8种菌株代谢物对茄链格孢菌菌丝生长及孢子萌发的抑制

为防治由茄链格孢菌(Alternaria solani)引起的番茄早疫病,研究了8株有益微生物的代谢产物对茄链格孢菌菌丝生长及孢子萌发的抑制,并且测定了曲霉、细黄链霉菌对病菌的持续抑菌作用。结果发现5株芽孢杆菌代谢物原液对茄链格孢菌菌丝生长均有一定的抑制作用,茄链格孢菌分生孢子萌发的受抑制率分别为:地衣芽孢杆菌44.87%、胶冻样芽孢杆菌51.97%、枯草芽孢杆菌55.44%。细黄链霉菌对茄链格孢菌具有较强的持续抑制作用,且黑曲霉、米曲霉、细黄链霉菌作用后茄链格孢菌菌丝发生了畸变、原生质浓缩等现象。表明8种微生物代谢物对茄链格孢菌具有抑菌活性,且效果明显。     

芹菜叶斑病病原菌的分离鉴定、生物学特性及其生防菌筛选

为了明确甘肃省定西市芹菜叶斑病的病原,开展了病原菌分离、形态学特征和分子生物学鉴定、生物学特性研究,并初步筛选了该病原菌的生防菌。确定病原菌Q1为细极链格孢(Alternaria tenuissima),该菌菌丝体生长最适碳源和氮源分别为玉米粉和硝酸钾,最适pH为7.5,最适温度为25℃;该菌孢子萌发最适温度为25℃、最适pH为7;光照有利于菌丝体生长,但对孢子萌发无影响;菌丝体和孢子的致死温度均为55℃处理10min。采用对峙法测定了蜡样芽胞杆菌(4-2-1)、贝莱斯芽孢杆菌(F3A)、甲基营养型芽孢杆菌(9-2-1)、解淀粉芽孢杆菌(SL1)及荧光假单胞菌(YG)5种生防细菌菌株对芹菜叶斑病菌Q1的拮抗效果,结果表明这5株生防菌对Q1菌株均具有拮抗作用,其中解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的抑菌率最高,达到69.80%。首次明确了定西市芹菜叶斑病是细极链格孢(A.tenuissima)引起的,解淀粉芽孢杆菌(SL1)具有生防潜力,研究结果为深入开展芹菜链格孢叶斑类病害的生物防治提供了理论依据和技术支撑。     

内生拮抗细菌对草莓2种病原真菌的抑制作用

从草莓健康植株中分离得到9株内生细菌，与灰葡萄孢菌和腐皮镰刀菌进行对峙试验，选出对这2种病原真菌有明显拮抗作用的2种菌株BS-CM511-2和BA-CM11-1。通过形态及16S rRNA序列鉴定可知，菌株BS-CM511-2为枯草芽孢杆(Bacillus subtilis),菌株BA-CM11-1为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)。BA-CM11-1和BS-CM511-2这2株内生拮抗菌能够显著抑制灰葡萄孢菌和腐皮镰刀菌的生长，抑菌半径分别为36.0、27.0、30.3、24.3 mm。这2株拮抗内生菌无菌发酵液稀释10倍下对灰葡萄孢菌孢子萌发的抑制率分别达到81.75%和88.80%,稀释5倍下对腐皮镰刀菌孢子萌发的抑制率分别达到60.80%和69.20%,枯草芽孢杆菌发酵液稀释10倍对灰葡萄孢菌的抑制效果较好，枯草芽孢杆菌发酵液稀释5倍对腐皮镰刀菌抑制效果较好，这2株内生菌可作为生防资源应用于草莓病害的防治。     

3株拮抗细菌对草莓根腐病菌C16-4的抑菌作用

为了明确枯草芽孢杆菌T4-4、S-30和S-11菌株的抑菌作用,以草莓根腐病菌C16-4为靶标,采用平板对峙培养法、孢子萌发法、产孢量统计法和光学与电子显微镜观察等方法,进行了抑菌作用研究。结果表明:枯草芽孢杆菌T4-4、S-30和S-11的菌株和代谢产物都能够抑制草莓根腐病菌C16-4的生长,并且在代谢产物中含有脂肽类物质;这些脂肽类物质具有很好的抑菌活性,抑菌带宽度可以达到9.5、8.5、7.0mm;3株枯草芽孢杆菌的代谢产物能抑制病菌分生孢子的产生,产孢抑制率分别为79.2%、50%和33.3%;对分生孢子的萌发有推迟和抑制的作用,在处理24h内的任意时段孢子萌发率均低于对照;通过光学和电子显微镜观察菌丝的变化,发现枯草芽孢杆菌代谢产物能致使菌丝细胞壁表面粗糙,出现细胞膨大、扭曲等畸形现象。     

