5种高产洛伐他汀曲霉的筛选和鉴定

从不同生境(食品、土壤、空气、有机质等)收集的自然发酵样品中分离纯化获得150株曲霉纯菌株;经薄层层析法(TLC)初筛获得25株产洛伐他汀(Lovastatin)的曲霉菌株;进一步用高效液相色谱法(HPLC)复筛获得5株Lovastatin产量较高的曲霉菌株,产量范围为32~56 mg/L。对筛选的5株曲霉菌株进行形态特征描述和鉴定,依据曲霉菌株菌落特征、显微特征,结合18S r DNA或ITS r DNA基因序列,鉴定这5株菌株分别为棒曲霉(Aspergillus clavatus)、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)、菌核曲霉(Aspergillus sclerotiorum)、黑曲霉(Aspergillus niger)和米曲霉(Aspergillus oryzae)。     

米曲霉高产蛋白酶菌株的选育及在酱油酿造中的应用研究

[目的]筛选蛋白酶活力高的菌株酿造酱油.[方法]通过对沪酿3042米曲霉进行紫外线和LiCl复合诱变, 筛选高产蛋白酶突变株,并对其遗传稳定性和产生的蛋白酶性质进行研究,同时将该突变株应用于酱油酿造试验.[结果]通过诱变得到高产蛋白酶突变株米曲霉UF366, 其蛋白酶活力达1 440 U/g,比对照提高了33.3;.UF366菌株的遗传稳定性好,在pH 7.2,40℃时其中性蛋白酶活力最高;在90℃处理30 min,蛋白酶活力完全丧失.[结论]采用UF366米曲霉发酵的酱油氨基酸态氮和全氮分别为0.637和1.14 g/100 mL,与出发菌株沪酿3042米曲霉相比分别提高了36.7;和39.0;.     

醋曲菌的诱变选育及性能测定

以乌沙曲霉为出发菌，经紫外线（ｕ．ｖ）和亚硝酸复合因子诱变，筛选出一株糖化酶活性强的变异株，其液体曲和固体曲的糖化酶活力分别提高２８％和１５％以上。该菌生长快，产孢子多，产酸性能好，还具备分解淀粉的能力。     

贮藏苹果中霉菌的分离及抑制研究

对贮藏苹果中的霉菌进行了分离、纯化与初步鉴定,并用不同的食品防腐剂对其进行抑制。结果表明:从贮藏苹果中初步分离出3株霉菌,初步鉴定为青霉属(Penicillium)、黑曲霉属(Aspergillus niger)、米曲霉属(Aspergillus oryzae);不同浓度的山梨酸和苯甲酸钠对3株霉菌均有一定的抑制效果,随浓度的增大,抑制效果增强,其中以苯甲酸钠对霉菌的抑制效果最好,当其浓度为0.08%,平均抑菌率达99.72%。     

β-D-呋喃果糖苷酶高产菌株的筛选及培养特性研究

研究从米曲霉(Aspergillus oryzue 100.Aspergillus oryzar200)和一株假丝酵母(Candida gnilliermondil)中筛选出高产β-D-呋喃果糖苷酶的菌株Aspergillus aryzar 100．并确定了Aspergillus oryzar 100最佳培养条件为30℃，84～90h,最佳培养基组成为麦麸大豆乳清(2％～3％固形物)(1：8)和3％蔗糖。     

不同碳源和氮源对米曲霉产酶影响的研究

以米曲霉3.4383作为原始菌株,经紫外诱变,通过培养筛选,得到一株变异菌株UV-2。其蛋白酶和纤维素酶活比原始菌株(蛋白酶2526 U/g,纤维素酶987 U/g)提高较多,达到3250和1145 U/g,且遗传稳定性好。研究了不同氮源和碳源对米曲霉UV-2产蛋白酶和纤维素酶的影响。确定了饲料酶制剂生产中最佳的氮源和碳源分别为豆粕和麸皮,并进一步确定发酵培养基中最佳的氨源和碳源比为1∶5。     

庆阳市传统发酵豆瓣酱中高产蛋白酶霉菌的筛选与鉴定

为优选庆阳市传统发酵豆瓣酱高产蛋白酶霉菌,以甘肃庆阳5县区20个自然发酵豆瓣酱为材料,采用察氏培养基分离纯化、平板透明圈法初筛,发酵液蛋白酶活力复筛,通过孢子数测定和菌体形态观察鉴定及18S rDNA分子生物学鉴定.结果表明:所分离出的11株霉菌株中9株具有分解蛋白质的能力,其中BDH5蛋白酶活性最高,达到了4 351.68 U/g.对BDH5初步鉴定及18SrDNA鉴定,所优选的BDH5菌种为米曲霉(Aspergillus tamarii).     

