大竹蛏源多肽与钙螯合物的制备工艺及生物活性研究

以大竹蛏肉蛋白和氯化钙为原料,复合酶解法制备大竹蛏源多肽螯合钙,考察螯合温度、时间、大竹蛏源多肽与钙离子的质量比和pH对螯合率和螯合物中钙含量的影响。根据响应面分析试验结果,在温度50℃,时间40 min,质量比1∶2,pH7.0条件下,螯合率为32.73%,螯合物中钙含量为41.89%。傅里叶变换红外光谱扫描检测结果表明,竹蛏源多肽与钙离子形成了螯合物,以硫代巴比妥酸法和抑菌圈试验分别验证此螯合物具有抗氧化活性和抑菌活性。     

鲟鱼软骨酶解条件优化及酶解物的体外抗肿瘤活性

为改善鲟鱼骨胶原的营养价值和生理功能,提高骨胶原多肽得率,提升水产品的附加值,采用碱性蛋白酶和中性蛋白酶复合酶解技术,以肽得率为指标,通过单因素试验、正交设计试验优化骨胶原多肽的酶解条件。采用CCK-8法测定鲟鱼骨胶原多肽对人源结直肠癌细胞Caco-2、乳腺癌细胞MCF-7、肝癌细胞HeGp2、肺癌细胞A549及宫颈癌细胞HeLa 5株癌细胞增殖的抑制能力,并选取抑制效果明显的肺癌细胞A549为模型,进一步检测鲟鱼骨胶原多肽作用后对其caspase-1、caspase-3以及细胞膜电位的影响。结果表明:1)鲟鱼软骨胶原肽的酶解工艺条件为:加酶量1.5×10~5 IU/g,骨粉与水质量比1∶25,酶解时间5 h,酶解温度50℃,碱性蛋白酶与中性蛋白酶酶活力比1∶2。该条件下骨胶原蛋白肽得率为(72.36±2.33)%;2)抑癌活性测定结果显示,鲟鱼骨胶原多肽通过激活凋亡蛋白酶caspase-1,使细胞线粒体膜电位发生改变,膜电位降低,诱导caspase-3酶活力增加,酶活力可达149.9 IU/μg,进而促进细胞凋亡的发生,抑制细胞的增殖。鲟鱼骨胶原多肽具有抑制癌细胞增殖的能力,有潜在的开发应用前景。     

黄粉虫胰蛋白酶酶解工艺的研究

以黄粉虫为原料,以水解度(DH)和水解多肽液的还原能力为指标,研究胰蛋白酶法制备黄粉虫多肽的工艺条件。通过单因素试验,初步确定pH、温度、酶用量、固液比的正交试验水平;在单因素试验基础上设计正交试验,分析各因素对酶解反应的影响及确定酶解反应的最佳工艺条件。结果表明:pH对酶解反应的影响最大,其次是温度和酶用量,固液比对酶解反应的影响最小;酶解的最佳工艺条件为:pH为8.5,温度为46℃,酶用量为1.8%,固液比为1∶10,酶解时间为4h,DH为13.223%。     

杏鲍菇多肽的制备

以杏鲍菇为原料制备多肽,杏鲍菇蛋白质的提取采用碱提酸沉法,通过四因素三水平正交试验,筛选蛋白质的最佳提取条件;多肽的制备采用酶解法,以料液比,酶用量,水解时间为因素,采用三因素三水平正交试验,根据水解度确定最佳水解条件。结果表明:(1)杏鲍菇蛋白质等电点为3.6。(2)杏鲍菇蛋白质最佳提取条件为:提取温度50℃,pH 12,料液比1∶55,提取时间2.5h,提取率达46.21%。(3)碱性蛋白酶酶解制备多肽的最佳酶解条件为:料水比1∶25、温度45℃、pH 10.5、时间12h、用酶量1.0%,水解度达81.19%。     

鱼骨粉制备阿胶复合氨基酸螯合钙工艺研究

目的:本实验研究鱼骨粉与阿胶复合氨基酸制备复合氨基酸螯合钙的途径,旨在探索出最佳螯合路线。方法:本试验采用单因素试验及正交试验分析钙与复合氨基酸质量比、p H值、温度、时间四种因素对螯率的影响。结果:钙与复合氨基酸质量比为1∶1、p H值取7、反应温度90℃、反应时间60分钟的条件见下螯合率最高,达到76.5%,对螯合率的影响钙与氨基酸比例反应时间p H值反应温度。     

