牛卵母细胞体外成熟技术研究进展

牛卵母细胞体外成熟是一项重要的繁殖生物技术,但是由于卵母细胞没有经历体内促黄体激素（LH）峰启动前的生长过程及生物事件干扰了胞质成熟,导致体外发育能力低于体内成熟的卵母细胞。卵母细胞成熟过程复杂,涉及细胞核、细胞质及分子成熟。牛卵母细胞体外成熟受多种因素影响,其中包括卵母细胞来源、颗粒细胞与卵母细胞间相互作用及体外培养环境等。迄今为止,为了提高牛卵母细胞的体外发育能力,许多学者模拟卵母细胞体内环境发展了一些新的体外成熟技术,诸如体外延迟自发恢复减数分裂成熟、外源卵母细胞分泌因子促进卵母细胞体外成熟及模拟生理条件下卵母细胞成熟等方法。本文综述了牛卵母细胞成熟过程、影响卵母细胞体外成熟因素及近年来提高牛卵母细胞体外成熟的新方法。     

性成熟前山羊卵母细胞减数分裂进程的研究

以卵丘卵母细胞复合体(COCs)为研究对象,研究比较了性成熟前山羊和成年山羊卵母细胞体外核成熟进程及其卵母细胞孤雌发育的能力。结果表明,成年山羊和性成熟前山羊卵母细胞体外成熟过程中减数分裂各时相出现的时间不同。在整个体外成熟培养过程中,性成熟前山羊卵母细胞GV期存在时间较长(7.21 h),大约占成熟时间的1/4,在成熟培养23.96 h后才能进入MⅡ期。对成年羊而言,其卵母细胞GV期存在时间相对较短(2.94 h),占成熟培养时间的1/9,大约在成熟培养20.64 h后进入MⅡ期。成熟培养24 h和27 h,成年羊卵母细胞成熟率差异不显著,但是性成熟前山羊卵母细胞成熟率差异显著(P<0.05)。与成年山羊相比,羔山羊卵母细胞孤雌发育能力较差,可能与其卵母细胞本身成熟缺陷有关。     

钙离子在哺乳动物卵母细胞发育关键时期的作用

Ca~(2+)是广泛存在的信号分子,钙信号转导对多种细胞生理生化活动有重要的调控作用,越来越多的证据表明钙信号参与卵母细胞减数分裂。钙稳态是细胞内Ca~(2+)信号在时间和空间上的动态平衡,对卵母细胞钙稳态的研究是目前重要的研究热点之一。本文综述了钙稳态及钙离子对卵母细胞成熟和发育过程中的双线期阻滞恢复、MII期阻滞恢复和细胞凋亡的作用,发现某些哺乳动物双线期及MII期适当增加胞内钙离子水平可以使卵母细胞退出阻滞,而超出生理水平的胞内钙则会诱导细胞凋亡,并通过探究钙离子在卵母细胞减数分裂恢复和调控凋亡过程中的作用机制,为辅助生殖技术的进一步研究提供依据。     

线粒体与卵母细胞成熟发育质量的关系研究进展

卵母细胞的成熟和发育是一个极为复杂的生物学过程,涉及到核质和细胞结构的诸多变化。线粒体作为卵母细胞中含量最丰富的细胞器,在这一过程中发挥了极其重要的作用,其产生的ATP是卵母细胞、受精卵及胚胎发育最直接的能量来源,同时伴随其数量、结构和空间分布的变化满足了卵母细胞成熟和发育过程中不同时期的能量需求。因此,线粒体对卵母细胞成熟和发育质量影响巨大。综述了线粒体结构及功能变化对卵母细胞成熟和发育质量的影响,以及利用线粒体营养剂改善卵母细胞成熟发育质量的研究进展。     

半胱氨酸对猪卵母细胞体外发育潜力的影响

本研究的目的是探讨在卵母细胞体外成熟过程中向培养液中添加不同浓度的半胱氨酸对猪卵母细胞体外成熟和体外受精的影响．实验结果表明：半胱氨酸在浓度为0．1mg／ml时，卵母细胞体外成熟率和受精率都显著提高（p〈0．05），同时测定了不同浓度的半胱氨酸培养的卵母细胞在24h、38h、46h细胞内GSH含量，其浓度在卵母细胞成熟过程中随成熟时问逐渐升高，当卵母细胞进入MⅡ期时，GSH浓度达到高峰（7．36—8．57pmol／oocyte）．GSH的浓度反映了卵母细胞细胞质的成熟度，可以作为卵母细胞细胞质成熟度的一个特征性指标．     

猪体细胞克隆研究初探

本研究对猪卵母细胞的体外成熟和猪颗粒细胞核移植进行了初步探索试验一证明,体外成熟48h,来自3-6mm大小卵泡的卵母细胞成熟质量较好,当卵泡较大或较小时,成熟质量较差;实验二表明,当卵母细胞成熟液添加7%浓度的发情母牛血清时,成熟效果较好;实验三证明,在猪的克隆过程中,去核时当吸掉1/4卵母细胞胞质时重构胚的分裂率是12.8%,显著高于吸掉1/3卵母细胞胞质时2.5%的分裂率.     