北方黄酒麦曲中真菌的筛选·鉴定及系统发育分析

[目的]对北方黄酒麦曲中真菌的5.8S r DNA-ITS序列进行PCR扩增、测序以鉴定其中的真菌。[方法]利用梯度稀释法和划线纯化法共分离纯化得到5株霉菌和1株酵母,并对分离得到的真菌进行基因组DNA提取获得模板,用特异性引物进行PCR扩增,得到真菌的5.8Sr DNA-ITS片段,片段测序后进行Blast比对鉴定,构建系统发育树。[结果]将5株霉菌鉴定为多枝横梗霉(Lichtheimia ramosa),米曲霉(Aspergillus oryzae),产紫青霉(Penicillium purpurogenum),杂色曲霉(Aspergillus versicolor),交链孢霉(Alternaria mali),将一株酵母鉴定为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。[结论]利用分子生物学的方法对北方黄酒麦曲样品中的真菌进行了分离、纯化和鉴定。     

豆豉纤溶酶高产突变株的选育

[目的]从豆豉中筛选出高产纤溶酶的菌株,并通过平板筛选得到高产突变株。[方法]从6种不同豆豉样品中,筛选得到具有较高纤溶酶活性的菌株,采用物理化学诱变方法进行复合诱变,再利用纤维蛋白平板对诱变后菌株进行筛选。[结果]得到1株高纤溶酶活力菌株,命名为DC-YC41,酶活达到742 IU/ml。[结论]初步判断,得到的这株高纤溶酶活力菌株为枯草芽孢杆菌。     

高盐稀态酱油专用米曲霉的紫外诱变选育

以从酱油厂曲池中分离纯化的A3、A6、A18、A23和A27米曲霉菌株为出发菌株,经紫外诱变后,通过初筛、复筛和遗传稳定性试验,筛选获得1株蛋白酶和糖化酶活力高且遗传稳定的变异菌株A3U-12.该菌株蛋白酶活力1 245.17U/g及糖化酶活力831.28U/g,分别是同培养条件下的沪酿3.042酶活力的1.21倍和1.52倍.     

毛霉ZG2菌株产蛋白酶条件优化

对毛霉ZG-2菌株的产蛋白酶条件进行优化,以便于生抽大曲的大规模生产。结果表明,在大豆粉40%、麸皮60%、加水100%(V/m)、温度40℃条件下,制成的大曲蛋白酶活性最高,其中酸性蛋白酶酶活2 314U/g、中性蛋白酶酶活4 602U/g、碱性蛋白酶酶活1 352U/g;加120g/L食盐水溶液进行稀醪发酵60d,原料蛋白质转化率最高,达79.3%。     

微生物发酵法制备大豆小分子肽的工艺条件研究

[目的]探讨制备大豆小分子肽的最佳工艺条件。[方法]以脱脂大豆粉为原料,通过多种微生物菌种固态发酵产蛋白酶水解制备小分子肽,并应用正交试验优化制备条件。[结果]试验得出,微生物发酵法制备大豆小分子肽的最优发酵条件为:料液比1∶1.0 g/ml、0.2%黑曲霉、0.2%米曲霉、1‰酿酒酵母、发酵温度32℃,湿度80%、发酵时间36 h时,蛋白酶活力为466.8 U/g;最优水解条件为:水解温度55℃、水解时间10 h、pH 6.5、料液比为1∶2.5 g/ml时,水解度可达到90.61%。[结论]此工艺方法提高了脱脂大豆粉的食用价值和产品附加值。     

米曲霉固态发酵豆粕产蛋白酶条件的研究

通过单因素(温度、豆粕含量、发酵时间)试验和3因素3水平正交试验,以蛋白酶活为测定指标,对米曲霉固态发酵豆粕产蛋白酶条件进行研究,结果表明:米曲霉固态发酵豆粕产蛋白酶最优条件是发酵温度30℃,发酵时间66 h,豆粕含量93%,此条件下的酶活为572.85 U/g。     

米曲霉碱性蛋白酶基因的前导区对其在毕赤酵母中表达的必要性

为探讨前导区对米曲霉碱性蛋白酶基因在毕赤酵母中表达的必要性,本试验首先将米曲霉碱性蛋白酶的成熟肽编码基因(alp-m)和表达载体pPIC9K双酶切后连接,得到重组表达载体pPIC9K/alp-m.然后将其线性化后电转化毕赤酵母GS115.筛选阳性转化子进行甲醇诱导表达,并进行SDS-PAGE分析和碱性蛋白酶活力测定,同时在转录水平上对目的基因进行了Northern blot检测.将得到的结果与以前研究中得到的带有前导区的米曲霉碱性蛋白酶成熟肽基因在毕赤酵母中的表达结果进行对比.结果表明:如果没有前导区,米曲霉碱性蛋白酶成熟肽基因在毕赤酵母中表达,无论在胞内和胞外均检测不到目的蛋白.由此可见,米曲霉碱性蛋白酶基因在毕赤酵母中表达时必须有前导区的参与.     

