中国部分地区圈养丹顶鹤饲料中真菌毒素污染分析

【目的】了解目前圈养丹顶鹤饲料受到真菌毒素污染的现状,为预防和控制丹顶鹤饲料真菌毒素污染提供理论依据。【方法】抽样采集东北、华北、华东8家丹顶鹤饲养机构的62份饲料样品,采用高效液相色谱法测定其中真菌毒素含量。【结论】3个不同地区丹顶鹤饲料中AFB1、DON、ZEN、T-2、OTA的平均含量分别为7.62、871.49、616.34、65.62和14.50μg/kg。其中华东地区饲料中AFB1的水平显著高于东北和华北地区(P<0.05),东北地区饲料中T-2的浓度显著高于华北地区(P<0.05)。在污染率方面,3个地区DON和ZEN检出率较高,均达到85%以上。在混合污染方面,98.39%的被检样品中含有两种及两种以上毒素。东北地区含有全部5种被检毒素的饲料比例最高;华北、华东地区污染DON+ZEN+T-2+OTA的饲料比例最高。【结论】所有饲料样品中,AFB1、DON、ZEN、T-2和OTA的污染率分别是43.54%、90.32%、93.55%、69.35%、74.20%。其中,AFB1、DON、ZEN的超标率分别是3.23%、16.13%、41.94%,T-2和OTA没有超标。在混合污染方面,抽检的3个地区饲料均较为严重。     

天津地区猪饲料中霉菌毒素污染调查

为了解天津及周边地区养猪场饲料中霉菌毒素含量及污染情况,笔者于2016年9月—2017年8月从天津市9个区县及周边的河北部分地区采集265份猪饲料及饲料原料,利用直接竞争酶联免疫吸附试验法分别对样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、呕吐毒素含量进行测定。结果显示:猪饲料及饲料原料中霉菌毒素检出率为23.77%～96.98%,且96.98%的猪饲料及饲料原料受到2种及以上霉菌毒素污染。4种霉菌毒素中,呕吐毒素污染最为严重,超标率为29.81%;其次为玉米赤霉烯酮,超标率为2.26%;黄曲霉毒素B1污染较轻,超标率仅1.13%;样品中未检出T-2毒素超标。     

党参外源污染真菌的组成及其产毒特性

【目的】研究药材党参外源污染真菌的组成及分析产毒真菌。【方法】采用平板稀释法分离党参表面外源真菌、形态特征和序列分析方法对菌株进行鉴定及高效液相色谱-质谱联用技术对产毒真菌进行检测。【结果】党参药材外源污染以曲霉Aspergillus为主,青霉Penicillium次之;曲霉属中主要是以塔宾曲霉A. tubingensis和烟曲霉A. fumigatus为优势菌,青霉主要是以橘青霉P. citrinum为优势菌。分离的外源污染真菌中共筛选出3株产毒真菌,均鉴定为黄曲霉A. flavus。黄曲霉GXDC1-5产生黄曲霉毒素B1(AFB1),浓度为11.91 ng/m L;黄曲霉HBDC1-5中产生AFB1和AFB2,浓度分别为9.28和1.53 ng/m L;黄曲霉YNDC1-5产生AFB1、AFB2和AFG2,浓度分别为76.09、2.36和1.49 ng/m L。【结论】从党参的表面分离出了3株产黄曲霉毒素Aflatoxin的黄曲霉。     

东北地区不同饲料原料中霉菌毒素含量的测定

采用酶联免疫吸附法测定东北地区饲料原料中6种霉菌毒素(黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉毒素A、T-2毒素)含量,了解东北地区饲料原料中霉菌毒素污染情况。采集黑龙江、吉林地区玉米(60份)、DDGS(12份)、玉米蛋白粉(10份)、玉米胚芽粕(8份)、玉米蛋白饲料(11份)、饼粕类(15份)等饲料原料共116份,进行6种霉菌毒素测定。结果表明,样品中6种霉菌毒素污染情况较普遍,特别是玉米副产品(DDGS、玉米蛋白粉、玉米蛋白饲料)中霉菌毒素污染较严重,其中玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和伏马毒素含量高,超标率高。     

东北地区不同饲料原料中霉菌毒素含量的测定

采用酶联免疫吸附法测定东北地区饲料原料中6种霉菌毒素(黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉毒素A、T-2毒素)含量,了解东北地区饲料原料中霉菌毒素污染情况.采集黑龙江、吉林地区玉米(60份)、DDGS(12份)、玉米蛋白粉(10份)、玉米胚芽粕(8份)、玉米蛋白饲料(11份)、饼粕类(15份)等饲料原料共116份,进行6种霉菌毒素测定.结果表明,样品中6种霉菌毒素污染情况较普遍,特别是玉米副产品(DDGS、玉米蛋白粉、玉米蛋白饲料)中霉菌毒素污染较严重,其中玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和伏马毒素含量高,超标率高.     