复合氨基酸钙螯合物的研究

以低值淡水鱼骨为钙的来源,运用正交试验研究了复合氨基酸与鱼骨粉中钙离子的螯合工艺。正交试验结果显示,最佳螯合条件为复合氨基酸与钙离子的质量比3∶1(mg∶mg),pH值8,反应时间70min,反应温度80℃,此时螯合率为75.23%,并用红外光谱对其进行了分析。     

紫贻贝酶解多肽体外抗肿瘤活性研究

确定了紫贻贝胰蛋白酶水解时的最佳条件,研究了紫贻贝酶解多肽的体外抗肿瘤活性。采用正交实验方法,以料液比、pH、加酶量、酶解温度和酶解时间为因素,以酶解液的氨基氮含量和肿瘤细胞增殖抑制率为指标进行L16（45）正交实验,MTT法检测酶解多肽对DU-145、PC-3、H1299和MGC80-3等肿瘤细胞的抑制活性;HE染色法观察酶解多肽对肿瘤细胞形态的影响;免疫组化法检测酶解多肽对细胞中Bcl-2表达的影响。结果表明：当料液比为1：4、pH为8.5、加酶量为1 000 U/g、温度为45℃、酶解时间为5 h时酶解多肽的水解度最大;当料液比为1：4、pH为8.0、加酶量为1 500 U/g、温度为40℃、酶解时间为2 h时酶解多肽的抗肿瘤活性最强,该肽可以下调肿瘤细胞中Bcl-2的表达。紫贻贝酶解多肽具有抗肿瘤活性,可能是通过诱导细胞凋亡来实现的。     

鱼皮胶原多肽口服液的研制

以草鱼皮为原料,用胃蛋白酶提取胶原多肽,探讨了影响鱼皮胶原多肽水解度的主要影响因素,优化了酶解工艺条件,发现鱼皮胶原多肽最佳酶解条件为料液比6%、酶用量30 mg/g蛋白、酶解温度40℃、pH值2.0;然后以提取的鱼皮胶原多肽为原料配制胶原多肽口服液,得出了胶原多肽口服液的最佳配方为鱼皮胶原多肽液20 mL、蜂蜜5 g、葡萄糖1 g。     

牡蛎多肽螯合锌的制备及红外光谱分析

以牡蛎酶解多肽液和硫酸锌为原料制备牡蛎多肽螯合锌,应用中心组合试验设计对螯合反应条件进行优化,并对螯合产物进行红外光谱分析和氨基酸含量分析。结果表明:优化后的螯合参数为70.5℃、pH6.94、牡蛎酶解多肽液中氨基酸态氮与锌离子质量比为2.56:1、反应时间为20 min,在此该条件下,锌螯合率为88.25%。液相色谱分析结果表明牡蛎多肽螯合锌中必需氨基酸的百分比含量均基本符合WHO/FAO标准模式谱规定的百分比,红外光谱分析结果则表明螯合产物在2924 cm~(-1)附近有宽吸收峰,说明生成了一种新型的牡蛎多肽锌螯合物,该结果为牡蛎多肽复合产品的生产和开发提供基础性研究数据。     

虾粉制备复合氨基酸螯合钙工艺研究

本文研究了复合氨基酸与虾粉钙离子螯合条件,采用单因素试验及正交试验,结果显示,虾粉制备复合氨基酸螯合钙的最佳条件是:pH=7,复合氨基酸与钙质量比为1:1,螯合时间为50min,温度为70℃,产品螯合率为88.84%。     

复合酶法制备马铃薯微孔淀粉的工艺研究

[目的]研究糖化酶与α-淀粉酶制备马铃薯微孔淀粉的工艺。[方法]以马铃薯淀粉为原料,淀粉水解率和油脂吸附率为评价指标,考察反应温度、酶配比[糖化酶∶α-淀粉酶(W/W)]、加酶量、底物量浓度[淀粉∶溶液(W/V)]、缓冲液pH和反应时间6个因素对马铃薯淀粉微孔化的影响。[结果]马铃薯微孔淀粉的最佳制备工艺条件为反应温度45℃,酶配比6∶1,加酶量1.0%,底物量浓度0.14g/ml,缓冲液pH 4,反应时间8 h;在该条件下制得的微孔淀粉的油脂吸附率为70.2%,淀粉水解率为34.16%。[结论]该研究为微孔淀粉的开发和利用提供了依据。     