芽孢杆菌B15及其代谢产物对棉花枯萎病菌的抑菌效果

考察了芽孢杆菌B15菌株及其代谢产物对棉花枯萎病菌的抑菌效果及作用方式.结果表明,芽孢哌杆菌B15对棉花枯萎病菌有较强的抑菌作用,抑菌圈达30mm,尤其对病原菌孢子抑制作用较强.无菌发酵滤液对孢子萌发的抑制率为46%,处理孢子悬液6h可使54%的孢子致死.     

禾谷镰刀菌拮抗菌ZQT-9的鉴定与抑菌活性

为发掘对禾谷镰刀菌具有较好拮抗能力的细菌,从小麦植株残体中分离筛选得到1株细菌菌株ZQT-9,根据形态学特征、生理生化特征以及16S rDNA序列分析相结合的方法进行鉴定,并对其抑菌活性进行研究.结果表明,菌株ZQT-9为多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),对禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)的抑菌率为(57.6±0.8)％.菌株ZQT-9无菌发酵液对禾谷镰刀菌的孢子萌发和菌丝生长具有明显抑制作用,并且当无菌发酵液浓度为50％时可以完全抑制禾谷镰刀菌孢子的萌发.PCR检测结果表明,菌株ZQT-9可能具有编码多黏菌素B、多黏菌素C、水解蛋白酶、β-葡聚糖及杀镰孢菌素等5种抗菌物质的相关基因.此外,菌株ZQT-9对链格孢菌(Alternaria alternata)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、凸脐蠕孢(Exserohilum turcicum)、甜樱间座壳菌(Diaporthe eres)等4种植物病原真菌均具有明显的抑制作用.综上所述,多黏类芽孢杆菌ZQT-9具有潜在的生物防治应用前景.     

樱桃叶斑病生防菌株萎缩芽孢杆菌菌株QH-588的筛选鉴定

【目的】从枸杞根际土壤中分离可拮抗樱桃叶斑病菌的细菌菌株,为樱桃叶斑病防治提供生防资源。【方法】利用稀释平板法从枸杞根际土壤中分离可培养细菌,以平板对峙法测定分离菌株对樱桃叶斑病菌杨柳刺盘孢菌（Colletotrichum salicis）、链格孢菌（Alternaria alternaria）和细极链格孢菌（A. tenuissima）的拮抗效果,结合形态学、生理生化特性和基于16S rDNA、GyrA和GyrB基因序列的系统发育分析对拮抗菌株进行鉴定;通过显微镜观察拮抗菌株对靶标病原菌菌丝形态和孢子萌发的影响,选用樱桃离体叶片培养测定其对樱桃叶斑病的预防和防治效果。【结果】从枸杞根际土壤中共分离获得660株细菌,有10株细菌对供试靶标病原菌具有较强的拮抗效果,其中有4株细菌（QH-588、QH-668、QH-667和QH-664）的发酵液对靶标病原菌的抑制率超过50.00%,经鉴定,菌株QH-588为萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）,菌株QH-664、QH-667和QH-668为枯草芽孢杆菌（B. subtilis）。通过显微观察发现,萎缩芽孢杆菌菌株QH-588可明显抑制靶标病原菌的菌丝生长和孢子萌发;生防效果测定结果表明,菌株QH-588发酵液在樱桃离体叶片上对靶标病原菌具有预防和防治作用。【结论】萎缩芽孢杆菌菌株QH-588具有防治樱桃叶斑病的生防潜力。     

人参黑斑病拮抗细菌的分离筛选和鉴定

从吉林省万良地区采集到的人参根际土壤中分离、纯化获得113株细菌,采用平板对峙法筛选出15株对人参链格孢菌具有良好抑制作用的菌株。用生长速率法对抑菌效果较好的菌株ND-60进行抑菌谱的测定,并进行盆栽试验验证其对人参黑斑病的防治效果。抑菌试验结果表明:菌株ND-60发酵液对链格孢菌的抑制率达82.43%,其还具有较好的广谱抑菌作用。盆栽试验结果表明:ND-60对人参黑斑病的防治效果为80.21%(保护作用)和72.22%(治疗作用),与农药对照组相比差异均显著(P0.05)。经形态特征鉴定、生理生化特征鉴定及16SrDNA序列分析,确定ND-60为芽孢杆菌属解淀粉酶芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。     

