滇重楼种子休眠机理研究

【研究目的】探讨滇重楼种子休眠机理,为打破种子休眠促进滇重楼实生育苗提供理论基础。【方法】采用重量法、胚率测定、ELISA等方法对种子吸水特性、萌发抑制物及种胚休眠与发育的内源机理进行了研究。【结果】种子不存在吸水障碍,与休眠无关;滇重楼种子中存在着萌发抑制物;滇重楼种子休眠属于形态学-生理学休眠类型;内源激素ABA和GA3在滇重楼种子休眠与萌发过程中起着重要作用,ABA是引起休眠的关键因素,ABA含量的降低是滇重楼种胚发育的始动因子,GA3有助于种子的生理后熟。【结论】滇重楼种胚发育不完全、种子中存在萌发抑制物质是种子休眠的主要原因。萌发抑制物的存在可能抑制了种胚发育,而与生理学后熟过程无关。在自然条件下,滇重楼生境中较长的低温时期可能是滇重楼种子具有较长时间休眠的外界原因。     

滇重楼内生真菌的分离及其抗菌活性分析

为了解滇重楼内生菌的多样性及其抗菌能力,采用切块法分离内生菌,采用形态学观察法初步鉴定内生真菌,采用对峙试验法分析内生菌的抗菌活性。结果表明:从滇重楼植物中分离到98株内生真菌,经微生物学形态观察,初步鉴定归属于4个目,6个科和12个属。分别是根霉属(Rhizopus)、镰孢菌属(Fusarium)、丝核菌属(Rhizoctonia)、束丝菌属(Ozonium)、组丝核菌属(Sclerotium)、青霉属(Penicillium)、头孢霉属(Cephalosporium)、梳霉属(Kickxella)、筒孢霉属(Cylindrium)、刚毛孢属(Pleiochaete)、小单头孢霉属(Acremoniella)及孔球孢属(Gilmaniella)。对植物土传病原菌立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和烟草黑胫病菌有抑菌效果的共有8株,其中PPC-78和PPC-43对供试病原菌的抑菌效果最强,PPC-43对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和烟草黑胫病菌菌丝生长的抑菌率分别为88.76%、93.67%和82.31%,而PPC-78的抑制率分别是93.55%、100.00%和95.88%。     

生境对滇重楼种子发育与萌发的影响

采用石蜡切片法研究生境对滇重楼种子发育的影响,萌发法研究果实重量、种子数、种仁重量同滇重楼种子萌发率的关系。结果显示,滇重楼种子在果实成熟时,胚停留在球形胚阶段,胚的发育程度与生境无关;中等大小果实育苗可以获得较高的萌发率。     

滇重楼授粉特性的初步研究

通过对滇重楼授粉特性初步研究,结果表明:①滇重楼是常异花授粉植物,且不存在无融合生殖;②自然界中的滇重楼通过昆虫进行传粉,属虫媒植物;③滇重楼自花授粉结籽率低,人工异花授粉是提高种子产量的有效措施;④滇重楼的最佳授粉期是在花粉囊裂开后的第5天,花粉囊裂开后的5 d内完成人工授粉效果最好,授粉后到完成受精有效时间为24~96 h。本文为滇重楼育种和提高种子产量提供科学依据。     

温度对滇重楼种子萌发的影响

[目的]研究滇重楼种子萌发的最适温度条件。[方法]采用不同的温度条件(15、20、25℃)对滇重楼种子进行培养,观测其对种子萌发的影响。[结果]20℃恒温条件下,培养55 d后,种子开始萌发,100 d后萌发率为98.89%,根的生长情况也最好;15和25℃条件下培养的种子,萌发率低,萌发不整齐,根生长缓慢。[结论]20℃恒温是滇重楼种子萌发及根系生长最适宜的温度条件。     

滇重楼热风干燥试验分析

[目的]研究滇重楼热风干燥过程中不同因素水平对其干燥效果的影响,为滇重楼热风干燥工艺的优化和改进提供理论依据。[方法]以滇重楼为试验材料,设计并完成滇重楼干燥正交试验,分析在温度、风速和铺料密度等因素变化的情况下,滇重楼外观品质和水分的变化情况,探讨各种因素水平对其干燥效果的影响。[结果]影响滇重楼干燥效果的主次因素排序为温度风速铺料密度相对湿度,其中干燥温度55℃、风速0.7 m/s、铺料密度4 kg/m2、相对湿度40%的条件下,干燥得到的重楼外观品质最佳。[结论]采用热风干燥技术得到的重楼成品整体质量比较高,且热风干燥具有能耗低、所需设备简单等优点,在滇重楼规模化生产过程中值得推广应用。     

滇重楼内生真菌的生物学性状及其甾体化合物含量

从滇重楼根状茎中分离到133株内生真菌,对其中的7株真菌进行了生物学性状观察和甾体化合物含量测定。结果表明,2号、8号和12号真菌能合成大量的甾体化合物,培养液中甾体化合物的产率分别为208.62,144.97和198.79 mg/L。     

滇重楼皂苷部位HPLC指纹图谱的研究

[目的]建立滇重楼皂苷有效部位HPLC指纹图谱分析方法,研究不同产地滇重楼药材的质量。[方法]采用HPLC等度洗脱的方法进行色谱分离,使用“相似度评价软件”进行数据处理,对不同产地的滇重楼药材皂苷部位进行指纹图谱的研究。[结果]确立了滇重楼药材皂苷部位指纹图谱的高效液相分析条件,确定8个共有峰。不同产地的滇重楼药材皂苷部位指纹图谱有一定差异。[结论]采用HPLC法制定滇重楼药材皂苷部位的指纹图谱,其皂苷类成分得到较好的分离,方法重现性好,可用于滇重棱的质量评价。     

