新疆饲料乳酸菌的多样性与系统进化分析(英文)

[目的]对新疆吐鲁番地区常用饲料样品(玉米、苜蓿、小麦)的乳酸菌资源进行初步调查及多样性分析。[方法]利用平板分离法分离3种饲料原料中的乳酸菌,再以MRS+CaCO3固体培养基进行筛选。对所分离得到的80株乳酸菌进行形态学观察、生理生化检测及16SrDNA序列分析,探讨其分类学地位。[结果]从苜蓿中得到乳酸菌20株、小麦中得到乳酸菌41株、玉米中得到乳酸菌19株。经生理生化和16SrDNA基因序列鉴定可知,80株乳酸菌分属于2个属,即乳杆菌属、肠球菌属;7个种,即干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)、副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)、肠道球菌(Entercoccusfaecium)、耐久肠球菌(Entercoccusdurans)、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)、海氏肠球菌(Entercoccushirae)。3种饲料原料中干酪乳杆菌和肠道球菌普遍存在。除了这2种乳酸菌外,小麦中还有鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌。苜蓿内有植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、海氏肠球菌、耐久肠球菌。玉米内有植物乳杆菌、耐久肠球菌。[结论]新疆吐鲁番地区不同饲料中乳酸菌存在较大的多样性,干酪乳杆菌、肠道球菌等乳酸菌为饲料发酵的关键菌群。     

3株奶牛生殖道分离乳酸菌的益生特性评价

[目的]评价健康奶牛生殖道分离乳酸菌益生特性,发掘其作为益生菌制剂细菌成分的可能性,为开发防治奶牛子宫内膜炎的微生态制剂提供科学依据.[方法]以直肠把握法无菌采集产后40~60 d健康奶牛子宫分泌物,采用MRS培养基在厌氧条件(氧气浓度<1.2%,37℃)下分离乳酸菌,通过扩增16S rDNA序列进行鉴定,并进行抑菌活性、耐药性、黏附子宫内膜上皮细胞特性及安全性评估,分析其开发成益生菌制剂的可能性.[结果]经16S rDNA测序分析共获得8株乳酸菌,分别为植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、蜡样芽孢杆菌、鼠李糖杆菌、蒙氏肠球菌、德氏乳杆菌、戊糖乳杆菌和嗜热链球菌,根据预试验结果选取其中3株(植物乳杆菌、副干酪乳杆菌和鼠李糖杆菌)进行益生特性评价.3株奶牛生殖道乳酸菌培养上清液对大肠杆菌、无乳链球菌及金黄色葡萄球菌均表现出良好的抑制效果,约在接种3 h后进入典型的指数生长期,生长至平台期后植物乳杆菌OD620 nm为1.375、鼠李糖杆菌OD620 nm为1.314、副干酪乳杆菌OD620 nm为1.250.副干酪乳杆菌的产酸能力最强,植物乳杆菌和鼠李糖杆菌的产酸能力几乎相同,但均不产H2O2.3株奶牛生殖道乳酸菌对青霉素G、氯霉素、阿莫西林、氨苄西林、头孢噻肟、头孢唑林和四环素等7种抗菌药物高度敏感;能同时检测到磺胺类耐药基因sul2,在副干酪乳杆菌和鼠李糖杆菌中还同时检测到氨基糖苷类耐药基因aphA-2和β-内酰胺类耐药基因blaIMP.副干酪乳杆菌能很好地黏附于奶牛子宫内膜上皮细胞,且黏附效率与副干酪乳杆菌浓度呈正相关.3株奶牛生殖道乳酸菌的混合菌液经腹腔注射小鼠后未引起脏器病变,且对小鼠的行为活动、采食饮水亦无明显影响.[结论]从奶牛生殖道分离获得的植物乳杆菌、副干酪乳杆菌和鼠李糖杆菌可作为潜在的益生菌,用于开发防治奶牛子宫内膜炎的微生态制剂.     

