小麦高、低分子量谷蛋白亚基单向一步分离法新探

利用50%的异丙醇提取普通小麦谷蛋白亚基,并用单向一步 SDS-PAGE 的方法较好地分离了小麦高、低分子量谷蛋白亚基,同时还研究了不同的提取方法及电泳条件对提取效果的影响。结果表明预处理和烷化作用对低分子量谷蛋白亚基的分离效果影响较大。该方法比较简便且分辨率较高,可以用于我国小麦低分子量谷蛋白亚基的各项研究。     

小麦低分子量麦谷蛋白亚基研究进展

低分子量麦谷蛋白是小麦贮藏蛋白的主要成分,是小麦加工品质的重要影响因子。本文作者从小麦低分子量谷蛋白亚基的分类、染色体定位、基因克隆以及与品质性状的关系等方面,综合论述了低分子量麦谷蛋白亚基的研究进展,以期为今后小麦品质育种提供理论依据。     

小麦Glu－3位点编码亚基的研究进展

 小麦Glu-3位点编码的低分子量麦谷蛋白亚基对面筋有重要决定作用,但由于其分子量与醇溶蛋白相近,单向电泳很难将其分离出来。低分子量谷蛋白亚基自身的复杂多态性,也增加了其深入研究的难度,因此有关低分子量麦谷蛋白亚基的文献报道较少,更谈不上将其用于育种实践。本文拟从亚基命名、遗传及多态性、结构、分子标记及与烘烤品质的关系等方面全面回顾了低分子量麦谷蛋白亚基的研究状况。     

苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的分离纯化

以膨大期的富士苹果果皮为材料,通过匀浆、硫酸铵沉淀、透析、聚乙二醇6000浓缩、CM-SephadexC-50离子交换柱和Sephadex G-100分子筛凝胶过滤层析分离纯化出苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白。用还原糖法测定其具有抑制多聚半乳糖醛酸酶活性,bradford法进行定量,经非连续SDS-PAGE分析为电泳纯,根据标准蛋白鉴定其亚基的分子量为41 kD。为苹果PGIP的纯化建立了一种有效的方法。     

强筋小麦贮藏蛋白的积累动态、种类及相对含量分析

小麦贮藏蛋白是面粉品质的主要评价指标。本研究以不同高分子量麦谷蛋白亚基组合的强筋小麦(济麦44和济麦229)和中筋小麦(济麦22)为试材,分析强筋小麦和中筋小麦及4+12和5+10高分子量麦谷蛋白亚基组合的籽粒醇溶蛋白、麦谷蛋白及谷蛋白大聚合体(GMP)在小麦灌浆期的积累动态和成熟籽粒中的贮藏蛋白种类、相对含量。结果表明,强筋小麦和中筋小麦的麦谷蛋白和醇溶蛋白在整个小麦灌浆期的积累趋势相同,均持续上升,但GMP积累却存在较大差异,强筋小麦的GMP含量持续增加而中筋小麦呈“下降-上升-下降-上升”的趋势。从高分子量麦谷蛋白亚基组成类型上看,5+10亚基组合的醇溶蛋白、麦谷蛋白及GMP在灌浆中后期的含量均高于4+12亚基组合类型。通过TMT(tandem mass tags)蛋白质组学分析发现,3个小麦品种的成熟籽粒共检测到53个贮藏蛋白,共分为三类,包括27个醇溶蛋白、16个Avenin-like蛋白和10个麦谷蛋白。济麦44较济麦22相对含量高的原因是大多数贮藏蛋白的表达量高,而济麦229相对含量高的原因是部分贮藏蛋白超高量表达。本研究结果可为我国小麦品质改良和优质小麦生产提供技术参考...     

小麦高分子量麦谷蛋白亚基及其遗传学研究进展

高分子量麦谷蛋白亚基是麦谷蛋白的重要组分,对小麦籽粒品质有重要作用。高分子量麦谷蛋白亚基的结构、组成类型、遗传等与品质密切相关。广泛深入分析和研究小麦高分子量麦谷蛋白亚基的结构特点、遗传特性及其作用机制对于小麦品质改良有重大意义。本文从高分子量麦谷蛋白亚基分离鉴定、分子构象、基因定位、遗传表现、新技术应用等方面,综述了HMW-GS及其遗传学研究进展。     

