2苹果品种叶片胚状体再生体系的建立

以苹果“富士”和“鲁加6号”为材料,建立叶片胚状体再生体系。结果表明:先经胚性细胞诱导培养基MS+BA1.0 mg·L^-1+NAA5.0 mg·L^-1+TDZ0.5 mg·L^-1诱导胚性细胞,再置于胚胎发育培养基MS+BA1.0 mg·L^-1+NAA0.1 mg·L^-1上进行暗培养,最佳时间为10 d,2品种叶片再生率分别为96.7%和100%。经胚状体不同时期形态学组织学观察,显示胚状体发育时期经历原胚、球形胚、心形胚、子叶形胚、鱼雷形胚、成熟胚等阶段。“鲁加六号”苹果最佳生根培养基为1/2MS+IAA0.1 mg·L^-1+IBA0.1 mg·L^-1,生根率达86.7%。     

花椰菜松散型胚性愈伤组织的诱导

本研究采用花椰菜组培苗不同外植体诱导愈伤组织,从中筛选出理想外植体类型;将诱导出的愈伤组织转移到不同培养基上进行松散型愈伤组织的诱导,从中筛选出理想的培养基配方;将诱导出的花椰菜松散型愈伤组织转接到不同的胚性愈伤组织诱导培养基上,找到理想的培养基配方。试验结果表明,选用花椰菜组培苗茎段为外植体,在MS+0.5 mg·L~(-1)BA+1.0 mg·L~(-1)2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上进行愈伤组织诱导,可以获得松散型愈伤组织;在MS+1 mg·L~(-1)BA+1 mg·L~(-1)2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上通过3～4次继代培养,可以诱导出花椰菜松散型胚性愈伤组织。     

白花油茶胚性愈伤诱导及植株再生

本研究以白花油茶未成熟胚为外植体，对其消毒方式及胚性愈伤组织培养进行研究。结果表明，未剥果皮的外植体先用75%乙醇浸泡60 s后转入0.1%HgCl₂浸泡8 min,再转入2%NaClO中浸泡8 min,成活率最高，达86.67%。未成熟胚切块接种于MS+0.5 mg·L^-1 2,4-D+2.0 mg·L^-1 6-BA中，胚性愈伤组织诱导最好，诱导率最高，达89.63%;将绿色愈伤组织转接至MS+0.2 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6-BA时，愈伤组织表面及其周围产生大量体细胞胚，呈球形、心形、鱼雷状和子叶状等多种形状，且多种相互重叠生长，胚状体诱导率最高，达68.89%;不同配比的6-BA和NAA诱导体细胞胚产生不定芽的效率差异明显，其中2.25 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 NAA和3.0 mg·L^-1 6-BA+1.0 mg·L^-1 IBA不定芽分化效果...     

山桐子离体培养植株再生

以种子和叶片为外植体,研究了离体条件下外植体类型及植物生长调节剂对山桐子器官发生和植株再生的影响。结果表明:种子为诱导愈伤组织的适宜外植体; 在MS+1.0 mg·L^-16-BA +1.0 mg·L^-1 NAA +3%蔗糖+0.6%琼脂的培养基上,愈伤诱导率达96.8%; 继代培养在MS+0.08 mg·L^-1 TDZ + 1.5 mg·L^-16-BA +0.05 mg·L^-1 NAA 培养基上能成功的诱导芽的分化,诱导率达48.3%以上; 芽增殖的适宜培养基为1/2MS +0.03 mg·L^-1 TDZ +2.0 mg·L^-16-BA +0.1 mg·L^-1 NAA +3%蔗糖+0.6%琼脂,增殖系数为4.83; 在1/2MS+ 0.5 mg·L^-1 IBA +2%蔗糖+0.6%琼脂培养基上,无根苗生根率达88%。     

三红蜜柚体细胞胚胎的诱导

为建立三红蜜柚体细胞胚胎途径的组培快繁技术体系,采用带腋芽的无菌茎段为外植体,利用正交设计的方法,研究不同的基本培养基与植物生长调节剂对体细胞胚胎的诱导、分化、增殖与生根等关键环节的影响。结果表明,胚性愈伤组织诱导的最适宜培养基为MS+2,4-D 1 mg·L^-1+6-BA 0.5 mg·L^-1;在附加6-BA 0.1 mg·L^-1的MS培养基上淡黄色的胚性愈伤组织块可诱导形成胚状体;胚状体试管苗在1/2 MS+NAA 0.5 mg·L^-1培养基上生根率可达90%,移栽成活率达85%。     