甜高粱与苜蓿混贮品质评价与乳酸菌分离鉴定

为了评价混合青贮的品质和筛选优良的乳酸菌菌株,本研究以不同比例(甜高粱与苜蓿比例分别为0∶100,20∶80,40∶60,60∶40,80∶20,100∶0)的甜高粱与苜蓿混合青贮为材料,对混合青贮进行了感官评价和发酵品质分析,通过MRS平板分离、生理生化分析和16S rRNA相结合的方法对不同比例混合青贮中乳酸菌的种类、生理生化特性进行了研究。结果表明,40%SS比例的混合青贮效果最佳。从不同比例混合青贮中共分离得到18株乳酸菌,4株鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus),5株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),3株耐久肠球菌(Enterococcus durans),2株肠膜明串珠菌肠膜亚种(Leuconstoc mesenteroides subsp mesenteroides),2株屎肠球菌(Enterococcus faecium),乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)各1株。各菌株产酸试验和生长试验结果表明,植物乳杆菌产酸性能好,生长速度快,可作为制作混合青贮饲料的优良菌株。     

15株健康奶牛生殖道乳酸菌的分离鉴定及抑菌活性

为防治奶牛产后子宫内膜炎提供益生菌株,从健康奶牛生殖道分离筛选益生乳酸菌。利用子宫采样器采集28头产后45～65 d健康奶牛子宫内容物,通过体外培养、分离和纯化,结合形态、生理生化特征和16S rDNA序列进行鉴定,并检测菌株的抗菌活性和物质、抗生素敏感性及细胞黏附性。结果表明：共分离筛选出15株乳酸菌,分别为唾液乳杆菌7株,粪肠球菌4株,殊异肠球菌、海氏肠球菌、耐久肠球菌和绒毛肠球菌各1株。15株乳酸菌均具有较好的抗菌活性和抗生素敏感性;殊异肠球菌、海氏肠球菌、耐久肠球菌和唾液乳杆菌主要抗菌物质为有机酸;绒毛肠球菌和粪肠球菌主要抗菌物质除有机酸外还分泌细菌素。殊异肠球菌和绒毛肠球菌对奶牛子宫内膜上皮细胞具有较强黏附能力。殊异肠球菌和绒毛肠球菌可作为潜在的益生菌,用于开发防治奶牛子宫内膜炎的微生态制剂。     

添加剂青贮饲料的调制

（一）发酵促进剂 1．乳酸菌制剂．添加乳酸菌制剂是人工扩大青贮原料中乳酸菌群体的方法。目前，主要使用的菌种有植物乳杆菌，肠道球菌、戊糖片球菌及干酪乳杆菌。一般每100千克青贮原料中加入乳酸菌培养物0．5升或乳酸菌制剂450克。[第一段]     

小麦秸秆发酵液中优质乳酸菌的分离·纯化与鉴定

[目的]从小麦秸秆发酵液中筛选并鉴定适合于青贮添加剂的高效乳酸菌。[方法]用MRS＋CaCO3固体培养基筛选,分离出78株乳酸菌;经形态学、革兰氏染色、生理生化试验、产酸效率试验、耐酸能力试验和耐盐试验等挑选出43株产酸率高的乳酸菌。通过16S rDNA法对该乳酸菌进行鉴定。[结果]已获得43株产酸能力强的菌株1,6S rDNA鉴定结果表明,37株为副干酪乳杆菌亚种（Lacto-bacillus paracasei subsp.）1,株为鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）,5株为肠球菌（Enterococcus faecium）。[结论]从小麦秸秆中筛选出43株具有较强产酸能力的乳酸菌,对研发优质青贮饲料添加剂具有一定的指导意义。     

菌糠饲料的发酵菌株筛选、营养成分及.抑菌性能分析

为了探讨发酵菌糠在饲料中的应用价值,试验选取6株乳酸菌菌株(嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌)进行了菌糠的发酵试验,测定了发酵菌糠的总酸、酸溶蛋白含量、乳酸菌总数及感官品质,并分析了菌糠发酵前后营养成分和抑菌性能的变化。结果表明:6株乳酸菌中,植物乳杆菌的发酵效果最佳,总酸含量和酸溶蛋白含量、乳酸菌菌落总数综合而言优于其余各组。此外,经发酵后,菌糠产生浓郁的发酵香气,粗蛋白、总酸、酸溶蛋白等营养成份含量显著提高,并产生抑菌性能。     

