适于cDNA-AFLP的黄瓜幼叶总RNA快速高效提取方法

为了快速高效地提取黄瓜幼叶总RNA,满足于cDNA-AFLP实验的要求。对Trizol试剂提取总RNA的方法进行了改进,所提RNA经琼脂糖电泳检测,其28S、18S、5S 3条带清晰,完整性好,每0.1g幼叶可获得RNA 100~150μg,产率高;经反转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测,证实提取的RNA能满足反转录和cDNA-AFLP对RNA质量和数量的要求。     

仙人掌总RNA 提取方法的改进与分析

利用亚硫酸钠分别与TRIzol试剂、RNA plant plus Reagent试剂、BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂、艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂和OMEGA Plant RNA试剂结合的方法,均可获得高质量的仙人掌茎总RNA。反转录成cDNA,RT-PCR结果显示,5种方法提取的总RNA反转录后均能特异性扩增到matK基因。使用TRIzol试剂盒、RNA plant plus Reagent试剂盒和艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取RNA质量相对较高,在cDNA以1∶100稀释时能检测到matK基因;而使用BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂盒或OMEGA Plant RNA试剂盒时,灵敏度稍低,在cDNA以1∶10稀释时,能检测到目的基因。利用亚硫酸钠结合不同植物总RNA提取试剂盒进行比较研究,为后续制备仙人掌茎高质量cDNA文库及其分子生物学研究奠定基础。     

三色堇花瓣总RNA 3种提取方法的比较

分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测.结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高.3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260nm/D280nm在1.83 ～2.03之间.以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验.     

不同提取方法在橡胶树总RNA提取中的应用研究

总RNA的纯度和完整性对橡胶树分子生物学实验至关重要。为探索更适合橡胶树总RNA的提取方法,本文以巴西橡胶树无性系热研7-33-97叶片为试材,利用凝胶电泳、紫外吸光值测定、RT-PCR检测等方法对CTAB-LiCl法和CTAB-NaAc法提取的总RNA进行比较。结果显示:CTAB-LiCl法提取RNA不仅耗时产率低,且RNA溶液中的Li+和Cl-影响反转录效率。CTAB-NaAc法提取叶片的总RNA经DNaseⅠ处理后凝胶电泳条带完整,产率高,无DNA污染;A260/A280比值为2.03,A260/A230比值为1.96;反转录的cDNA经PCR检测质量较好。另用CTAB-NaAc法对橡胶树的花、树皮、胚、根进行总RNA的提取,均能得到较高质量的总RNA。     

一种简单有效的提取外周血白细胞总RNA的方法

[目的]介绍了一种提取动物外周血白细胞总RNA的方法。[方法]对从健康奶牛和患病奶牛中分离的外周血白细胞,采用RNAlater样品储存液进行保存。采用RNAultra总RNA提取试剂盒提取白细胞总RNA,检测其浓度和纯度,并通过RT-PCR进一步检测其质量。[结果]提取总RNA中28 S和18 SRNA条带清晰,比例适当,OD260/OD280为1.8～2.0。以提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的牛G3PDH基因序列,未见非特异性产物。采用该方法提取的总RNA质量好、纯度高,能满足cDNA文库构建、分子克隆和基因表达等研究的需要。[结论]该方法具有简单有效、实用性强和重复性好的特点,值得广泛应用。     

富含多糖·多酚植物组织RNA的提取

[目的]介绍一种适合于富含多糖、多酚植物材料的RNA提取方法。[方法]采用改进的异硫氢酸胍法提取植物材料的RNA,用紫外分光光度计测定其浓度和纯度,并通过RT-PCR进一步检测其质量。[结果]提取总RNA中的28、18、5s条带清晰,比例适中,OD260nm/OD280nm。为1．8—2．0。以提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的片段,无非特异性产物。[结论]该方法简便易行,成本较低,适合于富舍多糖、多酚植物材料的RNA提取。     

黑穗醋栗花中RNA提取方法的比较研究

以黑穗醋栗花为试验材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较了Trizol法、硼砂-SDS法、CTAB法、植物RNA提取试剂盒等4种方法提取总RNA的质量和纯度。结果表明,利用硼砂-SDS法提取的RNA,28S和18S两条带型清楚,两条带之间无弥散现象,且纯度最高,D260/D280达到2.06,经计算得出总RNA产率达61.60μg·g-1,反转录条件下可得500～1000bp之间的弥散cDNA条带,进一步证明硼砂-SDS法提取得到的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的需要。     

不同方法对石榴果皮总RNA提取效果的影响

比较了3种RNA提取方法提取石榴果皮RNA的效果。结果表明:改良CTAB法提取的总RNAOD值在1.91左右,得率为48μg/g;Trizol法提取总RNAOD值在1.15左右,得率为86μg/g;试剂盒提取得到的总RNAOD值在1.24左右,得率为124μg/g。分别反转录为cDNA,根据不同植物花青素合成关键酶基因保守序列,设计简并引物进行RT-PCR,其中只有改良CTAB法得到的cDNA有扩增条带。表明改良CTAB法比较适合富含多糖和酚类物质石榴果皮总RNA的提取。     

不同方法提取淡色库蚊总RNA的定量比较分析

采用异硫氰酸胍法、Trizol法、Trizol改良法、CTAB法及Trizol+ CTAB 5种方法提取的淡色库蚊总RNA,以期得到最优方法.提取总RNA并用电泳及紫外分光光度计检测,经过Dnase I消化后反转录成cDNA,以此为模板,用CYP6F1引物作定量表达分析.结果表明,与其他几种方法相比,CTAB法提取的效果最好,提取的样品纯度高,完整性好,杂质较少,DNA残留少,降解不明显.CTAB法提取的RNA可以作为eDNA合成和基因克隆的模板,能够满足后续研究的需要.     

新疆巴旦木花药总RNA的提取

[目的]建立一种有效的巴旦木花药总RNA提取方法,为巴旦木花粉SFB基因克隆和自交不亲和机制研究奠定基础.[方法]利用改良的CTAB法从巴旦木(Amygdalus communis L.)花药中提取高质量的总RNA.[结果]该方法获得的巴旦木花药总RNA完整性好、无多糖和蛋白质的污染,产量较高(鲜花药为283.44 μg/g),OD260/OD280在1.89～1.99,OD260/OD230>2.0.提取的巴旦木花药总RNA反转录成cDNA,以SFB(S-haplotype-specific F-box gene)基因简并引物PCR扩增,获得了目的片段.[结论]改良的CTAB法是一种简单、快速有效的巴旦木花药总RNA提取方法,提取的花药总RNA能够满足巴旦木进一步的分子生物学研究.