长寿花组织培养与人工种子的研究

笔者初步研究了长寿花人工种子的制备,包括胚性愈伤组织及胚状体的诱导、人工种子的包埋和萌发。胚性愈伤组织诱导的最适培养基为:MS+2,4 D2mg/L+BA0 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L;胚状体诱导的最适培养基为:MS+BA2mg/L+NAA0 2mg/L+活性炭4g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L;用无激素MS培养基配制的4%海藻酸钠溶液包埋胚状体,并用2%的CaCl2·2H2O溶液作聚胶化因子,制成人工种子;将人工种子在无激素的MS固体培养基上萌发,萌发率达96%。利用石蜡切片法对胚状体的发生发育过程进行了观察。     

球根海棠"金正日"的离体培养研究

通过诱导胚状体建立组织培养再生系统,研究了球根海棠"金正日"的离体培养.结果表明,外植体经HgCl2溶液表面消毒后,接种到MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 1 mg/L培养基上诱导愈伤组织,15 d后转接到1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L培养基上,诱导胚状体,诱导率90%以上.胚状体在MS+6-BA 0.3 mg/L +NAA 0.03 mg/L培养基上以丛生芽形式增殖,增殖系数达4～8倍.试管苗生根可采用MS+IBA 0.1 mg/L、蔗糖2%培养基.生根率100%.     

冰灯玉露松散型胚性愈伤组织的诱导方法

为了获得冰灯玉露松散型胚性愈伤组织,采用冰灯玉露组培苗叶片为外植体,在含有不同激素的培养基上,通过不同的继代培养,从中找到诱导出松散型胚性愈伤组织的最适条件。结果显示,在1/2 MS+2 mg·L~(-1) 2,4-D+20 g·L~(-1)蔗糖的培养基上可以诱导出松软的愈伤组织。再将这些松软的愈伤组织转接到MS+1 mg·L~(-1) BA+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上,经过3~5次继代培养,继代培养时选择质地较硬、结构松散的愈伤组织进行转移,最终获得结构松散的愈伤组织。再将这些松散型愈伤组织在MS+2 mg·L~(-1) BA+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上继续培养,经过2~3次继代培养即可获得冰灯玉露松散型胚性愈伤组织。该试验结果可为冰灯玉露离体诱变育种及其相关的科学研究提供良好的试材。     

通过体细胞胚发生快繁优良刺五加植株的技术

以刺五加合子胚及无菌实生幼苗为试验材料,研究通过直接和间接体细胞胚发生方式,快速获得大量再生植株的技术。结果表明:直接诱导体细胞胚的培养基为MS+2,4-D1.0 mg.L-1,以胚根或子叶为外植体诱导胚性愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D0.5 mg.L-1+BA1.0 mg.L-1,下胚轴为外植体诱导胚性愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D0.5 mg.L-1+BA2.0 mg.L-1。胚性愈伤组织经悬浮培养可发育成成熟体胚,快速获得刺五加幼苗。     

唐古特瑞香愈伤组织培养与再生体系建立

以唐古特瑞香幼嫩叶片为材料,进行愈伤组织诱导与植株再生试验,以期建立唐古特瑞香再生体系,为其无性系的快速繁殖奠定基础。将幼嫩叶片进行表面灭菌后接种于初代培养基中,初代培养时,存在褐化现象,愈伤诱导前需进行除褐培养,除褐后的外植体经愈伤诱导、不定芽分化、增殖培养、生根培养和幼苗出瓶移栽的试验过程,筛选出了最佳培养方案。除褐培养基以MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+PVP 200 mg·L^-1效果较好,在此培养基上连续转移3次后褐变消失。愈伤诱导培养基为MS+6-BA 3.0 mg·L^-1+2,4-D 2.0 mgL^-1,诱导率95.5%;芽苗分化培养基为MS+ZT 2.0 mg·L^-1+TDZ 0.1 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1,分化率93.2%,平均芽数为8.66条;不定芽增殖培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L^-1+IBA 0.3 mg·L^-1,增殖倍数为12.21,平均苗高4.81 cm;生根培养基为1/2 MS+NAA 0.5 mg·L^-1,生根数平均为3.83条,生根率为88.72%以上;组培苗移栽于珍珠岩中生长良好,成活率达90%以上。本研究初步建立了唐古特瑞香再生体系,为其无性繁殖奠定了理论基础。     