2010年亚洲-大洋洲地区饲料中不同霉菌毒素共存及其含量的相关性

研究对2010年采自亚洲-大洋洲地区的1468个饲料样本进行分析,分别测定其中的黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,伏马菌素B1、B2,玉米赤霉烯酮,赭曲霉毒素A和呕吐毒素。试验测定的样本具有多样性,包括谷物、玉米、小麦和大米加工副产物、豆粕、玉米蛋白粉、干酒糟可溶物、秸秆、青贮饲料以及饲料成品。试验样品使用高效液相色谱-紫外检测器测定。研究表明,黄曲霉毒素B1、B2和伏马菌素B1、B2的检出呈现较高的正相关性。呕吐毒素和玉米赤霉烯酮的相关性以及赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素的相关性较低。单个毒素之间的相关性很大程度上取决于商品本身。试验结果表明,只有一种霉菌毒素污染饲料比较罕见,一般是多种毒素同时污染饲料并给家畜带来危害。     

2013年四川省饲料原料中霉菌毒素污染情况调查

为了解2013年四川省饲料原料受霉菌毒素的污染情况,采集四川省饲料原料120个,采用酶联试剂盒和液质联用仪两种方法,测定其中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、赭曲霉毒素A和T-2毒素的含量。结果表明,四川省饲料原料中霉菌毒素超标率均低于全国平均水平,玉米赤霉烯酮和呕吐毒素污染程度相对较重,黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A和T-2毒素超标率为0。     

荆州周边地区猪场饲料真菌及霉菌毒素的检测

以湖北荆州周边地区3个猪场所使用的饲料为研究对象,采用吸水纸检测法对饲料中的真菌种类进行了调查,并采用真菌毒素ELISA试剂盒对饲料样品中黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、呕吐毒素和伏马毒素进行了检测,分析了饲料被污染的程度。结果表明,所检测的配合饲料、全价饲料、玉米和豆粕普遍受到了以上6种霉菌毒素的污染。饲料样品中玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素的检出率高达100%,黄曲霉毒素B_1和T-2毒素的检出率平均在80%以上。     

拉萨地区酸奶质量安全的污染因素评价与分析

【目的】全面分析评价影响西藏拉萨四县(区)(城关区、墨竹工卡县、林周县和当雄县)不同方式生产酸奶的质量安全关键污染因素,为提高拉萨酸奶质量安全水平、强化质量安全监管提供数据支撑。【方法】2018年从拉萨四县(区)分别采集不同模式生产的酸奶样品106个,其中:林周县采样22个,城关区采样40个,墨竹工卡县采样23个,当雄县采样21个;按生产模式,企业采样8个,小作坊采样54个,家庭自产采样44个。分别使用电感耦合等离子体质谱法、HPLC-MS法、微生物培养与分离法对酸奶样品中5种重金属、黄曲霉毒素M1以及6种微生物进行检测分析与质量安全评价。【结果】106个酸奶样品中霉菌污染严重,且超标率为46.23%;未检出志贺氏菌Shigella、沙门氏菌Salmonella和黄曲霉毒素;小作坊生产的酸奶中金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus检出率最高,检出率为25.93%;农牧民自身生产、民间小作坊和企业产业化生产酸奶中Pb是主要重金属污染物,污染物贡献率达42.5%;当雄县酸奶中重金属Cr含量较其他三县(区)高,超标率为19.0%;城关区酸奶中重金属Pb、As含量较高,超标率分别为15.0%和2.5%;Pb也是林周县、城关区、墨竹工卡县酸奶中的主要重金属污染物,其中城关区Pb的污染物贡献率最高,达54.02%。【结论】拉萨地区酸奶重金属和霉菌污染状况突出,应当引起重视;西藏特殊的自然环境不利于饲料霉变,因此未检出黄曲霉毒素。     

黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选及鉴定

【目的】筛选能降解黄曲霉毒素B1（AFB1）的细菌,以期在该毒素的生物脱毒中得到应用。【方法】以香豆素为惟一碳源和能源进行AFB1降解菌株的初筛,之后将初筛的10株菌分别降解浓度为100μg•kg-1的AFB1。【结果】筛选出的NMO-3菌株降解AFB1能力达85.7%,显著高于其它菌株（P＜0.01）。从形态、生理生化反应以及16S rDNA序列比对等方面分析,最终确定NMO-3菌株为嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas sp.）。【结论】利用香豆素作为惟一碳源和能源筛选出了黄曲霉毒素降解菌株,后期试验证明活菌制剂在2.56×1010CFU/ml剂量以下不会引起急性毒性反应,用65%硫酸铵提取的蛋白（酶）具有AFB1降解能力。     