荣昌猪肠道乳酸菌筛选及鉴定

通过稀释涂布法,在含有碳酸钙的MRS平板上选取有明显透明圈、革兰氏染色为阳性、接触酶实验为阴性的菌株,反复划线纯化培养并保存,然后经16SrRNA序列同源性分析鉴定菌株.结果从猪大肠中分离出5株乳酸菌,经鉴定D8为干酪乳杆菌、D12为鸟肠球菌同属菌株、D14为约翰逊氏乳杆菌、D15为唾液乳杆菌、D21为植物乳杆菌;从小肠中分离出4株乳酸菌,经鉴定XF为嗜酸乳酸菌、XH为乳酸乳球菌、XI为约翰逊氏乳杆菌、XQ为能动乳杆菌.表明荣昌猪肠道内含有丰富的乳酸菌群,乳杆菌是荣昌猪肠道内乳酸菌中的优势菌.     

耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定

对采自于包头市的2批农家酸菜汁进行了乳酸菌的分离,得到的34株菌经耐酸试验后,发现有6株在pH值3.0的条件下生长.采用传统的形态学、生理生化特性分析对这6株菌进行鉴定,鉴定结果为:3株杆菌中植物乳杆菌、弯曲乳杆菌、干酪乳杆菌各1株;3株球菌中屎链球菌2株、鸟肠球菌1株.     

笼养成年蛋鸡十二指肠中乳酸菌的分离与鉴定

试验从笼养蛋鸡十二指肠内容物中分离乳酸菌,经过革兰氏染色、菌落形态观察和糖发酵生化鉴定乳酸菌种属。结果显示,分离出16株革兰氏阳性菌,经抑菌试验选出7株乳酸菌,分别鉴定为乳杆菌保加利亚种,耐盐乳杆菌,嗜淀粉乳杆菌,坎氏乳杆菌,食淀粉乳杆菌,干酪乳杆菌耐热亚种,肠膜明串球菌乳脂亚种。     

饲料玉米中优质乳酸菌的分离和鉴定

[目的]从饲料玉米中筛选适合做青贮饲料添加剂的高效乳酸菌。[方法]用MRS＋CaCO3固体培养基筛选乳酸菌,经形态学和生理生化试验进行初步鉴定,测定其产酸效率;挑选出12株产酸率强的乳酸菌进行耐盐和耐酸能力的测定,并对其进行16 S rDNA鉴定。[结果]从饲料玉米中共分离得到44株乳酸菌,12株产酸能力强的菌株经生理生化试验鉴定分别属于明串珠菌属、乳杆菌属和肠球菌属,且12株菌株都具有良好的耐盐、耐酸能力。经16 S rDNA鉴定：A4、B9、B11、B12和B14为植物乳杆菌;A1、A2、A7、A11和B8为肠膜明串珠菌葡聚糖亚种;A8和A9为兼性肠球菌。[结论]从饲料玉米中筛选出具有较强产酸能力的乳酸菌,作为青贮饲料添加剂。     

3株乳杆菌表面疏水性及凝聚性研究

[目的]探讨干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌和植物乳杆菌的表面疏水性以及凝聚性。[方法]采用MATH法测定3株乳杆菌的表面疏水率,自凝聚试验测定菌株的自凝聚率,共凝聚试验测定3株乳杆菌与致病菌的共凝聚率。[结果]3个菌株的涡旋时间与表面疏水性呈负相关,静置时间与自凝聚作用呈正相关,且凝聚作用与致病菌的粘附和菌体自身特性有关。[结论]3株乳杆菌在肠道中均表现出良好的凝聚能力。     

南阳酵子中乳酸菌的分离鉴定及性能研究

采用MRS培养基纯培养的方法从南阳酵子中分离出6株乳酸菌,通过生理生化反应、形态学观察和16S rDNA测序进行鉴定,对分离菌株的生长性能、产酸性能、人工胃液的耐受性和耐胆盐性能进行研究。结果表明：从5个样品中分离到6株乳酸菌分别为发酵乳酸杆菌(Limosilactobacillus fermentum)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)和食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)。其中,I-8发酵乳酸杆菌(Limosilactobacillus fermentum)产酸性能、人工胃液耐受性和耐胆盐性能最高,具有一定的应用开发潜力。     

自制酸菜中植物乳杆菌的分离与鉴定

[目的]了解自制酸菜中的有益菌种,为分析其营养价值提供依据。[方法]采用涂布分离和烛缸厌氧法对自制酸菜中的有益菌种进行培养,并对得到的细菌菌落形态特征及生化特征进行分析。[结果]经筛选,得到3株乳酸杆菌,其中2株为植物乳杆菌,1株为短乳杆菌。[结论]自制酸菜中含有多种植物乳酸杆菌,具有较高的营养价值。     