复配芽孢杆菌对撑绿杂交竹枯萎病的生物防治效果研究

目的通过对比单一芽孢杆菌和复配芽孢杆菌对撑绿杂交竹枯萎病的防治效果,为开发防治撑绿杂交竹枯萎病的稳定高效、低成本的复合菌剂提供理论基础。方法本文制备了解淀粉芽孢杆菌B01-2、枯草芽孢杆菌B23-1以及二者的复配菌株的发酵滤液,并采用菌丝生长速率法、孢子萌发法和盆栽试验法,研究了各菌株发酵产物对病原菌尖孢镰刀菌菌丝生长、孢子萌发以及对杂交竹抗性生理指标的影响。结果复配芽孢杆菌处理对病原菌抑制效果显著高于单一菌株。复配芽孢杆菌菌落直径和孢子萌发率分别为1.9 cm和8.8%;单一菌株B01-2和B23-1的菌落直径与孢子萌发率分别为3.4 cm、4.1 cm和17.8%、31.0%;盆栽防效试验中,芽孢杆菌处理组的枯萎病发病率比对照低。复配芽孢杆菌的发病率(50%)较单一菌株B01-2(60%)与B23-1(60%)更低;复配芽孢杆菌对撑绿杂交竹枯萎病的防治效果达到81.5%,高于单一菌株B01-2(70.4%)与B23-1(63.0%)。杂交竹叶片生理指标测定表明,3种处理的发酵液都能诱导激发杂交竹体内的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)防御酶的活性,降低杂交竹叶片叶绿素的分解和减少丙二醛(MDA)的生成,触发植物的系统抗病性,增强植株免疫能力。此外,复配菌株较单一菌株对杂交竹叶片的生理指标的影响更明显。结论复配芽孢杆菌具有强大的拮抗活性,在室内盆栽苗条件下能够有效防治撑绿杂交竹枯萎病,具有潜在的应用开发前景。      

番茄枯萎病拮抗菌KCKB1的分离、鉴定及生防效果

为筛选获得针对番茄枯萎病的生防菌,从山东寿光设施大棚内番茄根际筛选获得1株细菌菌株KCKB1,通过菌落形态特征观察以及16S rRNA基因序列分析,菌株KCKB1确认为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其开展对峙培养、种属鉴定、生长特性研究、抑菌谱检测以及盆栽防效验证。结果表明,菌株KCKB1能有效抑制番茄枯萎病,盆栽防治效果达到61.46%;菌株KCKB1可以提高番茄植株叶片内抗氧化酶(SOD、CAT)以及抑菌物质合成酶(PAL、PPO)的活性,进而提高植株抗病性。同时,菌株KCKB1还具有溶磷、固氮、产铁载体、产ACC脱氨酶、产IAA等促生功能,能明显促进番茄植株的生长。此外,菌株KCKB1对链格孢菌、甘薯长喙壳菌、灰葡萄孢、烟草疫霉菌、尖孢镰刀菌甘薯专化型5种病原菌均具有良好的的抑菌效果。综上,枯草芽孢杆菌菌株KCKB1具有良好的生防潜力与广阔的应用前景,为对番茄枯萎病进行生物防治提供了菌种资源。     

解淀粉芽孢杆菌LZN01对西瓜专化型尖孢镰刀菌的抑制效应

西瓜专化型尖孢镰刀菌(FON)是西瓜枯萎病的病原菌,生物防治是控制西瓜枯萎病的重要手段。研究解淀粉芽孢杆菌LZN01对FON的抑制效应。试验结果表明,解淀粉芽孢杆菌LZN01对FON的抑菌率为57.07%;FON孢子悬液与解淀粉芽孢杆菌LZN01发酵上清液按体积比1∶1混合培养6、12、24 h,孢子萌发抑制率分别为86.21%、67.50%、56.04%,抑制率随时间的增加呈下降趋势;经解淀粉芽孢杆菌LZN01发酵上清液处理,通过扫描电镜观察发现FON菌丝细胞膨大且畸变,菌丝表面严重受损;温度在-20℃～60℃之间,pH值在4～9之间,解淀粉芽孢杆菌LZN01的发酵液抑菌效果稳定;解淀粉芽孢杆菌LZN01发酵上清液抑菌能力稳定。综上所述,解淀粉芽孢杆菌LZN01对FON具有较好的抑制能力,且抑菌效果稳定,在西瓜枯萎病生物防治方面具有较大的开发和应用价值。     