Study on Enzymatic Hydrolysis of Gadus morrhua Skin Collagen and Molecular Weight Distribution of Hydrolysates

Process parameters on enzymatic hydrolysis and molecular weight （MW） distribution of collagen hydrolysates from Gadus morrhua skin were investigated. The optimal process parameters were obtained by the single-factor and orthogonal experiments. The molecular weight distribution of hydrolysates was determined using both Sephadex G25 partition and high speed liquid chromatography electricity spray mass spectrum （HPLC-ESI-MS）. Collagen hydrolysates were first gained by an alkaline protease ＂alcalase＂ for 3 h at temperature （50~C）, pH （10.0）, substrate concentration （75 g L-~）, and E/S （3%）. The molecular weight distribution of collagen hydrolysates ranged from 300 to 1 500 Da, and most of peptides were under 1 200 Da. Sephadex G25 partition and HPLC-ESI-MS should be successfully employed to determine the molecular weight distribution of collagen hydrolysates.     

奶牛胎盘还原性多肽不同蛋白酶酶解方法建立与优化

为高效制备奶牛胎盘还原性多肽,试验选择自然分娩脱落健康中国荷斯坦奶牛新鲜胎盘,冰浴条件下12000 r·min-1匀浆化,分别采用木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解,以奶牛胎盘组织匀浆为底物,基于Box-Behenken中心响应法,在底物浓度10％、30％、50％,酶底比1％、3％、5％,酶解时间3、5、7 h条件下制备胎盘多肽,使用普鲁士蓝法以维生素C为标准曲线检测其还原力.分析各因素对提取率和还原力影响及二者间相关性,采用响应面回归分析具有最高提取率和还原力提取方法,并加以验证.基于结果,以每克胎盘提取多肽具有的还原能力作为综合提取率(μg·g-1)通过响应面法进一步优化酶解条件.结果表明,①木瓜蛋白酶和胃蛋白酶分别在反应时间为6.18、6.22 h,底物浓度34.78％、30.71％,酶底比5.00％、3.18％时理论提取率最高,分别为6.97％和6.14％.在反应时间为3.95、4.83 h,底物浓度22.04％、35.82％,酶底比3.64％、3.57％时理论VitC当量最高,分别为70.54和58.59μg·mg-1.两种酶制备的奶牛胎盘多肽提取率与还原力均无显著相关性(P>0.05);②经综合提取率优化,最佳反应条件分别为反应时间4.70、5.49 h,底物浓度34.03％、35.74％,酶底比3.66％、3.92％,此时理论综合提取率分别为4414.09、3490.41μg·g-1.综上所述,奶牛胎盘组织蛋白可被木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解为还原性多肽;木瓜蛋白酶酶解效果优于胃蛋白酶;最佳反应条件分别为反应时间4.70、5.49 h,底物浓度34.03％、35.74％,酶底比3.66％、3.92％.     

不同湿度环境下蜂王浆酶解产物的吸湿保湿性能

为了研究蜂王浆酶解产物在不同湿度环境下的吸湿保湿性能,利用碱性蛋白酶对蜂王浆进行酶解,以蜂王浆冻干粉和骨胶原为对照,对蜂王浆酶解产物在25℃,相对湿度分别为20%、50%和65%条件下酶解产物的吸湿和保湿性能进行测定。结果表明:在本实验湿度环境范围内,在底物质量分数为8%、酶与底物含量比1%、酶解温度45℃、酶解时间3h、pH值9.5的酶解条件下,酶解产物的吸湿和保湿性能均高于蜂王浆冻干粉,且明显优于骨胶原。说明蜂王浆通过碱性蛋白酶酶解的产物具有良好的保湿和吸湿性能,在吸湿保湿化妆品开发方面具有广阔的开发前景。     