传统酸面团中优势乳酸菌的分离及性能研究

以自然发酵的传统酸面团为研究对象,对其中的优势乳酸菌进行分离及鉴定,并评价其产酸性能。结果表明:共筛选到7株乳酸菌,经形态学及16S rDNA序列分析鉴定为面包乳杆菌1株、短乳杆菌1株、植物乳杆菌3株、白面粉乳杆菌2株;供试乳酸菌的产酸能力具有菌种及菌株特异性,其中植物乳杆菌L2-2产酸能力最强,37℃发酵24 h发酵液pH值可达3.81。     

盐穗木青贮中乳酸菌的分离及筛选

【目的】合理利用牧草资源,为新疆南疆地区畜牧业提供优质青贮,研究探讨了花果期盐穗木青贮后的营养价值和发酵品质,同时为提高青贮饲料发酵品质筛选提供乳酸菌资源。【方法】以新疆阿克苏地区花果期盐穗木为原料制作实验室小剂量自然发酵青贮,在发酵第150天时对比青贮前后盐穗木的干物质（DM）、粗蛋白（CP）、可溶性糖（WSC）、中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的含量变化,测定盐穗木青贮的pH、氨态氮（NH3-N）、乳酸（LA）、乙酸（AA）、丙酸（PA）和丁酸（BA）含量,并采用实验室纯培养方法结合生理生化分析,对青贮中乳酸菌的种类和形态学进行分类,通过葡萄糖发酵产酸产气试验、细菌微量生化反应碳源发酵试验、耐盐试验、耐酸试验和温度生长试验等生理生化试验对所筛选菌株进行研究。运用核酸 Blast技术,将所测序列与GenBank数据库进行对比,选择并下载与所测序列同源性最高的已知分类地位的菌种,与本试验所测菌株的序列一起,采用 Clustal 进行比对,用MEGA5.0绘制系统发育树,确定各菌株分类地位,对分离的菌株进行种属鉴定。【结果】与青贮前相比,由于乳酸菌发酵利用原料中的糖类物质导致青贮后盐穗木中的干物质和可溶性糖含量下降,同时在青贮发酵过程中盐穗木茎秆中难降解的水溶性碳水化合物被乳酸菌降解为易被利用的纤维,导致中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的含量升高,青贮pH为4.250-4.286,乳酸含量为60.923-61.283属于优良品质青贮饲料的范围。从自然发酵盐穗木青贮中分离得到3株粪肠球菌（Enterococcus faecium）、1株屎肠球菌（Enterococcus lactis）、2株蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）、1株戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）、1株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）和1株布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）。9株菌均能在pH4-7环境下能生长,在3.0%和6.5% NaCl条件下及10-45℃范围内生长,且生长状况良好,同时能利用D-葡萄糖、D-甘露糖、纤维二糖、D-甘露醇、D-果糖、蔗糖等多种碳源。其中,戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）、布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）产酸速率和生长速率较快,且具有很强的耐酸耐盐能力,在5-45℃范围内生长良好。【结论】将盐穗木制成青贮后其营养成分含量和发酵品质均处于良好水平,可将戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）、布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）这3株菌选作青贮饲料制作过程中的添加剂。     

河南洛阳地区泡菜中微生物多样性及乳酸菌种群的研究

[目的]分析河南洛阳地区泡菜中的微生物区系,从中分离鉴定乳酸菌,并研究这些乳酸菌的特性。[方法]选取11种河南洛阳农家自制泡菜,分离检测其微生物区系、生理生化特性,并利用API50CH检测乳酸菌对49种不同碳源的同化能力。[结果]分离株都是革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性和兼性厌氧菌。根据所分离到的乳酸菌的形态学和生理生化特性分类鉴定,9株菌属于Lactobacillus planta-rum、6株属于Lactobacillus fermentum,3株属于Leuconostoc mensenteroides,另外2株也属于Leuconostoc,但无法将其鉴定到种。[结论]河南洛阳农家自制泡菜中分离到的菌株多属于Lactobacillus和Leuconostoc属,其中大部分为Lactobacillus。