不同饲料原料中胆碱生物学效价的评定

【目的】研究采用斜率比法对玉米、豆粕、菜粕和玉米酒精糟（distillers dried grains,DDGS）中胆碱的生物学效价（the relative bioavailability,RBV）进行评估。【方法】试验选用１日龄爱拔益加（ＡＡ）肉仔鸡132只,随机分为22个处理组,其中S1-S6组为标准曲线组,A1-A4组为玉米日粮组,B1-B4组为豆粕日粮组,C1-C4为菜粕日粮组,D1-D4为DDGS日粮组,每个处理6个重复,每个重复1只鸡。基础日粮采用醇提法将玉米、豆粕、菜粕和DDGS中的胆碱洗脱后配制而成。在基础日粮中添加不同剂量的氯化胆碱配制6种梯度的标准日粮,另将4种待测原料分别以10%、20%、40%和100%的比例替换洗脱过的相应原料配制试验日粮。分别以1-21日龄的平均日增重、肝脏脂肪含量和全血胆碱浓度为衡量指标,以比斜率法计算待测原料的相对生物学利用率。【结果】以平均日增重为指标,玉米、豆粕、菜粕和DDGS中胆碱RBV分别为63.95%、104.7%、37.98%和72.09%;以全血胆碱浓度为指标,玉米、豆粕、菜粕和DDGS中胆碱RBV分别为94.73%、184.11%、23.63%和134.23%。【结论】以日增重和全血胆碱含量为指标衡量饲料原料中胆碱生物学效价是可行的,但由于选择指标的不同,所得数值亦有所差异;4种参试原料中胆碱的相对生物学利用率从高到低依次为豆粕、 DDGS、玉米和菜粕。     

我国畜禽饲料资源中常量元素钙含量分布的调查

目的 调查我国畜禽饲料资源中钙含量的分布,为合理利用饲料资源及精准配制畜禽饲粮提供科学依据。方法 运用统一的数据采集规范,采集了全国31个省（市、区）的37种3 862个饲料原料样品,经微波消解后,使用IRIS IntrepidⅡ等离体子发射光谱仪对其钙含量进行了测定。结果 谷物籽实中平均钙含量为457 mg·kg ^-1（范围74.5—832 mg·kg ^-1）,其中大麦的钙含量最高,玉米最低,变异系数范围为21.2%—85.3%;谷物籽实加工副产品中平均钙含量为1 090 mg·kg ^-1（范围为93.4—3 264 mg·kg ^-1）,其中小麦DDGS的钙含量最高,碎米最低,变异系数范围为19.5%—142%;植物性蛋白饲料中平均钙含量为3 987 mg·kg ^-1（范围为1 742—7 909 mg·kg ^-1）,其中菜籽粕的钙含量最高,花生粕最低,变异系数范围为0.92%—34.6%;动物性蛋白饲料中平均钙含量为14 448 mg·kg ^-1（范围为115—50 007 mg·kg ^-1）,其中鱼粉的钙含量最高,血球蛋白粉最低,变异系数范围为25.0%—239%;秸秆类饲料中平均钙含量为5 969 mg·kg ^-1（范围为1 931—13 524 mg·kg ^-1）,其中甘薯藤的钙含量最高,小麦秸最低,变异系数范围为27.6%—39.0%;牧草类饲料中平均钙含量为6 667 mg·kg ^-1（范围为4 157—13 963 mg·kg ^-1）,其中苜蓿的钙含量最高,羊草最低,变异系数范围为30.3%—94.6%;矿物质饲料中平均钙含量为30%（19.2%—41.2%）,其中贝壳粉的钙含量最高,骨粉最低,变异系数范围为2.67%—24.0%。各类饲料原料中钙含量分布规律为：矿物质饲料＞动物性蛋白饲料＞牧草类饲料＞秸秆类饲料＞植物性蛋白饲料＞谷物籽实加工副产品＞谷物籽实。同一类别不同饲料原料间钙含量差异显著（P＜0.05）。以省（区）为单位,对不同地区玉米、小麦和豆粕中钙含量进行比较,表明不同地区玉米和豆粕中钙含量存在显著的差异（P＜0.05）,而小麦中钙含量受地区性的影响较小（P＞0.05）。各省（区）玉米的平均钙含量范围为48.1—155 mg·kg ^-1,其中山西省玉米钙含量最高,辽宁省最低,变异系数范围为20.1%—321%;各省（区）小麦的平均钙含量范围为362—590 mg·kg ^-1,其中山西省小麦钙含量最高,湖北省最低,变异系数范围为8.29%—66.1%;各省（区）豆粕的平均钙含量范围为3 001—4 153 mg·kg ^-1,其中山西省豆粕钙含量最高,江苏最低,变异系数范围为1.30%—21.4%。结论 我国饲料原料中钙含量受种类及地区性影响较大。本研究结果对于生产者了解饲料原料中实际钙含量,精准配制饲粮,以确保动物的健康及高效生产具有重要意义。     

