发光细菌法测定SO_2气体生物毒性的研究

建立了发光细菌法测定气体生物综合毒性的实验方法。以淡水发光细菌青海弧细菌Q67作为测试菌剂,利用水质毒性分析仪监测不同浓度SO_2曝气条件下青海弧细菌Q67的发光值,以揭示SO_2气体的生物毒性,并对传统曝气条件进行了优化。实验结果表明,青海弧菌发光抑制率和SO_2浓度具有显著的相关性,可定量测定空气中SO_2的浓度;用发光细菌来测定气态生物综合毒性的方法简单、快速且检出限低,但对实验装置气密性和精密度要求较高。     

青海弧菌Q67冻干粉急性毒性测试方法研究

[目的]研究利用青海弧菌Q67冻干粉进行急性毒性测试的方法。[方法]通过一系列试验,探讨青海弧菌Q67冻干粉复苏及与毒物反应接触时间对毒性测试的影响,筛选出适宜青海弧菌急性毒性测试的毒性参照物,在充分借鉴国际标准ISO 11348的基础上分析现行发光抑制率计算方法的不足,提出了优化的计算方法。[结果]青海弧菌Q67冻干粉复苏的30～120 min内进行毒性测试,与毒物的反应时间控制在15～20 min时,测得数据稳定、可靠。ZnCl2适合用作青海弧菌生物急性毒性测试的毒性参照物。[结论]该研究为制定青海弧菌Q67冻干粉急性毒性测试标准提供理论依据。     

太湖贡湖湾水源地水质青海弧菌Q67急性毒性测试

[目的]研究适用于微囊藻毒素污染的太湖贡湖湾水源地水质急性生物毒性诊断方法。[方法]基于淡水发光菌青海弧菌Q67急性毒性试验,以微囊藻毒素-LR溶液进行青海弧菌单一污染物的抑制发光测试;同时测量太湖贡湖湾水源地各采样点水质生物急性毒性效应值和对应的溶解态微囊藻毒素含量。[结果]结果表明微囊藻毒素-LR的EC50为1.96 mg/L。水体中溶解态微囊藻毒素与Q67急性毒性效应有较好的相关性,相关系数达0.643（P〈0.01）。[结论]该水质急性毒性诊断方法是可行的。     

应用青海弧菌评价常见8种兽药的急性毒性

以青海弧菌Q67(Vibrio qinghaiensis sp-Q67)为毒性测试发光微生物,使用BHP9511型水质毒性快速检测仪,通过测定其在8种常见兽药不同质量浓度下的相对发光率和8种兽药对其半数抑制效应质量浓度(EC50),研究8种兽药对青海弧菌的作用规律及急性毒性效应。结果表明,在所研究的质量浓度范围内,8种兽药对青海弧菌的相对发光率随兽药质量浓度的降低而增加;暴露时间为15min时,8种兽药对青海弧菌的急性毒性大小依次为呋喃唑酮>左氧氟沙星>诺氟沙星>磺胺六甲氧嘧啶钠>沙拉沙星>恩诺沙星>环丙沙星>磺胺间甲氧嘧啶纳。     

利用发光细菌检测猪肉中的兽药残留

以青海弧菌Q67(Vibrio qinghaiensis sp-Q67)和明亮发光杆菌T3(Photobacterium phosphoreumT3)为毒性测试发光微生物,通过测定其在不同质量浓度恩诺沙星和磺胺间甲氧嘧啶钠下的相对发光率,研究青海弧菌Q67和明亮发光杆菌T3对猪肉中恩诺沙星和磺胺间甲氧嘧啶钠的检测灵敏度。结果表明,青海弧菌Q67更适用于猪肉中磺胺间甲氧嘧啶钠和恩诺沙星的检测,最小检出率分别为0.1和1mg/L。     