小麦品种高分子量谷蛋白亚基的组成分析

利用SDS—PAGE电泳分析了49个国内外小麦品种的高分子量谷蛋白亚基组成。结果表明：39个国内小麦品种中,5 10亚基的频率这64％。不同面筋强度的小麦品种高分子量麦谷蛋白亚基组成存在明显差异,强筋品种含有较多的1或2^*、7 8或17 18或14 15、5 10亚基组合类型,亚基总评分一般为9～10分;弱筋品种含有较多的Null、7 9、2 12亚基组合类型,亚基总评分一般为5～8分;中筋品种则处于中间类型,亚基总评分差异较大。然而,有些中筋甚至弱筋小麦品种也含有5 10亚基或者一般强筋品种才具有的亚基组合,有的强筋小麦品种反而没有5 10亚基,说明低分子量的谷蛋白亚基和醇溶蛋白质组分对面筋强度也具有重要作用。     

基于R5 ELISA和RP-HPLC法的小麦发芽过程中主要致敏蛋白含量变化

【目的】探索不同萌发状态小麦麸质蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白等主要致敏蛋白含量的动态变化规律,以及醇溶蛋白、谷蛋白亚基的含量变化,为无麸质食品的研发和发芽小麦的利用提供科学依据。【方法】控制发芽条件获得7种不同萌发状态的小麦,采用SDS-PAGE分析不同萌发状态小麦醇溶蛋白（Gliadins）、谷蛋白（Glutenin）的亚基组成变化,通过R5 ELISA和RP-HPLC进一步测定小麦发芽过程中麸质蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白亚基的含量变化。【结果】以R5 ELISA法和RP-HPLC法两种方法可有效测定小麦中麸质蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白亚基的含量,发芽处理对上述过敏蛋白及亚基有不同程度的影响;麸质蛋白含量在发芽初期变化不大,后期显著减少;ω-醇溶蛋白相对含量变化不显著;α-/β-醇溶蛋白的相对含量在发芽过程中大幅度降低（从未处理小麦籽粒的41.85%降低到发芽处理后的31.51%—35.35%,P＜0.01）,γ-醇溶蛋白相对含量从31.37%显著增加到发芽处理后的36.69%—39.02%（P＜0.05）;高分子量麦谷蛋白亚基（high molecular weight glutenin subunit,HMW-GS）和低分子量麦谷蛋白亚基（low molecular weight glutenin subunit,LMW-GS）的相对含量变化不显著,HMW-GS略有减少,从8.66%（未处理组）降低到5.94%（芽长1/4）,再回升到7.28%（芽长=籽粒长）;LMW-GS略有增加,从8.30%（未处理组）增加到10.45%（芽长=籽粒长）。【结论】R5 ELISA法和RP-HPLC法两种方法都可以有效进行小麦致敏蛋白定量分析;发芽过程中小麦的致敏蛋白含量总体呈下降趋势,特别是在发芽芽长达籽粒长1/2时,含有最多致敏肽的α-/β-醇溶蛋白下降尤为显著,提示小麦进行适度发芽处理可以降低致敏性。     

普通小麦低分子量麦谷蛋白亚基与农艺性状和品质性状关系的研究

研究了普通小麦低分子量麦谷蛋白亚基与农艺性状和品质性状的关系，并对利用高，低分子量麦谷蛋白亚基共同预测品质进行了分析，结果表明，低分子量麦谷蛋白亚基与农艺性状和品质性状都有一定的相关关系，但与农艺性状相关密切的亚基大多与品质性状没有显著的关系；逐步回归分析表明，利用两种蛋白组分共同预测品质，结果比一种组分更准确可靠，在对沉淀值的分析中，人选的亚基（按效应值排列）增效谱带依次为LGlu12,LGlu1,HGlu1,HGlu7 8,LGlu10,LGlu9,HGlu5 10,LGlu15；减效谱带依次为LGlu5,LGlu13,LGlu7。复决定系数R^2=0.5776，表明沉淀值变异的57.76%可由上述11个高，低分子量麦谷蛋白亚基的线性关系说明。     