大肠酶对猪饲料酶水解物能值的影响及与非淀粉多糖组分的关系

【目的】研究大肠酶对单胃动物仿生消化系统测试猪饲料原料的体外干物质消化率（DMD）和酶水解物能值（EHGE）的影响,并分析不同大肠酶条件下非淀粉多糖（NSP）组分与DMD和体外总能消化率（GED）的关系,为完善体外模拟胃-小肠-大肠三步消化方法提供参考依据。【方法】采用单因素完全随机设计,共设4个处理,在单胃动物仿生消化系统模拟饲料原料胃和小肠消化后,分别使用对照组（去离子水）、纤维素酶、Viscozyme酶和仿生酶（由纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶和果胶酶组成）模拟大肠阶段的消化。每个处理设5个重复,每个重复1根消化管,分别测定玉米、大豆粕、小麦麸、玉米DDGS、苜蓿草粉和大豆皮的DMD、GED和EHGE。并使用乙酸酐衍生化气相色谱法测定6种饲粮原料NSP含量和组分。分析饲料原料NSP组分与DMD及GED的相关关系。 【结果】（1）在对照组中,玉米的DMD最高,达到了81.51 %,相应的EHGE为15.39 MJ·kg^-1,而大豆皮的DMD最低,只有10.60 %,相应的EHGE只有2.42 MJ·kg^-1。（2）3种模拟大肠酶均显著提高了玉米、大豆粕和大豆皮的DMD（P＜0.01）,提高了大豆粕和大豆皮的EHGE（P＜0.01）。但纤维素酶作用下苜蓿草粉、玉米DDGS的DMD和EHGE与对照组差异不显著,Viscozyme酶作用下小麦麸、玉米DDGS的DMD和EHGE与对照组差异不显著（P＞0.05）。仿生酶显著提高了6种饲料原料的DMD（P＜0.01）,显著提高了除玉米DDGS外的其他5种饲料原料的EHGE（P＜0.01）。（3）不同的大肠酶对不同饲料原料体外消化率的提升程度不同。在6种原料中,纤维素酶对小麦麸的DMD和EHGE提升程度最高,分别达到了5.89 %和1.03 MJ·kg^-1,而只使大豆粕的DMD和EHGE提高了1.26 %和0.36 MJ·kg^-1;Viscozyme酶对大豆皮体外消化率的提升程度最高,分别使其DMD和EHGE提高6.01%和1.02 MJ·kg^-1。仿生酶对小麦麸的DMD和EHGE的提升程度最高,达到了6.59%和1.37 MJ·kg^-1。（4）6种饲料原料的可溶性非淀粉多糖（SNSP）的含量均低于不溶性非淀粉多糖（INSP）,玉米的总非淀粉多糖（TNSP）含量最低（8.59%）,大豆皮的TNSP含量最高（75.72%）,各原料的NSP主要由阿拉伯糖、木糖、甘露糖和葡萄糖组成,但不同原料中4种单糖含量存在差异。（5）6种饲料原料的SNSP、INSP以及TNSP含量与DMD、GED均呈显著的负相关（P＜0.05）。仿生酶作用下DMD与TNSP含量的相关性（R ²=0.95, P＜0.01）高于纤维素酶（R ²=0.94, P＜0.01）和Viscozyme酶（R ²=0.93, P＜0.01）。同时,仿生酶作用下GED与TNSP含量的相关性（R ²=0.89, P＜0.01）也高于纤维素酶（R ²=0.86, P＜0.01）和Viscozyme酶（R ²=0.81, P＜0.01）。【结论】仿生酶在体外模拟猪大肠消化过程中,对饲料的消化作用优于纤维素酶和Viscozyme酶,可作为单胃动物仿生消化系统体外模拟猪消化中大肠阶段的模拟消化酶。     