内生枯草芽孢杆菌B215对香蕉弯孢霉叶斑病抑制作用初探

采用对峙培养法和孢子悬滴法研究内生枯草芽孢杆菌菌株B215对香蕉弯孢霉叶斑病菌的控制作用,试验结果显示,菌株B215明显抑制香蕉弯孢霉叶斑病菌菌丝向四周均匀扩展,抑菌带宽度0.4cm,菌株滤液的EC50值为5.10%,表明内生枯草芽孢杆菌B215对香蕉弯孢霉叶斑病病原真菌具有很强的拮抗作用;而对菌株B215的抑菌谱测定结果显示,B215有广泛的抑菌谱,可产生广谱抗菌物质,生产中有望利用该菌株研制成生防制剂用于香蕉重要病害的防治。     

两种生防制剂对食用菌杂菌的抑制作用

利用生长速率法和悬滴法,测得生防药剂多粘类芽孢杆菌剂和枯草芽孢杆菌剂对食用菌常染杂菌脉孢霉和青霉菌丝的生长速率和孢子萌发的抑制效果。试验结果显示,两种生防制剂对脉孢霉和青霉有一定的抑制作用,其中,多粘类芽孢杆菌药剂对脉孢霉和青霉孢子萌发的抑制作用明显,抑制率分别为90.44%和65.04%;而枯草芽孢杆菌药剂对脉孢霉和青霉的菌丝生长的抑制效果在处理中表现为最高,抑制率分别为36.29%和46.66%。因此,多粘类芽孢杆菌药剂可以作为杂菌孢子抑制剂,枯草芽孢杆菌药剂可以作为杂菌菌丝生长的抑制剂。     

4个黄芩内生真菌菌株的鉴定及抗菌活性研究

通过形态学观察和ITS序列系统发育分析确定了4个黄芩内生真菌菌株的分类学地位,N.SBA9为密实链格孢Alternaria compacta,N.SBA10为链格孢属的种Alternaria sp.,N.SBA 34为节菱孢属的种Arthrinium sp.,N.SBA 35为粉红螺旋聚孢霉Clonostachys rosea,其有性型为淡色生赤壳菌Bionectria ochroleuca。以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、致病性大肠埃希氏菌Enteropathogenic Escherichia coli(EPEC)、肠炎沙门氏菌Salmonellae enteritis、九州镰孢霉Fusarium kyrushuense等7种指示菌对上述4个菌株的发酵液原液、发酵液乙醇提取物和菌丝体乙醇提取物进行抑菌活性测定的结果表明,各菌株的发酵液原液的抗菌谱较广,分别可拮抗3~6种指示菌;发酵液和菌丝体的醇提物的抗菌谱较窄,分别可拮抗1~2种指示菌,且抑菌活性普遍较高,抑菌圈直径大多大于20 mm。     

几种植物提取物对4种植物病原真菌的抑制作用

以链格孢菌、芭蕉炭疽菌、尖孢镰刀菌、灰葡萄孢菌等4种植物病原真菌为供试菌,对采自福建省福州地区16种植物乙醇提取物的抑菌活性进行测试,结果表明,0.0lg·mL-1下,有8种植物对至少1种病原真菌孢子的萌发抑制率达60%以上,大飞扬、杨梅、桃金娘3种植物的乙醇提取物对孢子萌发与菌丝生长都有较好的抑制效果.对这3种植物用极性从小至大的溶剂依次提取,提取物抑菌活性表明,活性物质多只分布在其中1至3种极性溶剂层中,不同极性提取物的抑菌能力与抑菌范围存在较大差异.大飞扬的丙酮提取物对芭蕉炭疽菌孢子可能具有毒害作用,乙酸乙酯提取物使芭蕉炭疽菌和链格孢菌的孢子芽管生长不正常.     