基于R5 ELISA和RP-HPLC法的小麦发芽过程中主要致敏蛋白含量变化

【目的】探索不同萌发状态小麦麸质蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白等主要致敏蛋白含量的动态变化规律,以及醇溶蛋白、谷蛋白亚基的含量变化,为无麸质食品的研发和发芽小麦的利用提供科学依据。【方法】控制发芽条件获得7种不同萌发状态的小麦,采用SDS-PAGE分析不同萌发状态小麦醇溶蛋白(Gliadins)、谷蛋白(Glutenin)的亚基组成变化,通过R5 ELISA和RP-HPLC进一步测定小麦发芽过程中麸质蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白亚基的含量变化。【结果】以R5 ELISA法和RP-HPLC法两种方法可有效测定小麦中麸质蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白亚基的含量,发芽处理对上述过敏蛋白及亚基有不同程度的影响;麸质蛋白含量在发芽初期变化不大,后期显著减少;ω-醇溶蛋白相对含量变化不显著;α-/β-醇溶蛋白的相对含量在发芽过程中大幅度降低(从未处理小麦籽粒的41.85%降低到发芽处理后的31.51%—35.35%,P0.01),γ-醇溶蛋白相对含量从31.37%显著增加到发芽处理后的36.69%—39.02%(P0.05);高分子量麦谷蛋白亚基(high molecular weight glutenin subunit,HMW-GS)和低分子量麦谷蛋白亚基(low molecular weight glutenin subunit,LMW-GS)的相对含量变化不显著,HMW-GS略有减少,从8.66%(未处理组)降低到5.94%(芽长1/4),再回升到7.28%(芽长=籽粒长);LMW-GS略有增加,从8.30%(未处理组)增加到10.45%(芽长=籽粒长)。【结论】R5 ELISA法和RP-HPLC法两种方法都可以有效进行小麦致敏蛋白定量分析;发芽过程中小麦的致敏蛋白含量总体呈下降趋势,特别是在发芽芽长达籽粒长1/2时,含有最多致敏肽的α-/β-醇溶蛋白下降尤为显著,提示小麦进行适度发芽处理可以降低致敏性。     

关于拉面品质的小麦高分子量谷蛋白亚基评分系统研究

【目的】研究有关拉面品质的小麦高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)评分系统，提高优质拉面用小麦品种的选育效率。【方法】选用100个春小麦品种，分别测定其HMW-GS以及拉面色泽、表观状态、适口性、韧性、粘性、光滑性、食味和总评分等8项拉面评分指标，并通过数量化理论及统计学鉴评方法，研究HMW-GS与拉面评分指标的关系。【结果】亚基1、2*、N、7、7+8、17+18、22、2+10、2+11、2+12、5+10、10的拉面品质总评分分别为5.40、5.35、0、2.55、2.56、9.19、0.05、0.15、1.49、1.14、10.00、5.14。针对拉面评分指标与HMW-GS得到的评分系统包含8个多元线性回归方程（R2＞0.98）。利用HMW-GS组成，能够对8个拉面评分指标进行准确预测。【结论】经综合评价，认为优质拉面小麦理想的亚基组合应为1、17+18、5+10组合或2*、17+18、5+10组合，在拉面小麦品种选育中可做为早代选择的依据；2+10、2+11和2+12亚基对拉面品质的作用普遍较低，为劣质亚基，在拉面小麦品种选育中应尽量避免出现这些亚基。     

黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶的纯化及部分性质研究

黑曲霉(Aspergillus niger)WM20-11固态发酵成熟曲,经磷酸缓冲液浸提、硫酸铵分步盐析、DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析等分离纯化手段,最终获得了Native-PAGE、SDS-PAGE纯的酸性β-甘露聚糖酶组分,其纯化倍数为25.08,收率为5.1%。Sephadex G-100凝胶过滤层析和SDS-PAGE测得纯酶的相对分子质量分别为39 kD和40 kD,表明该酶以单体形式存在;IEF-PAGE测得该酶的等电点为4.0;含糖量测定为19.6%;酶蛋白氨基酸组成中(Asp+Glu)/(Lys+Arg)为3.74。     

不同育种阶段主栽品种麦谷蛋白亚基组成分析

对黑龙江省各育种时期具有代表性的克字号小麦主栽品种HMW～GS组成进行分析。结果表明：各个阶段育成的小麦品种中,含有5＋10优质亚基的比例为33．33％,其中品质阶段育成品种中带有5＋10亚基的占23．81％。在今后的育种中应引入一些如：13＋16,17＋18,14＋15,5’＋12等合有优质亚基的亲本材料,并注重对各位点亚基的组合岛筛选,逐步丰富克字号小麦优质基因库,为东北春麦区高产优质小麦新品种的选育提供丰富的基础种质。     

大豆多肽分子质量分布与苦味的确定

利用葡聚糖凝胶（Sephadex G-25)柱层析和高压液相色谱（HPLC）测定大豆多肽分子质量与水解度以及分子质量与苦味之间的关系。试验结果表明，随着水解度的增加，大豆蛋白水解物分子质量变小，当水解度约为25％时，其分子质量绝大多数在500－1000u之间。分子质量为500－1000u的大豆多肽苦味较强。     