我国畜禽饲料资源中微量元素铜含量分布的调查

目的 研究我国不同地区间各种饲料原料中铜含量分布情况,以及我国畜禽基础饲粮中铜水平,从而为饲粮中合理添补铜提供依据。方法 对采自全国31个省、直辖市和自治区的7大类（谷物籽实、谷物籽实加工副产品、植物性蛋白饲料、动物性蛋白饲料、牧草类、秸秆类和矿物质饲料）37种饲料原料共3 903个饲料样品,经预处理后用MARS6高通量密闭微波消解系统进行微波消解,然后用IRIS Intrepid II等离子体发射光谱仪测定其铜含量。用国家标准物质猪肝粉或黄豆粉作为参照标准,以保证测定结果的可靠性。结果 饲料原料中铜含量测定结果表明：谷物籽实（包括玉米、小麦、稻谷和大麦）平均铜含量为3.95 mg·kg ^-1（范围为2.50—5.34 mg·kg ^-1）;谷物籽实加工副产品（包括玉米蛋白粉、玉米DDGS、玉米胚芽粕、次粉、小麦麸、小麦DDGS、碎米和米糠）平均铜含量为7.16 mg·kg ^-1（范围为1.62—12.13 mg·kg ^-1）;植物性蛋白饲料（包括膨化大豆、大豆粕、菜籽粕、棉籽粕、花生粕、亚麻粕和葵花粕）平均铜含量为16.37 mg·kg ^-1（范围为6.45—30.40 mg·kg ^-1）;动物性蛋白饲料（包括鱼粉、肉粉、水解羽毛粉、肠膜蛋白粉、血浆蛋白粉和血球蛋白粉）平均铜含量为11.14 mg·kg ^-1（范围为1.90—20.04 mg·kg ^-1）;牧草类（包括羊草、黑麦草、苜蓿和青贮玉米）平均铜含量为7.85 mg·kg ^-1（范围为4.31—9.92 mg·kg ^-1）;秸秆类（包括玉米秸秆、小麦秸秆、稻秸和甘薯藤）平均铜含量为7.50 mg·kg ^-1（范围为3.38—13.89 mg·kg ^-1）;矿物质饲料（包括石粉、磷酸氢钙、骨粉和贝壳粉）平均铜含量为6.79 mg·kg ^-1（范围为3.39—11.45 mg·kg ^-1）。这37种饲料原料的平均铜含量范围为1.62—30.40 mg·kg ^-1,而各类饲料原料铜含量分布规律是：植物性蛋白饲料（16.37 mg·kg ^-1）＞动物性蛋白饲料（11.14 mg·kg ^-1）＞牧草类饲料（7.85 mg·kg ^-1）＞秸秆类饲料（7.50 mg·kg ^-1）＞谷物籽实加工副产品（7.16 mg·kg ^-1）＞矿物质饲料（6.79 mg·kg ^-1）＞谷物籽实（3.95 mg·kg ^-1）。以省（区）为单位比较,发现不同地区间的玉米、小麦和大豆粕的铜含量差异显著（P＜0.05）。四川省玉米和大豆粕铜含量最高（分别为2.97和15.74 mg·kg ^-1）,内蒙古自治区最低（分别为1.66和11.72 mg·kg ^-1）;甘肃省小麦铜含量最高（5.61 mg·kg ^-1）,河北省最低（4.02 mg·kg ^-1）。根据全国各地猪、鸡常用的152个饲料配方计算出基础饲粮中可提供的铜含量为5.07—6.54 mg·kg ^-1,如根据我国及美国NRC猪、鸡饲养标准中铜营养需要量的要求,基础饲粮中的铜含量基本可提供猪的铜营养需要,可提供鸡大部分铜的营养需要,但上述估算尚未考虑不同饲料原料中铜的利用率。结论 我国不同种类和不同地区饲料原料中铜含量差异较大,全国猪、鸡常用基础饲粮配方中铜含量可提供猪、鸡大部分的铜营养需要量。因此,建议在配制饲粮时,应充分考虑不同地区基础饲粮中的铜含量及其利用率,精准配制饲粮,以满足畜禽高效生产需要,同时减少铜的添加和排放对环境的污染。     