Cd污染土壤生物毒性的发光菌法测定及评价

[目的]测定及评定Cd污染土壤的生物毒性。[方法]选取青海弧菌Q67（Vibrio qinghaiensis sp.-Q67）为指示微生物，采用急性毒性微孔板法，发光抑制率为测试指标，利用发光菌方法评价施用不同调理剂的Cd污染土壤的生物毒性。[结果]Cd污染土壤提取液对发光菌的发光有抑制作用，并随着Cd浓度的增加，发光菌的发光强度逐渐减小，其发光抑制率与Cd浓度呈正相关，Cd的EC₅₀为10.97 mg/kg。与CK对比，施用白云石的处理显著降低了Cd的有效性及Cd的生物毒性。Cd有效性和青海弧菌的发光抑制率降低幅度分别为29.95%、15.35%;用发光菌方法测得Cd的生物毒性与化学方法测得Cd的有效性具有显著的正相关。[结论]结合化学分析与生物毒性检测可为污染土壤评价与风险评估提供依据。     

二元喹诺酮类兽药对青海弧菌Q67联合毒性研究

以青海弧菌Q67(Vibrio qinghaiensis sp-Q67)为毒性测试载体,通过二次通用旋转组合试验设计,研究了左氧氟沙星+诺氟沙星、左氧氟沙星+恩诺沙星、左氧氟沙星+沙拉沙星等二元喹诺酮类药物的联合毒性作用,建立了3个相应数学模型。结果表明,不同混合物中左氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星等对青海弧菌Q67的毒性有显著的正效应。二元喹诺酮类兽药混合物对青海弧菌Q67的联合毒性不同。沙拉沙星和左氧氟沙星混合物对青海弧菌Q67毒性作用以为拮抗为主;左氧氟沙星和诺氟沙星混合物青海弧菌Q67毒性作用以拮抗为主;左氧氟沙星和恩诺沙星混合物对青海弧菌Q67毒性作用以简单相加为主。     

发光细菌法在农药污染毒性检测中的应用研究进展

发光细菌法具有反应快速灵敏、低价高效、对环境友好等特点,常用于环境污染监测。本文综述了发光细菌法在农药污染毒性检测领域的应用研究进展,重点介绍了费氏弧菌、青海弧菌、明亮发光杆菌在人工合成化学农药、生物农药单一毒性检测以及在重金属-农药联合污染毒性检测中的应用,并提出了发光细菌法在农药与其他多重污染物毒性检测中的应用前景。     

多菌灵杀菌剂对青海弧菌和斑马鱼的急性毒性研究

[目的]研究农药对农田环境及非靶标有益生物的影响。[方法]选取青海弧菌Q67和斑马鱼作为受试生物,研究多菌灵杀菌剂对其的急性毒性,从而初步评价该杀菌剂农业生产应用中对水生生物的潜在风险。[结果]22%多菌灵杀菌剂对青海弧菌Q67的EC_(50)为7.70 mg/L,pEC_(50)为2.11;22%多菌灵杀菌剂对斑马鱼的24、48、72、96 h LC_(50)分别为8.53、8.39、8.07和7.64 mg/L;斑马鱼的安全浓度为0.76 mg/L。[结论]根据《化学农药环境安全评价试验准则》"鱼类急性毒性试验"对鱼类毒性评价标准,判断22%多菌灵杀菌剂对斑马鱼的毒性属中毒。     

几种土壤溶液中Cu,Pb,Cd的活度及其络合特性

介绍并用法测定几种不同生物气候带土壤溶液中 Cu,Pb,Cd 的活度及计算络合数值,并进行综合评价。研究了调节土壤 pH 值及施加改良剂 CaCO_3及 K_2HPO_4对 Cd 在土壤溶液中的活度及络合敬值的影响。结果表明:潜育泥炭土、碳酸盐褐土、浅色草甸土等北方土壤中 Cu,Pb,Cd 的活度较低,络合数值较高;而红壤、黄棕壤等南方上壤溶液中却得出相反的结果。同种供试土壤溶液对 Pb 的络合数值高于 Cu。改变 pH 值使不同土壤溶液对 Cu 的活度及络合数值影响不同。Cd 污染使大部分土壤溶液中 Cd 的活度升高,络合数值降低,而施加改良剂 CaCO_3与 K_2HPO_4却使大部分土壤溶液中 Cd 的络合物数值增加,但较对照土壤仍偏低,为土壤 Cd 污染的调控与治理提供依据。     