马铃薯松散型胚性愈伤组织的诱导

为了建立马铃薯松散型胚性愈伤组织体系,用于脱毒繁殖和诱变育种,试验采用马铃薯块茎为外植体,在含有不同浓度2,4-D,BA和MS的培养基上进行松软型、松散型和胚性愈伤组织的诱导。结果显示,在1/4 MS+1.0 mg·L~(-1) 2,4-D+15 g·L~(-1)蔗糖的培养基上可以诱导出松软型马铃薯愈伤组织;在MS+0.5 mg·L~(-1) BA+0.25 mg·L~(-1) 2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上,继代3~5次,即可获得松散型愈伤组织;在MS+1.0 mg·L~(-1) BA+1.0 mg·L~(-1) 2,4-D+30 g·L~(-1)蔗糖的培养基上,继代5~8次,即可获得松散型胚性愈伤组织。而且上述类型的愈伤组织生长迅速,结构特点突出。     

西葫芦未受精子房离体培养的影响因素

【目的】探究西葫芦未受精子房离体培养的主要影响因素,以提高其胚状体诱导率和生根品质,增加再生植株数量,丰富西葫芦育种材料。【方法】以西葫芦"春玉一号"未受精子房为材料,分析MS、B5、N6和White 4种基本培养基的诱胚效果;在MS培养基中添加不同质量浓度的6-BA(0,0.5,1.0,2.0mg/L)和NAA(0,0.2,0.5,1.0mg/L),筛选2种激素的最佳组合;之后添加不同质量浓度的2,4-D(0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mg/L),筛选2,4-D的适宜质量浓度;在MS培养基中添加不同质量浓度的NAA(0,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0mg/L),分析其对胚状体芽生根效果的影响。【结果】西葫芦未受精子房以MS为基本培养基时胚状体诱导率最高,为16.67%;在MS培养基中添加1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA时的诱导效果最好,诱导率为19.76%;在MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA培养基中添加1.0mg/L 2,4-D可以加快胚珠膨大的速度,增加胚珠转绿的数量,但对出胚的提高效果不显著。MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.1mg/L NAA有利于提高胚状体芽的生根品质,且根系生长健壮。【结论】MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+1.0mg/L 2,4-D是西葫芦未受精子房离体培养中胚状体诱导的最佳培养基,MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.1mg/L NAA是诱导其胚状体芽生根的较适宜培养基。     

牡丹品种凤丹白子叶离体再生研究

探讨了不同的消毒方式及消毒时间对牡丹成熟胚萌发诱导的影响,以及不同的植物生长调节物质、培养时间和蔗糖浓度对牡丹子叶愈伤组织诱导、增殖分化及分化苗生根的影响.结果表明,牡丹种子的最佳消毒方法是在0.1％ HgCl2中消毒10 min;牡丹子叶在MS+2 mg/L 2,4-D+0.5 mg,/L6-BA+ 3％蔗糖配方的培养基中出愈率最高,为93％;牡丹子叶来源的愈伤组织在MS+1.0mg/L2,4-D+0.5 mg/L 6 - BA +3％蔗糖配方的培养基中培养60 d时的分化情况最好,分化率达到78％;在附加了0.2 mg/L6 - BA+1.0 mg/L IBA和2.5％蔗糖的1/2MS培养基中,再生苗的生根率可达56％,平均根数4.25条,平均根长4.31 cm.     

板栗成熟胚再生体系的建立与优化

研究了外植体消毒方法、植物生长调节剂组合对胚萌发和生长的影响。以迁西板栗主栽品种‘燕山早丰’成熟胚为试验材料,采用L₉(3⁴)试验设计对增殖培养基进行筛选。结果表明,二次消毒处理可以有效抑制污染,污染率最低为16.67%。胚萌发和生长最佳基本培养基为WPM+6-BA 1.0 mg·L^-1,萌发率最高达到95.00%,胚萌发苗最高为59.65 mm。不定芽诱导的最适培养基为:MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+IBA 0.1 mg·L^-1。芽诱导率最高为92.50%。最适增殖培养基为GD+ZT 2.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1,增殖系数最大为3.91。     

杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

黑莓松散型胚性愈伤组织的诱导

为了诱导出黑莓松散型胚性愈伤组织,试验采用黑莓试管苗叶片、叶柄和茎段为外植体,在含有不同2,4-D及分裂素的MS培养基上进行愈伤组织的初步诱导,从中筛选出松散型愈伤组织的最佳培养基配方;再将诱导出的黑莓松散型愈伤组织转移到含有不同激素种类和浓度的MS培养基上进行松散型胚性愈伤组织的诱导,从中筛选出最佳培养基配方。结果表明,在1/8 MS+3 mg/L 2,4-D+100 mg/L Vc+10 g/L蔗糖的培养基上可以诱导出松散的黑莓愈伤组织;先在MS+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上进行胚性愈伤的诱导继代2~3次,然后转移到MS+0.5 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上继续培养并继代3~5次后即可诱导出黑莓的松散型胚性愈伤组织。试验结果将为采用黑莓体细胞诱变育种研究奠定基础。     

荔枝愈伤组织诱导及其体细胞胚胎发生研究初报

分别取元红荔枝盛花后45d未败育的幼胚、一个月龄的实生苗叶片、成龄树叶片、未受精子房接种在愈伤组织诱导培养基上,均能诱导出愈伤组织,但仅有幼胚能诱导出胚性愈伤组织。幼胚在含5% 蔗糖的MS基本培养基附加2,4-D2mg/L+水解乳蛋白500mg/L的培养基上诱导率最高。幼胚愈伤组织在含5% 蔗糖的基本培养基附加10% 椰乳的培养基上,白色胚状体发生率最高。胚状体易提前萌发,仅抽生根不抽生茎。健壮的未生根胚状体在含5% 蔗糖的培养基附加BA1mg/L的培养基上生根率最低,为理想的萌发培养基。随着BA浓度的降低,生根率提高,呈负相关。同浓度BA抑制生根的效果好于KT。在萌发培养基上生长一段时期后,少数较成熟的胚状体抽生出茎叶,长成完整植株。     

紫萼组织培养技术

试验以紫萼(Hosta ventricosa)的幼嫩花序为起始材料,研究其组织培养方法。结果表明:2%次氯酸钠溶液灭菌14 min为最佳灭菌方式;最适合的诱导培养基为MS+6-BA 4 mg·L^-1+NAA 0.2 mg·L^-1。将诱导的健康芽转至6-BA 4 mg·L^-1、NAA 0.5 mg·L^-1和2,4-D 0.25 mg·L^-1的增殖培养基中,伸长倍率为3.5,增殖倍率为3.9。将健康不定芽转至生根培养基,以1/2 MS+ABT 0.5 mg·L^-1为佳,在此培养基上可形成粗壮健康的白色根,长度2~9 cm,数量4~6根。将完整植株转移至园土∶泥炭∶珍珠岩体积比为1∶3∶1的基质中炼苗2个月,成活率达97%以上,可地栽。     

南瓜未授粉子房和胚珠离体培养影响因素

以11个南瓜品种为材料,以未受精子房和胚珠为外植体,研究基因型、激素种类、外植体培养方式和高温预处理时间对胚状体诱导的影响。结果表明,西葫芦材料X2在MS+4.00 mg·L^-1 2,4-D+0.5 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 NAA的培养条件下诱导胚状体效率最高,出胚率达15%;子房横切片和胚珠培养对胚珠膨大转绿及胚状体诱导优于子房纵切片培养;外植体在35 ℃高温条件下预处理5 d有利于胚珠的膨大和转绿。     

文冠果子叶同步胚的高效诱导及植株再生

以文冠果成熟种子的子叶为外植体,优化培养基配方,诱导收集胚性愈伤组织,建立了高效的同步胚液体培养扩增体系,同步胚转移到固体培养基上,实现了植株的高效再生,为文冠果转基因平台的建立打下了基础.结果表明,文冠果子叶外植体胚性愈伤组织诱导优化培养基为附加2,4-D 2.0 mg·L-1、NAA 1.0 ·L-1、6-BA 1.0 mg·L-1和3%的蔗糖的MS固体培养基,可产生大量胚性愈伤组织;胚性细胞系经继代和初步扩增后,在附加2,4-D 0.5 mg·L-1、NAA 0.5 mg·L-1、6-BA 0.5 mg·L-1和2%的蔗糖的B5液体培养基中增殖产生大量的同步球形胚;球形胚转入NAA 0.25 mg·L-1、6-BA 0.5 mg·L-1的B5固体培养基上,经心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚,再生成植株.