香菇多糖的纯化和结构分析

香菇中提取到的水溶性粗多糖,用Ｓｅｖａｇ法结合酶法去蛋白,透析,甲醇分级得到２个多糖级分,分别命名为Ｌｅｎ１和Ｌｅｎ２。去蛋白后多糖经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析纯化得精品多糖Ｌｅｎ３,经纸层析及凝胶过滤层析表现单一区带或单一峰。经酸水解后纸层析和气相色谱分析表明Ｌｅｎ２含甘露糖、葡萄糖,摩尔比为甘露糖：葡萄糖＝１０．５０：１．００,Ｌｅｎ３含木糖、甘露糖、葡萄糖,摩尔比为木糖：甘露糖：葡萄糖＝０．６７：２．４５：１．００。２００￣４００ｎｍ紫外扫描,无核酸和蛋白吸收峰。４０００￣６５０ｃｍ＾－１红外光谱扫描,呈多糖类特征吸收峰。     

香菇多糖的纯化和结构分析

香菇中提取到的水溶性粗多糖,用Ｓｅｖａｇ法结合酶法去蛋白,透析,甲醇分级得到２个多糖级分,分别命名为Ｌｅｎ１和Ｌｅｎ２。去蛋白后多糖经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析纯化得精品多糖Ｌｅｎ３,经纸层析及凝胶过滤层析表现单一区带或单一峰。经酸水解后纸层析和气相色谱分析表明Ｌｅｎ２含甘露糖、葡萄糖,摩尔比为甘露糖：葡萄糖＝１０．５０：１．００,Ｌｅｎ３含木糖、甘露糖、葡萄糖,摩尔比为木糖：甘露糖：葡萄糖＝０．６７：２．４５：１．００。２００￣４００ｎｍ紫外扫描,无核酸和蛋白吸收峰。４０００￣６５０ｃｍ＾－１红外光谱扫描,呈多糖类特征吸收峰。     

双孢蘑菇2796凝集素的提取及其部分理化性质研究

双孢蘑菇2796的子实体经PBS浸提、40％～60％饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-100分子筛柱层析纯化得到双孢蘑菇2796凝集素.双孢蘑菇2796凝集素经SDS-PAGE检测为单一条带,测得亚基相对分子质量为15.7 kD,通过Sephadex...     

相同遗传背景下7和7+8亚基对小麦品质的影响

 高分子量麦谷蛋白与小麦品质的关系十分密切。但分析结果往往因所用材料而有差异,主要是不能消除不同遗传背景的影响。春小麦品种高原602所含高分子量麦谷蛋白亚基为Null,7和2+11,永良12号所含高分子量麦谷蛋白亚基为Null,7+8和2+11,二者差异仅在于Glu-B1位点的高分子量麦谷蛋白亚基不同,即永良12号比高原602多了个8亚基。用高原602和永良12号分别按正、反交组合进行杂交,在杂种F₃代,选择只有7亚基和7+8亚基差异的单株,在遗传背景相似的条件下,研究7和7+8亚基对小麦品质的影响。结果表明：7亚基和7+8亚基两组籽粒各项品质指标的t测验结果均不显著,说明7亚基和7+8亚基对小麦品质的影响无明显差异,即8亚基的有无对7亚基的作用无明显影响。     

苦瓜子蛋白分离纯化的研究

把苦瓜子粉碎后用50 mmol/L乙酸抽提、硫酸铵沉淀,经透析得到蛋白粗提液,然后用考玛斯亮蓝G-250法测蛋白质含量为16.517μg/g;SDS-PAGE分析表明,苦瓜种子含有3种蛋白组分,相对分子质量分别为29.5,22.0和9.6 kDa,其中分子量为29.5 kDa的含量最多,9.6 kDa的含量次之,22.0 kDa的含量最少。再对粗提液过Sephadex G-100凝胶柱进一步纯化得到4个主峰,吸光度分别为0.62,0.28,0.36,0.42;经SDS-PAGE检测,得知第1,2峰分子量均为29.5 kDa。     

黑果枸杞多糖的纯化工艺研究

研究黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr)水溶性多糖的纯化工艺。结果表明,三氯乙酸法为最佳脱蛋白方法,过氧化氢法为最佳脱色方法,脱色条件为温度45℃,时间30min,pH 8～9,用量为每100mL粗糖液5mL H2O2。黑果枸杞经超声加热提取、醇沉、脱蛋白、脱色后得黑果枸杞粗多糖(crude Lycium rutheni-cum polysaccharides,CLRP)。CLRP经DEAE-Cellulose柱层析,用蒸馏水以及0.05、0.1、0.25、0.5mol/LNaHCO3洗脱液进行分段洗脱,分离得到LRP1、LRP2、LRP3、LRP4、LRP5五个多糖组分,多糖含量最高的LRP5经Sephadex G-100柱层析后得到LRGP5。经高效凝胶渗透色谱法分析,LRGP5为均一多糖,测得相对分子质量约为1.37×105。