优化的ATP生物发光法快速检测面粉中细菌总数

[目的]建立一种快速检测面粉中细菌总数的方法。[方法]采用优化的ATP生物发光法检测面粉中的细菌总数,考察D-荧光素（Ln）浓度、萤火虫荧光素酶（FL）浓度、Mg2＋浓度对生物发光反应的影响。[结果]Ln浓度为70 mg/L,FL浓度为50 mg/L,Mg2＋浓度为0.250 0 mmol/L时,ATP生物发光法的测定结果较理想。该法最低检测细菌总数为1.0×103cfu/ml,与传统的平板计数法具有良好的相关性（P〉0.05）,RSD为4.0%。[结论]优化的ATP生物发光法成本低、操作简便、反应迅速、准确可靠,能快速检测出食品中的细菌总数。     

松材线虫对其携带的一株致病细菌产毒的影响

该文报道了以黑松细胞为材料的一种改进的细胞荧光染色显微生测法.用该方法测定了接种松材线虫虫体上分离到的荧光假单胞GcM5-1A菌株或该菌株和无菌松材线虫混合物接种后的愈伤组织水提物的毒性.结果表明,单独接种无菌松材线虫或单独接种该菌株后的愈伤组织水提液未表现出毒性;而接种无菌松材线虫与该菌株的混合物后的愈伤组织水提液与接种野生松材线虫后的愈伤组织水提液的毒性以及该菌株的NB培养液的无细胞滤液的毒性均很强,并且它们三者之间没有显著差异.该结果说明松材线虫在寄主组织中能促进细菌的产毒.向该菌株的NB培养液的无细胞滤液中添加松材线虫后测定其毒性,结果表明无菌松材线虫对其毒性并无显著影响.实验结果表明松材线虫本身不产生毒素,在荧光假单胞菌培养液的无细胞滤液中加入无菌松材线虫未能显著改变其毒性.      

人工养殖对虾肠道内可培养细菌数量及组成分析

为深入了解人工养殖条件下养殖对虾肠道内菌群结构和携带病毒情况,应用常规细菌分离、培养与纯化,细菌16S rD NA序列分析的方法分析了我国山东、江苏、韩国不同养殖场的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和中国明对虾(Fenneorpenaeus chinensis)肠道内可培养细菌的总数、优势菌组成和数量,并用巢式聚合酶链式反应(Nested polymerase chain reaction,Nested PCR)方法检测对虾携带病毒情况。结果显示各批次凡纳滨对虾和中国明对虾样品肠道内的可培养细菌总数在105~109cfu/g之间,并对分离出的优势菌进行属(种)鉴定,结果表明这些优势菌分别属于乳球菌属(Lactococcus sp.)、弧菌属(Vibrio sp.)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、发光杆菌属(Photobacterium sp.)、希瓦氏菌属(Shewanella sp.)、节杆菌属(Arthrobacter sp.)、微小杆菌属(Microbacterium sp.)。凡纳滨对虾和中国明对虾均有样品检测为WSSV阳性,6批次WSSV阳性对虾样品中均检测到弧菌属细菌,占可培养细菌比例为33%~93.58%。2批次WSSV阳性对虾样品中检测到希瓦氏菌属细菌,占可培养细菌比例为21.67%~34.21%。4批次WSSV阳性对虾样品中检测到发光杆菌属细菌,占可培养细菌比例为21.03%~66.83%。     

长白山天池水可培养细菌的16S rRNA鉴定

为了解长白山天池水中细菌的种类及多样性,用NA、1/10NA、R2A、1/10R2A培养基从长白山天池水样品中分离出25株细菌菌株,对其进行16S rRNA基因序列的系统发育分析及形态观察,结果得到9种具有代表性的菌株,9株细菌在系统发育上与芽孢杆菌属(Bacillus sp.)及厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus sp.)关系密切,其中芽孢杆菌属为分离获得的优势菌属.     

Recombination and the nature of bacterial speciation

Genetic surveys reveal the diversity of bacteria and lead to the questioning of species concepts used to categorize bacteria. One difficulty in defining bacterial species arises from the high rates of recombination that results in the transfer of DNA between relatively distantly related bacteria. Barriers to this process, which could be used to define species naturally, are not apparent. Here, we review conceptual models of bacterial speciation and describe our computer simulations of speciation. Our findings suggest that the rate of recombination and its relation to genetic divergence have a strong influence on outcomes. We propose that a distinction be made between clonal divergence and sexual speciation. Hence, to make sense of bacterial diversity, we need data not only from genetic surveys but also from experimental determination of selection pressures and recombination rates and from theoretical models.     