碱性蛋白酶降解骨胶原制备食品明胶工艺

[目的]研究碱性蛋白酶降解骨胶原的工艺条件,探索其应用于骨料制备明胶的可行性。[方法]采用碱性蛋白酶降解骨胶原制备食品明胶,通过正交试验L(934)得出酶解制备食品明胶的最佳工艺参数。[结果]结果表明:最佳工艺参数为20万U/g碱性蛋白酶用量为干骨质量的0.005%,酶解温度60℃,酶解pH值为8,酶解时间5h,升温灭酶,提胶一次2h;获得食品明胶指标值分别为:得胶率20.0%,黏度3.1mPa·s,冻力193Bloomg。[结论]该研究为获得品质和产量俱佳的食品明胶提供了试验依据。     

鲤鱼肌肉中胶原蛋白酶的分离纯化与性质分析

利用明胶酶谱法,在鲤鱼肌肉中检测到了一种具有分解胶原蛋白能力的丝氨酸蛋白酶.通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel和Phenyl-Sepharose等一系列柱层析法,纯化得到了分子质量为70 ku,能够降解胶原蛋白的丝氨酸蛋白酶（Collagenolytic Serine Proteinase,CSP）.性质分析表明,CSP在弱碱性条件下显示活性,最适温度为30℃;丝氨酸蛋白酶抑制剂特异抑制CSP的活性.CSP能有效地分解鲤鱼肌肉中的I型胶原蛋白,提示其可能在鱼体死后肌肉胶原蛋白降解中发挥着重要的作用.     

球形交联壳聚糖固定化果胶酶的制备及特性研究

研究了球形交联壳聚糖固定化果胶酶的制备及其特性。结果表明:壳聚糖溶液浓度为2.0%,凝结液组成为15%NaOH∶75%乙醇=4∶1(体积比),以5.0%戊二醛交联6 h,可制得交联壳聚糖球载体;1 g载体固定10 mg的果胶酶,载体先与酶液缓慢振荡混合40 min后,在固定化体系(pH 3.4,4℃)中固定反应12 h,该条件下制得的固定化酶强度大,酶活力回收率高达91.45%;固定化果胶酶的最适温度45℃,最适pH 3.4,Kmapp值9.97 mg/mL;固定化酶的酸碱稳定性与温度稳定性均得到提高,连续使用7次后固定化酶活力还剩余53.74%。     

凹凸棒土—壳聚糖耦合固定化乳糖酶及其在低乳糖乳制备中的应用

采用凹凸棒土吸附与壳聚糖溶液包埋耦合的方法进行乳糖酶的固定化.结果表明,当凹凸棒土∶壳聚糖为5∶1、吸附时间为4 h、加酶量为260 U.g-1时,固定化酶活力达107.6 U.g-1、酶回收率为50.6%;所制得固定化乳糖酶的适宜温度和pH值分别为40~45℃及6.4~6.8;用固定化乳糖酶水解牛奶中的乳糖,在温度为45℃时间为1.5 h时乳糖水解率即达69.5%,38℃、3 h水解率为71.3%.     

胶原多肽螯合钙壮骨作用研究

本试验在小鼠基础日粮中添加胶原多肽螯合钙、葡萄糖酸钙和碳酸钙等补钙制剂,通过对比小鼠股骨骨质变化以及小鼠血钙和血磷含量的变化,研究胶原多肽螯合钙制剂对生长期小鼠的壮骨作用,结果表明,胶原多肽螯合钙在股骨长度、重量、骨钙、骨磷以及有机质含量方面均显著高于其他补钙制剂。     

紫蛇尾胶原蛋白提取工艺的研究

以紫蛇尾Ophiopholis mirabilis为原料检测其基本成分,并用盐酸对紫蛇尾进行脱钙处理,通过L9(34)正交试验对其胶原蛋白的提取工艺进行了优化。结果表明:紫蛇尾含水分51.80%,灰分42.91%,蛋白质1.68%,脂肪0.29%,总糖0.03%;酶促溶性胶原蛋白(PSC)提取工艺的优化条件为脱钙后的紫蛇尾干粉(g)与提取液(mL)的固液比为1∶15,胃蛋白酶加酶量3%,17℃下提取4 d,PSC得率为52.65%。对纯化后的酸促溶性胶原蛋白(ASC)和PSC进行紫外扫描分析,结果显示,ASC、PSC的最大吸收波长均在235 nm左右。对PSC的氨基酸组成分析表明,脯氨酸和羟脯氨酸的含量分别为10.1%和2.13%,是较典型的Ⅰ型胶原蛋白。