枯草芽孢杆菌BAB-1脂肽类化合物的分离及稳定性分析

枯草芽孢杆菌菌株BAB-1是一株高效防治番茄灰霉病的生防细菌。通过盐酸沉淀、甲醇萃取的方法,从该菌株的发酵上清液中提取出一种脂肽类化合物。该物质能够显著抑制番茄灰霉菌菌丝生长及分生孢子的萌发,孢子萌发抑制率为83.02%。抑菌谱试验表明该物质对多种植物病原真菌具有明显的抑制作用。此外,该抑菌物质对热稳定,能耐受较广的pH范围,对多种蛋白酶不敏感,在几种常用有机溶剂中保持抑菌活性基本不变。结果表明枯草芽孢杆菌菌株BAB-1产生的脂肽类物质性质稳定,具有较强的抑菌作用。     

马铃薯早疫病拮抗菌及其抑菌作用研究

为了利用拮抗细菌防治马铃薯早疫病,通过平板对峙试验,筛选出对茄链格孢菌有显著抑制作用的细菌,即解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D1、嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)he41、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)hd213。生长速率法,检测该三株菌单菌发酵、混菌发酵对茄链格孢菌的抑制作用。结果表明:he41、D1与hd213单菌发酵均对马铃薯早疫病有较强的抑制作用,且抑菌效果随发酵液浓度的增大而增强,在发酵液浓度为4%时,其抑菌率分别为68.59%、62.12%和73.87%;与单菌株发酵相比,该三株菌混菌发酵无增效作用。菌株he41、D1与hd213对马铃薯早疫病具有较大的生物防治潜力。     

一株西瓜专化型尖孢镰刀菌抑制菌的分离鉴定及其抑菌活性

以黑龙江省扎龙自然保护区的植物根际土壤为实验材料,采用对峙实验筛选抑制西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum, FON)的菌株,并采用菌丝生长、孢子萌发和扫描电镜等方法研究其抑菌特性。结果表明,分离获得了一株能抑制FON的菌株MLY01,根据其菌落形态特征和16S rDNA碱基序列同源性结果,鉴定MLY01为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis,将其命名为Bacillus licheniformis MLY01。当培养基与无菌滤液比例为1∶1时,菌丝生长抑制率为71.85%,生物量抑制率为79.55%,36 h孢子萌发抑制率为76.81%。将FON孢子悬液与无菌滤液按1∶1比例混合,培养12 h,孢子数目降低,表面粗糙,菌丝畸形扭曲,表面有多处凹陷。菌株MLY01对FON的生长具有明显的抑制作用,在生物菌剂的研发方面具有潜力。     

一株毛竹根部内生细菌SHEN20121的鉴定及其对植物病原真菌的抑制作用

在分离鉴定毛竹(Phyllostachys edulis)根部相关内生菌的过程中,筛选得到具有生物活性的菌株SHEN20121。通过对其16S rDNA序列的分析,结果显示其与类芽孢杆菌属中97个细菌的序列相似性为97%~99%;系统学分析显示该菌株与多粘类芽孢杆菌聚在一个分支上,bp支持率为100,因此菌株SHEN20121被鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。通过平板对峙实验证明了菌株SHEN20121对多种植物病原真菌:尖孢镰孢(Fusaricum oxysporum),互隔链格孢(Alternaria alternata),立枯丝核菌(Rhizoctonia solani),灰葡萄孢(Botrvtis cinerea),小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora),柑橘青霉病菌(Penicillium italicum)均具有抑制作用,其中对灰葡萄孢,小孢拟盘多毛孢和柑橘青霉病菌的抑菌效果明显,尤其是首次发现对拟盘多毛孢属病原菌的抑制作用。作者认为该菌在生物农药方面具有潜在的应用价值,并可能将在植物病害的生物防治方面发挥重要作用。     

红枣黑斑病链格孢属真菌的生物学特性

为研究新疆红枣中链格孢毒素的产生规律，对从南疆不同枣园黑斑病‘骏枣’中分离纯化的10株链格孢属真菌（5株链格孢菌和5株细极链格孢菌）的菌落生长速率、产孢量、孢子萌发率、菌苔致病力、毒素产生种类及含量等生物学特性进行研究，结果表明：（1）各菌株在红枣培养基上的生长速率、产孢量等都优于PDA培养基，但是产毒种类及含量却普遍低于PDA培养基；（2）在红枣培养基和PDA培养基上，链格孢菌（Alternaria alternata）均比细极链格孢菌（Alternaria tenuissima）的生长速率更快、产毒种类及含量更多；（3）综合考虑产孢量、孢子萌发率和致病力，JZAa05为优势菌株。