我国畜禽饲料资源中微量元素硒含量分布的调查

目的 研究我国不同地区间各种饲料原料中硒含量分布情况,以及我国畜禽基础饲粮中硒水平,从而为饲粮中合理添补硒提供依据。方法 对采自全国31个省、直辖市和自治区的7大类（谷物籽实、谷物籽实加工副产品、植物性蛋白饲料、动物性蛋白饲料、牧草类、秸秆类和矿物质饲料）37种饲料原料共3 785个饲料样品,经预处理后用MARS6高通量密闭微波消解系统进行微波消解,然后用离子色谱-电感耦合等离子体-质谱联用仪(IC-ICP-MS)进行测定。用国家标准物质猪肝粉作为参照标准,以保证测定结果的可靠性。结果 饲料原料中硒含量测定结果表明：谷物籽实（包括玉米、小麦、稻谷和大麦）平均硒含量为0.037 mg·kg ^-1（范围为0.025—0.044 mg·kg ^-1）;谷物籽实加工副产品（包括玉米蛋白粉、玉米DDGS、玉米胚芽粕、次粉、小麦麸、小麦DDGS、碎米和米糠）平均硒含量为0.071 mg·kg ^-1（范围为0.034—0.124 mg·kg ^-1）;植物性蛋白饲料（包括膨化大豆、大豆粕、菜籽粕、棉籽粕、花生粕、亚麻粕和葵花粕）平均硒含量为0.209 mg·kg ^-1（范围为0.097—0.502 mg·kg ^-1）;动物性蛋白饲料（包括鱼粉、肉粉、水解羽毛粉、肠膜蛋白粉、血浆蛋白粉和血球蛋白粉）平均硒含量为1.217 mg·kg ^-1（范围为0.611—2.220 mg·kg ^-1）;牧草类（包括羊草、黑麦草、苜蓿和青贮玉米）平均硒含量为0.062 mg·kg ^-1（范围为0.057—0.070 mg·kg ^-1）;秸秆类（包括玉米秸秆、小麦秸秆、稻秸和甘薯藤）平均硒含量为0.069 mg·kg ^-1（范围为0.033—0.128 mg·kg ^-1）;矿物质饲料（包括石粉、磷酸氢钙、骨粉和贝壳粉）平均硒含量为0.352 mg·kg ^-1（范围为0.085—0.544 mg·kg ^-1）。这37种饲料原料的平均硒含量范围为0.025—2.220 mg·kg ^-1,而各类饲料原料硒含量分布规律是：动物性蛋白饲料（1.217 mg·kg ^-1）＞矿物质饲料（0.352 mg·kg ^-1）＞植物性蛋白饲料（0.209 mg·kg ^-1）＞谷物籽实加工副产品（0.071 mg·kg ^-1）＞秸秆类（0.069 mg·kg ^-1）＞牧草类（0.062 mg·kg ^-1）＞谷物籽实（0.037 mg·kg ^-1）。以省（区）为单位比较,发现不同地区间的玉米、小麦和大豆粕的硒含量差异显著（P＜0.05）;所测省（区）玉米样品全部缺硒（≤0.05 mg·kg ^-1）,其中有61.1%的省（区）严重缺硒（≤0.02 mg·kg ^-1）;四川省小麦严重缺硒（≤0.02 mg·kg ^-1）;四川省和内蒙古自治区豆粕缺硒（0.03—0.05 mg·kg ^-1）,河南省豆粕临界缺硒（0.06—0.09 mg·kg ^-1）。根据全国各地猪、鸡常用的153个饲料配方计算出基础饲粮中可提供的硒含量为0.06—0.11 mg·kg ^-1,如根据我国猪、鸡饲养标准中硒含量的要求,基础饲粮中的硒含量仅能提供猪、鸡硒营养需要的约1/4。结论 我国不同种类和不同地区饲料原料中硒含量差异较大,全国猪、鸡常用基础饲粮配方中硒含量可提供硒营养需要量的约1/4。因此,在实际生产中,建议参考不同地区饲料原料中硒含量分布调查数据,精准配制饲粮,以满足畜禽高效生产的需要及减少硒的添加量。     

花生黄曲霉毒素平衡取样-随机森林风险预警模型的应用研究

【目的】 花生极易受到黄曲霉毒素污染,本研究拟在前期创建的花生黄曲霉毒素平衡取样-随机森林预测预警模型基础上,通过系统性应用研究,明确模型主要技术参数与实际应用效果,为预测评估我国产后花生黄曲霉毒素风险提供关键技术支撑。【方法】 利用前期建立的花生黄曲霉毒素平衡取样-随机森林风险预警模型,选择1个地理变量（纬度）和3个气候变量（收获前一个月8：00—20：00降水量、平均气压和日平均气温）作为模型数据的关键输入参数,预测2019和2020年我国花生主产区153个主产市（县）黄曲霉毒素污染风险。采用免疫亲和层析-高效液相色谱-荧光检测法,测定上述产区共2 164份花生的黄曲霉毒素含量,获得这些产区花生黄曲霉毒素污染数据。根据模型预测风险与实际测定结果,计算模型应用的准确率、精准率、灵敏度和假阳性率,明确应用效果。【结果】 累计预测的153个市（县）中,共预测出125个低风险区,其中116个与实际测定评估结果相吻合,有9个实测评估高风险产区被预测误判为低风险产区（假阴性）。共预测出28个花生黄曲霉毒素污染高风险产区,其中15个与实际测定评估结果相吻合,有13个实测评估低风险产区被预测误判为高风险产区（假阳性）。该模型预测结果的总体准确率达到85.61%,假阴性率为8.49%,假阳性率为5.88%。【结论】 花生黄曲霉毒素平衡取样-随机森林风险预警模型能够较好地预测出我国产后花生黄曲霉毒素污染风险,为科学指导我国产后花生收储与利用,减少黄曲霉毒素污染损失和保障农产品质量安全提供技术支撑。     