猪卵母细胞体外成熟研究

[目的]探讨猪卵母细胞体外成熟的最佳培养条件。[方法]以NCSU-23为基础培养基,研究不同激素组合和培养时间（36、40、44和48 h）对猪卵母细胞体外成熟的影响。[结果]猪卵母细胞体外培养44 h后,成熟率最高,为81.4%;猪卵母细胞在成熟培养液培养22h后,再在无激素培养液中继续培养22 h时,成熟率最高;添加性腺激素的组成熟率显著高于不添加组,差异显著（P〈0.05）。[结论]在体外成熟培养过程中,添加性腺激素能显著提高猪卵母细胞成熟率。     

模拟微重力条件下体外成熟卵母细胞的受精能力

分别对1 g重力和模拟微重力条件下成熟的昆明小鼠卵母细胞进行体外受精试验,研究模拟微重力条件下成熟卵母细胞的受精能力,探讨模拟微重力对卵母细胞成熟的影响。结果显示,1 g重力条件下成熟的小鼠卵母细胞的体外受精率为35.82%,显著高于模拟微重力条件下成熟的卵母细胞的体外受精率。可见,模拟微重力不利于卵母细胞的体外成熟,模拟微重力损伤卵母细胞的受精能力。     

促性腺激素对动物卵母细胞体外成熟中的作用研究进展

为了提高繁殖率和优良性状个体,获得足够数量和高质量的卵母细胞,研究人员进行了卵母细胞体外培养技术,将未成熟卵母细胞在体外培养成熟,过程主要包括减数分裂的恢复和完成、细胞质和细胞核的成熟。而培养液是未成熟卵母细胞体外培养成功与否的关键因素,因此培养体系的成分和主要添加的激素是研究完善这项技术的重要问题,促性腺激素作为培养液添加的主要成分更是研究的目标。促性腺激素能够促进卵母细胞成熟并在排卵期促性腺激素峰的作用下恢复第一次减数分裂并排卵,但是这个过程中是促卵泡素(FSH)还是促黄体激素(LH)起主要作用目前还不明确,促性腺激素诱导哺乳动物卵母细胞成熟的分子机制仍需要进行研究。文章主要针对现阶段促性腺激素对体外培养的研究成果和作用进行综合阐述。     

免疫抑制素/卵泡抑素对家畜胚胎体外生产效率的提高

在家畜卵母细胞体外成熟培养过程中添加不同浓度的抗抑制素抗体或抗卵泡抑素抗体,通过观察卵母细胞的成熟率、激活后的卵裂率及囊胚发育率,研究免疫抑制素与卵泡抑素对家畜卵母细胞体外发育能力的影响。结果显示:就水牛、奶牛及猪而言,在卵母细胞成熟过程中分别单独添加抗抑制素抗体与抗卵泡抑素抗体均能显著提高卵母细胞的体外成熟与卵裂率,添加的适宜浓度为50~100μg/ml。而添加抗卵泡抑素抗体还能显著提高水牛和猪的囊胚发育率。卵母细胞体外成熟期添加抗抑制素抗体与抗卵泡抑素抗体能显著提高卵母细胞的发育能力,提高早期胚胎的发育数量和质量,为改善家畜胚胎体外发育和生产提供了新方法。     

不同激素对卵母细胞体外成熟培养的影响

本试验对比在成熟液中添加不同来源的促性腺激素,即进口的和国产的促性腺激素(FSH+LH)对山羊卵母细胞体外培养成熟效果的影响。二者对山羊卵母细胞成熟均有促进作用,卵母细胞成熟率都极显著高于对照组(P<0.01),分别为67.3%、68.9%和15.6%,但是它们之间的成熟率差异不显著(P>0.05)。国产激素成本低,使用方便,在卵母细胞体外成熟培养时,完全可以用国产的促性腺激素代替进口的FSH和LH。     

EGF对牛卵母细胞成熟及孤雌发育能力的影响

研究表明：表皮生长因子（EGF）对牛卵母细胞的成熟和孤雌激活后发育有促进作用。与对照相比,添加10 ng·mL^-1的EGF就可以明显提高牛卵母细胞体外成熟率、激活后的卵裂率和囊胚率。但EGF水平的提高,对提高卵母细胞成熟率的作用要高于提高后期胚胎发育的作用。40 ng·mL^-1的EGF的卵母细胞成熟率明显高于30 ng·mL^-1时的成熟率,但囊胚率未见明显提高。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响