两种生物测试法在水质监测与评价中的应用比较

[目的]比较两种生物测试法在水质监测与评价中的应用。[方法]分别采用蚕豆根尖细胞微核法和发光细菌法两种常用生物测试方法,测试了不同浓度梯度的重金属(汞、镉、砷、六价铬、铅)、有机污染物(阴离子表面活性剂、化学需氧量)溶液及其混合溶液,比较这两种方法在相同污染物和污染浓度下的检测结果,以了解其各自对常见污染物的敏感程度及敏感浓度。[结果]在相同的污染物及浓度梯度下,蚕豆根尖细胞微核法对总汞、镉、总砷和六价铬有反应,对铅、阴离子表面活性剂、化学需氧量均不敏感;发光细菌法对大多数污染物均有反应,但对六价铬的敏感度较低。从对污染物的敏感程度和敏感浓度来看,两种方法可以互为补充,发光细菌法优于蚕豆根尖细胞微核法。同时,多种低浓度污染物联合作用的生物毒性不容忽视,生物测试法在对多种低浓度污染物的联合毒性检测方面较常规化学法更为快速、有效。[结论]该研究为生物测试法的相关性分析提供了理论依据。     

家蚕细菌病防治新药的研制(初报)

收集7种试验药物A1～A7,分别进行家蚕黑胸败血菌(Bacillus sp.)及灵菌败血菌(Serratia morcesceus)的抑菌圈试验和生测试验,将筛选出的对这2种病防治效果最好的2种药物进行复配,新配方的药效均达到了95%以上,超过了对照药物,预防效果也显著高于不施药对照.     

北京市五环内道路绿地土壤细菌群落结构特征

土壤细菌的群落结构特征能够准确反映当前土壤生态系统稳定性,为城市道路绿地的管理提供重要参考依据。以北京市五环内道路绿地为研究对象,选取34个样点进行土壤细菌高通量测序,探究北京市五环内道路绿地土壤细菌的群落组成、多样性和丰富度,并采用冗余分析(RDA)法分析土壤环境因子对细菌群落结构的影响。结果表明,北京市五环内道路绿地土壤细菌群落多样性和丰富度存在显著差异,且由市中心向外呈递减趋势;门分类水平下优势菌门包括变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)4类菌门,占土壤细菌总比的78%左右;属分类水平下主要由RB41、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、H16等优势属组成;属分类水平下细菌的群落结构组成较门分类水平呈现出更为明显的分异;RDA分析结果共解释了50.26%的变异,土壤含水量、全N、有机质和有效P与土壤细菌群落结构组成存在显著相关性。总体来看,北京市五环内道路绿地土壤养分状况处于中等偏下水平,可通过改善道路绿地的管理措施提升土壤质量,进而优化土壤细菌群落结构,提高土壤生态系统的稳定性。     

紫茎泽兰乙醇提取物对五龄思茅松毛虫肠道细菌的抑制作用

以思茅松毛虫五龄幼虫肠道细菌为供试菌,采用牛津杯法测定紫茎泽兰不同部位乙醇提取物的抑菌效果。结果表明:紫茎泽兰不同部位乙醇提取物除茎提取物外,对5种思茅松毛虫肠道细菌(共10株)均有不同程度的抑制作用,抑制作用大小顺序为叶>根>茎。在相同质量浓度下,叶提取物对5种肠道细菌的抑菌作用大小顺序为雷金斯堡约克氏菌(Yokenella regensburgei)>弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)>产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca)>克雷伯氏杆菌(Klebsiella peneumoniae)>苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis),其对雷金斯堡约克氏菌、产酸克雷伯氏杆菌以及弗氏柠檬酸杆菌的最低抑菌质量浓度为0.125g/mL,对其余2种细菌的最低抑菌质量浓度分别为0.25g/mL、0.5g/mL。根提取液对雷金斯堡约克氏菌和克雷伯氏杆菌无抑制作用,在相同质量浓度下,其对其余3种细菌的抑制作用大小顺序与叶提取液相同,最低抑菌质量浓度为0.25g/mL。紫茎泽兰乙醇提取物具有良好的抑菌效果,可用于开发新型的植物源生物农药。