利用鲶鱼骨及碎肉开发骨肉粉的工艺技术研究

以八须革胡子鲶鱼骨及碎肉为原料,通过高压蒸煮、绞碎、酶解、打浆、真空冷冻干燥或喷雾干燥等工艺制成鲶鱼骨肉粉,作为宠物食品加工中的配料。实验确定了中性蛋白酶为最适水解用酶。以骨肉粉的溶解性为指标,通过正交试验,确定了中性蛋白酶酶解鲶鱼骨及碎肉的最佳条件为:酶用量2 200 U/g、50℃酶解时间6 h、pH 7.0、底物浓度1.0∶3.0;真空冷冻干燥骨肉粉的水分含量为3.67%,喷雾干燥后骨肉粉的水分含量为8.09%,真空冷冻干燥方法生产的骨肉粉溶解度为37.14%,高于喷雾干燥方法的33.73%。对采用喷雾干燥方法生产的骨肉粉进行37℃保温试验,在贮存到第8周时,菌落总数为5.08 CFU/g,TBARS值为1.53 mg/100 g。推测该骨肉粉在常温条件下可贮存8～10个月。     

白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表达

研究分析固态发酵酸性蛋白酶生产菌株及其产品,ITS序列鉴定结果表明,该菌株为曲霉属,质谱分析结果表明其产品为Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I(EC.3.4.23.18)。根据Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I基因序列pep1(GI:473517)设计引物,以固态发酵酸性蛋白酶生产菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得pep1基因。序列分析结果表明,扩增片段与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶基因组序列相似性为99%,其编码蛋白与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶(GAA90749.1)相似性为100%,将该基因命名为pep B。构建黑曲霉表达载体p SZHG-pep B,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462,筛选得到在gla A位点发生同源重组纯合转化子。经摇瓶发酵后,对产物进行SDS-PAGE、酶活检测以及酸性蛋白酶酶学性质和酶稳定性研究。结果表明,纯合同源重组菌株经SDS-PAGE检测时在47 ku左右处有明显目的蛋白条带,其发酵产物酸性蛋白酶酶活达5 543 U·m L-1,为出发菌株152倍。对菌株所产酸性蛋白酶酶学性质研究发现,该酶最适反应温度为50℃,最适反应p H 3.0,在4℃和25℃条件下,酶在p H 3.0~4.0时较稳定。     

鲶鱼内脏鱼油的提取工艺研究

本文探讨了鲶鱼内脏中提取鱼油的工艺条件。以鱼油的感官质量和提取率为观察指标,以几种常用有机溶剂为提取剂,以中性蛋白酶为水解酶,通过单因素和正交试验确定提取溶剂的种类和酶解工艺参数。结果表明:提取剂以正己烷-异丙醇(3︰2)最好;提取的工艺条件为:先以中性蛋白酶进行酶解,设定料液比为1︰6,加酶量为1 400 u/g,酶解温度为45℃,酶解时间为2 h;经过滤后,按料液比1︰5加入正己烷-异丙醇(3︰2),振荡萃取25 min。在此条件下,鱼油的提取率为25.3%,产品为淡黄色、澄清透亮的液体;经测定,鱼油的酸价(mg KOH/g)、过氧化值(g/100 g)、碘价(g I2/100 g)分别为3.88、0.067 1、127.4。所以,采用有机溶剂和中性蛋白酶处理相结合对鱼油进行提取,鱼油的感官质量好,提取率高。     

抗黑曲霉乳酸菌筛选及其抑菌性能研究

本文以10株小米发糕源乳酸菌为研究对象,采用双层平板划线法和96孔板法筛选出对黑曲霉具有较好抑制效果的乳酸菌株,并以乳酸菌对黑曲霉菌落的抑菌率为指标,研究不同pH值、温度、酶处理下乳酸菌对黑曲霉的抑制效果。结果表明：菌株1-6-2X抗黑曲霉效果最好,抑菌率达到87.78%,在pH值3.0～5.0时仍保持抑菌性,有良好的热稳定性,经胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶处理后抑菌率显著下降,可作为开发抗黑曲霉乳酸菌的出发菌株。     

不同培养液和温度诱导球孢白僵菌BF菌株产酶特性的研究

分别采用Folin-酚法和DNS法对球孢白僵菌BF菌株在不同培养液、不同温度下产蛋白酶和几丁质酶的活性进行了研究。结果表明,白僵菌在3种不同的培养液中均能产生蛋白酶和几丁质酶。30℃以下时,以明胶培养液中产蛋白酶的活性最高（28℃时为127.09 U）;30℃以上时,以虫尸粉培养液产酶活性最高（35℃时为133.51 U）;球孢白僵菌在胶体几丁质中诱导几丁质酶的效果最好,其中30℃时酶活性最高（2.91 U）;其次为虫尸粉培养液,在28℃时酶活性最高（1.44 U）;细粉几丁质培养液的诱导效果在5个温度下都是最差;温度高于30℃时,这3种培养液诱导的几丁质酶活性都非常低。