[目的]为绵羊克隆试验中卵母细胞的体外成熟及去核时间提供参考。[方法]利用盲吸法结合荧光显微镜检查,对绵羊不同成熟时间卵母细胞去核的效率及其后续重构胚的发育进行对比。[结果]体外成熟培养19~21 h的绵羊卵母细胞在成熟率上显著高于体外成熟培养16~18 h(P(0.05),在去核成功率上显著高于体外成熟培养22~24 h(P(0.05);3个试验组在卵裂率、囊胚率上差异不显著(P(0.05),但是体外成熟培养19~21 h的试验组囊胚平均细胞数要显著高于其他2组(P(0.05)。[结论]体外成熟培养19~21 h的卵母细胞较适于作为受体细胞进行绵羊核移植,可以显著提高囊胚的质量。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响(英文)

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响(英文)

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

Effects of in Vitro Maturation Time of Oocytes on Sheep Nuclear Transfer Efficiency

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

亮甲酚蓝筛选对广西巴马小型猪孤雌激活及克隆重构胚早期发育的影响

[目的]探讨亮甲酚蓝(BCB)染色是否可以筛选出发育潜能优秀的卵母细胞.[方法]猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)在体外成熟培养前用13μmol/L BCB染色,根据卵母细胞胞质蓝色的有无分为阳性(BCB+,蓝色)和阴性组(BCB-,不着色),以在不含BCB的改良杜氏磷酸盐缓冲液(m-DPBS)中处理90 min为控制对照组,直接培育作空白对照,体外成熟培养后统计各组卵母细胞的核成熟率及孤雌激活胚胎、克隆重构胚胎(供体细胞来自广西巴马小型猪)的早期发育率.[结果]BCB+组卵母细胞的核成熟率(80.8%)显著高于BCB-组(44.2%)和空白对照组(72.4%);BCB+组的孤雌囊胚形成率(32.9%)显著高于BCB-组(10.1%),但与对照组(25.8%)之间无显著差异;BCB+组显微操作核移植胚胎的囊胚发育率(14.1%)显著高于BCB-组(3.4%),但与对照组之间无显著差异;各组手工克隆胚胎发育率之间无显著差异.[结论]BCB染色筛选出的卵母细胞具有较好的核成熟发育潜能,但未能显著改善广西巴马小型猪显微操作及手工克隆胚胎的早期发育.     

牛卵母细胞体外成熟及体外受精的研究

本研究分析了卵巢不同性周期阶段（卵泡期、黄体期）、外源激素（ＦＳＨ、ＬＨ、雌激素）和不同卵泡液浓度（１０％,２０％,３０％）对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,卵巢的不同性周期阶段对卵母细胞体外成熟的影响不大（６３９％和５８７％）;成熟培养基中添加ＦＳＨ（１０ｍｇ／Ｌ）,ＬＨ（５ｍｇ／Ｌ）和同时添加ＬＨ、雌二醇（１ｍｇ／Ｌ）,可以促进卵母细胞的体外成熟,成熟率分别为６３０％,６４０％,６９１％;卵泡液（１０％,２０％,３０％）代替血清,其成熟率分别为５０７％,５７６％,５１９％,２０％ｂＦＦ效果最好。本研究对精子的两种处理方法进行了比较,发现在相同精子密度条件下（１×１０６～２×１０６个／ｍＬ）,Ｐｅｒｃｏｌ液处理精子的受精率（４７１％）显著低于上浮法处理精子的受精率（５７１％）（Ｐ＜００５）。     

不同月份猪卵母细胞体外成熟效果比较

【目的】分析卵母细胞发育与不同季节（月份）的相关性,为提高猪卵母细胞的体外成熟效率奠定基础。【方法】2012年2～6月从南宁市某屠宰场收集猪卵巢采集卵母细胞,经体外成熟（IVM）40-44h,然后随机挑出成熟后的卯母细胞进行地衣红染色,相差显微镜下观察、记录卵母细胞发育成熟的各个时期,并分析卵母细胞发育时期与不同月份温度、湿度的相关性。【结果】随着月份的增加,GV期和GVBD期卵母细胞所占比例整体上呈下降趋势,AT期所占比例呈上升趋势,除5月外,MII期所占比例整体上也呈上升趋势,6月MII期所占比例最高,为42．31％。2、3、4月的GVBD期所占比例显著高于6月所占比例（4．40％）（P〈0．05）。从卵母细胞发育时期与不同月份温度、湿度的相关性分析结果可知,GV期、GVBD期、MI期3个时期与温度变化呈负相关,与湿度变化呈正相关;而AT期、MII期与温度变化呈正相关,与湿度变化呈负相关。【结论】不同月份猪卵母细胞的ⅣM效果存在一定差异。在高湿低温月份,GV期和GVBD期的卵母细胞所占比例较大,MII期所占比例较小;而在低湿高温月份,Gv期和GVBD所占比例较小,MII期所占比例较大。