滇重楼最佳授粉期的研究

[目的]优选滇重楼的最佳授粉期。[方法]采用TTC法测定花粉的活力,并采用联苯胺-过氧化氢法测定柱头可授性,根据研究滇重楼花粉活力变化规律及柱头可授性优选滇重楼的最佳授粉期。[结果]滇重楼花粉囊开裂时活力最高为68.2%,前2 d内,花粉活力下降不明显。第4天开始,活力明显下降,但仍然具有一定的活性。柱头的活性在花粉囊开裂后5 d内最强,滇重楼的授粉应选择在这5 d内进行。[结论]该研究优选了滇重楼的最佳授粉期,为滇重楼的进一步开发利用提供了依据。     

不同贮藏方式对滇重楼种子发芽率的影响

通过设置4种不同的贮藏方式[冷藏(4~6℃)4个月后播种、常温贮存4个月后播种、现采现播、沙藏4个月后播种],对滇重楼种子的发芽率进行记录,利用常规方法打破滇重楼种子的休眠,以期用简单的方法提高滇重楼种子的发芽率。试验结果表明:沙藏后播种的滇重楼种子发芽率达65.00%,冷藏(4~6℃)滇重楼种子发芽率46.33%,常温贮藏的滇重楼种子发芽率为23.33%,现采现播的滇重楼种子发芽率为11.33%。     

正交试验优化滇重楼核苷提取工艺

[目的]优化滇重楼核苷的提取工艺条件,为滇重楼资源的开发和利用提供技术支持.[方法]以滇重楼根茎为试验材料,6种核苷类物质(胞苷、尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷和2'-脱氧腺苷)总提取量为考察指标,采用高效液相色谱法测定其提取量,先分析超声波提取法和热水浸提法对滇重楼核苷提取效果的影响,然后在单因素试验的基础上,以甲醇体积分数、料液比、提取时间和提取次数为考察因素,采用L9(34)正交试验对滇重楼核苷类物质提取工艺进行优化,确定最佳工艺条件.[结果]超声波提取法得到的滇重楼根茎中6种核苷类物质总提取量高于热水浸提法;4个因素对滇重楼核苷总提取量的影响排序为甲醇体积分数>提取时间>提取次数>料液比,最佳提取工艺条件为:以纯净水(甲醇体积分数为0)为提取溶剂,在料液比1:10(g/mL)、30℃条件下超声波提取60 min,提取2次,得到滇重楼根茎中胞苷、尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷和2'-脱氧腺苷的总提取量为1.4216±0.0198 mg/g,高于理论值1.3434 mg/g.[结论]正交试验优化得到的滇重楼核苷超声波提取工艺操作简便、稳定可靠,较热水浸透法的提取效率高,适合用于滇重楼核苷的提取.     

滇重楼种子萌发关键技术研究

为研究滇重楼种子萌发技术,采用不同温度和不同基质对滇重楼种子进行处理,观测其对滇重楼种子萌发的影响。结果表明:18~20℃恒温条件最适宜滇重楼种子萌发,在恒温条件下,处理55 d后种子开始萌发,处理130 d后沙与基质处理种子萌发率分别为91%和95%;变温(室温)条件下,种子所需萌发时间较长,处理120 d左右种子才开始萌发,管理成本增加,与恒温条件处理相比萌发率较低,190d试验结束时,沙与基质处理的种子萌发率分别为73%和80%。可见,恒温处理缩短萌发时间,对重楼育苗具有重要意义。     

超声波对滇重楼种子萌发能力的影响

研究超声波处理时间、温度、功率对滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)种子萌发的影响,寻找其萌发的最佳条件。通过室内常规发芽试验,统计滇重楼种子在不同超声波处理时间、温度、功率条件下的发芽率和发芽指数。结果表明,滇重楼种子经适当的超声波处理,缩短了萌发时间,提高了发芽率和发芽指数。40 min、50℃、200 W的超声波处理条件最适宜于滇重楼种子萌发。     

滇重楼栽培技术及有效成分积累研究综述

综述了滇重楼繁育技术、施肥技术和病虫害防治技术以及有效成分积累规律等方面的研究进展,为滇重楼的栽培管理和有效成分积累提供了一定的参考。     

滇重楼2种真菌性叶斑病的初步研究

对栽培滇重楼病害进行调查、鉴定,明确滇重楼白霉病由半知菌类的柱隔孢(Ramularia)引起,褐斑病由细交链孢菌(Alter-naria tenuis Nees)引起,并针对这2种病害提出了建议性的生态防治措施。     

滇重楼的花粉活力测定方法比较

[目的]为提高滇重楼的繁殖效率。[方法]将滇重楼开花植株裂开花药的花粉轻轻涂抹载玻片上,分别用碘-碘化钾(I2!KI)染色法、氯化三苯四氮唑(TTC)染色法、醋酸洋红染色法和略有改动的荧光素二醋酸酯法对滇重楼花粉活力进行测定。[结果]氯化三苯基四氮唑染色法的染色率较低,仅为27.51%;醋酸洋红染色法和荧光素二醋酸酯法的染色率较高,分别为91.30%和90.55%,而且所测数据较为接近;碘-碘化钾染色法虽然能将花粉染上色,染色率为94.80%,但染上色的花粉包含退化的花粉和失活的花粉。[结论]醋酸洋红染色法和荧光素二醋酸酯染色法的染色率较高,能较好地区分出有活力的花粉和失活的花粉,而且能较为准确地反映滇重楼花粉的生活力。