片诱导最适培养基为1/2MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1,分化率为34.55%;茎段诱导最适培养基为1/2MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA0.2mg·L-1,分化率为23.21%;增殖最适培养基为1/2MS+6-BA0.3 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1,增值系数为10.35;生根最适培养基为1/2MS+NAA0.2 mg·L-1,平均生根率达83.51%,平均根长3.12 cm。桔梗组培苗开花最适培养基为1/2MS+NAA0.1mg·L-1。     

铁皮石斛的离体培养和快速繁殖

以野生铁皮石斛种子为外植体,研究了不同基础培养基、天然附加物和植物生长调节剂对铁皮石斛种子萌发、原球茎增殖与分化、试管苗生根的影响.结果表明,铁皮石斛种子萌发的适宜培养基为MS 0.5mg/L NAA 10%土豆汁;原球茎增殖与分化的适宜培养基为MS 0.5 mg/L 6-BA 0.1 mg/L NAA 10%土豆汁;试管苗生根的适宜培养基为MS 0.2 mg/L NAA 10%土豆汁.在此条件下建立的铁皮石斛快速繁殖体系,原球茎在增殖与分化培养基上培养3个月左右,可分化出大量高约1～2 cm的试管苗,转入生根培养基中培养3个月左右后诱导出大量根系,即可进行大田移栽.