噬菌体展示纳米抗体模拟黄曲霉毒素抗原的活性表征

【目的】笔者实验室前期免疫并构建噬菌体展示纳米抗体库,应用此抗体库筛选、制备可以用作黄曲霉毒素无毒替代抗原的纳米抗体。本研究旨在探明已筛选出的噬菌体展示纳米抗体Phage 2-5用作黄曲霉毒素替代抗原的活性,为后续纳米抗体的合成以及黄曲霉毒素绿色免疫分析方法的建立奠定基础。【方法】前期,笔者实验室对羊驼免疫黄曲霉毒素抗原（AFB1-BSA）,经过5次免疫后,取血,提取RNA,反转录为cDNA,并采用PCR技术对抗体可变区VHH区域进行扩增,与载体pComb3X偶联,构建噬菌体展示纳米抗体库;经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与黄曲霉毒素竞争结合抗黄曲霉毒素单克隆抗体1C11的噬菌体展示纳米抗体Phage 2-5。本研究通过将抗黄曲霉毒素单克隆抗体1C11固定在酶标板上,以噬菌体展示纳米抗体Phage2-5作为竞争抗原,与反应体系中的游离黄曲霉毒素竞争结合抗体,构建酶联免疫分析（ELISA）体系,检测游离黄曲霉毒素含量,并分别对该方法的灵敏度、交叉反应率、缓冲液和样品基质对反应体系的影响进行测定。【结果】采用棋盘法确定了抗体最佳包被浓度为1.25 mg·mL-1,噬菌体最佳使用浓度为5´1011 pfu/mL。在最优条件下建立基于噬菌体展示纳米抗体Phage2-5的ELISA法,对黄曲霉毒素B1的IC50值为0.054 ng·mL-1,对黄曲霉毒素B2、G1、G2、M1的交叉反应率分别为38.6%、70.1%、14.5%、14.6%;反应最高耐受甲醇浓度为20%;当pH值为7.0时,反应灵敏度最高,升高或降低pH对反应灵敏度均有影响;盐离子浓度对反应灵敏度影响不大,反应体系在5´PBS的环境下仍能保持较高活性,但纯水溶液不利于反应的进行;因此,该反应的最佳反应缓冲液是pH值为7.0的0.01 mol·L-1 磷酸盐缓冲液（PBS）,花生、大米、玉米基质对反应体系无显著影响。【结论】噬菌体展示纳米抗体Phage2-5具备良好的模拟黄曲霉毒素抗原的生物活性,用作替代抗原建立的免疫分析方法灵敏度高、甲醇耐受能力强,并且样品基质效应不明显,具有进一步研制黄曲霉毒素模拟抗原的前景。     

中国8个不同来源DDGS蛋公鸡氨基酸代谢率及评价方法相关性研究

 【目的】寻求快速评价DDGS氨基酸代谢率的方法,为家禽生产中合理利用DDGS资源提供科学依据。【方法】选择45只、（2.6±0.2）kg的健康成年海兰褐蛋种公鸡,采用2×9不完全拉丁方设计,随机分为9个处理组,每组5个重复,每个重复1只鸡,进行2期代谢试验。用无氮饲粮法测定了中国8个不同来源DDGS（A—H）的氨基酸代谢率,并研究其与DDGS的色泽和水溶物含量的相关性。【结果】8个DDGS的总氨基酸表观代谢率和真代谢率范围分别为60.18%—74.06%和74.13%—89.15%,赖氨酸表观代谢率低于60%,真代谢率为63.08%—82.07%。DDGS的水溶物含量与赖氨酸真代谢率存在高度正相关（R²=0.7601）。【结论】不同来源DDGS间的各种氨基酸代谢率有不同程度的差异,通过测定DDGS的水溶物含量可以初步估测鸡赖氨酸真代谢率。     

玉米DDGS中抗生素残留分析

【目的】玉米发酵生产燃料乙醇的副产物酒糟蛋白饲料（DDGS）常作为蛋白质替代饲料广泛用于动物生产中。随着DDGS产业链的扩大,其生产过程中所带来的抗生素的残留问题应该得到重视,但目前关于DDGS中抗生素的残留研究报道较少。对全国经营和使用环节的玉米DDGS进行抽样调查,对70种抗生素的残留含量进行分析测定,以了解目前中国饲料用DDGS中抗生素的残留情况。【方法】首先利用四级杆飞行时间质谱（quadrupole time-of-flight mass spectrometry,QTOF）建立了大环内酯类、氟喹诺酮类、磺胺类、喹恶啉类、β-内酰胺类、林可胺类、四环素类、酰胺醇类等共70种抗生素药物基于质量数、保留时间和特征碎片离子的数据库。在全国9个省、市、自治区抽取经营和使用环节的玉米DDGS样品74批次,筛查其中可能含有的抗生素药物。样品的前处理：取一定量的均质样品,加入乙腈和水的混合溶液进行提取,经涡旋、震荡、离心后,取上清液过NH2固相萃取柱,收集淋洗液N2气浓缩至一定体积,过0.22 μm滤膜。样品的分析：首先利用QTOF建立的筛查列表对样品DDGS中可能残留的抗生素进行初步筛选,以确定残留抗生素的种类,而后采用液相色谱串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）对发现疑似含有抗生素残留的样品进行定量分析,以确定抗生素的残留量。【结果】欧盟指令2002/657/EC规定了在应用质谱仪对目标化合物进行确证时的准则。一个母离子为2分,一个子离子为2.5分。在本试验条件下所有抗生素的检测结果都能达到这个要求,符合对目标化合物的确证准则。经QTOF定性分析后,抽样的所有DDGS中有一批次样品中含有抗生素残留,种类为甲氧苄啶。样品母离子峰、二级特征离子碎片、出峰时间与标准品完全一致,样品和标准品所有提取碎片离子及离子丰度比一致。利用LC-MS/MS对残留抗生素进行定量分析后,确定其残留量为107.7 ng•g-1。甲氧苄啶在添加浓度为10-1 000 ng•mL-1,平均添加回收率为75.2%-97.9%,线性相关系数大于0.99,日内标准偏差为2.8%-5%,日间标准偏差为8%-10%。【结论】利用QTOF建立DDGS中抗生素类药物的定性筛选方法可作为玉米DDGS中残留抗生素快速筛查方法。存在残留的甲氧苄啶抗生素,可能在玉米发酵生产DDGS前被添加,目的是抑制有害微生物的生长繁殖。抽样分析结果表明,目前中国玉米DDGS中抗生素残留的种类较少、残留量也较低,但DDGS中抗生素残留情况仍不容忽视,相关部门也未给出DDGS发酵过程中可使用的抗生素的种类范围、使用限量以及使用规范。此外,还应该研究直接采用QTOF进行定量分析的方法,以及研究包括维吉尼亚霉素在内的其他抗生素的QTOF分析方法。     

我国畜禽饲料资源中微量元素砷含量分布的调查研究

【目的】 研究我国不同地区间各种饲料原料中砷含量分布情况及不同饲料原料中砷含量超标情况,确定砷污染高风险原料为严控饲料砷含量,防止饲料砷超标提供科学依据,更为饲料企业科学制定重金属砷的品控方案提供数据支持。【方法】 利用离子色谱-电感耦合等离子体-质谱联用仪（IC-ICP-MS）对采自全国31个省、直辖市和自治区的40种共4 054个主要畜禽饲料原料中砷含量进行测定。【结果】 这40种饲料原料的平均砷含量范围为5.21—13 292.0 μg·kg^-1之间,而各类饲料原料砷含量分布规律是：矿物质饲料（5 018.6 μg·kg^-1）>动物性蛋白饲料（1 704.8 μg·kg^-1）>秸秆类饲料（1 239.0 μg·kg^-1）>牧草类饲料（500.3 μg·kg^-1）>谷类籽实加工副产品（329.24 μg·kg^-1）>植物性蛋白饲料（72.99 μg·kg^-1）>谷类籽实（38.07 μg·kg^-1）。同时发现,谷物籽实及其副产物与秸秆类饲料的砷分布规律：玉米秸>副产物（玉米蛋白粉、喷浆玉米皮、玉米DDGS）>玉米籽实;小麦秸>副产物（小麦麸、小麦DDGS、次粉）>小麦籽实;稻秸>副产物（米糠、脱脂米糠）>稻谷>碎米,是因为谷物植株在生长过程中对砷的富集能力排序：根>叶>茎>谷壳>米粒。通过比较不同省（区）玉米、小麦和豆粕的砷含量发现,不同省（区）同一种饲料原料的砷含量均存在极显著差异（P<0.01）。根据国家饲料卫生标准,在对40种饲料原料砷含量超标率的统计中发现,谷物籽实类饲料、植物蛋白类饲料及牧草类饲料的砷含量均未超标;而谷物籽实加工副产品中的脱脂米糠砷超标率为2.8%,其他未超标;动物蛋白中鱼粉砷超标率5.3%,其他未超标;秸秆类饲料中稻秸砷超标率27.4%,其他未超标;矿物质饲料中石粉与磷酸氢钙砷含量超标率分别为30.8%和60%,其他未超标。不同饲料的砷含量超标率：磷酸氢钙>石粉>稻秸>鱼粉>脱脂米糠。【结论】 以上结果表明：不同种类和不同地区饲料原料中砷含量差异较大,谷物相关的饲料原料中,秸秆类饲料砷含量最高,谷物加工副产物次之,籽实类最低。反刍动物饲料在选择秸秆类原料时,应重点检测砷的含量。同时,磷酸氢钙、石粉、稻秸、鱼粉和脱脂米糠均存在砷含量超标现象,可视为砷污染高危饲料。因此,在实际生产中,应充分考虑不同地区不同原料中的砷含量,加大高危饲料的检测频率,严控饲料砷含量在国标GB 13078-2017允许的范围内,保障饲料品质安全。