淡紫拟青霉NH-PL-03菌株的培养特性

跟踪检测了淡紫拟青霉NH PL 03菌株液体培养过程中D(620nm)值、pH值、菌丝干重、产孢量以及基质消耗 (碳、氮)等培养参数,对培养因子进行了相关分析和主成分分析,并对该菌株的培养阶段进行了聚类分析.结果表明:菌丝干重、产孢量、D(620nm)值分别与营养生长、生殖生长、生理特性主成分;基质消耗 (C、N)与产物生成呈显著相关;当λ=2. 582时,可将淡紫拟青霉菌株NH PL 03培养过程分为 4个阶段,第 1阶段为适应期,培养时间为 1 -2d,菌的培养参数变化不大;第 2阶段为生长期,培养时间为 3-5d,菌体开始生长,D(620nm)值上升,pH值下降,菌丝和产孢量增加;第 3阶段为对数期,培养时间为 6-7d,D(620nm)值、pH值上升,菌丝和产孢量急剧增加; 8d后进入稳定期 (第 4阶段 ),D(620nm)值、pH值趋于稳定,菌丝干重和产孢量达到峰值并趋于稳定.     

光照处理对冬虫夏草单孢菌株生长代谢的影响

为了探究光照处理对中国被毛孢生长代谢的影响,通过分离单子囊孢子获得单孢菌株,并对该菌株进行光照处理。观察记录光照处理30 d后菌落和菌丝形态的变化,测量菌落鲜质量、干质量以及分生孢子量,通过比色法检测甘露醇、多糖、尿素和多酚4种代谢物含量的变化,并通过UPLC检测腺苷含量的变化。结果表明,光照处理后中国被毛孢菌落形态发生显著变化;菌落鲜质量显著低于黑暗处理组,干质量无明显差异;菌丝的延伸被抑制并出现扭结现象;分生孢子数量显著高于黑暗处理组;多糖和尿素含量均显著低于黑暗处理组;甘露醇和多酚含量无显著变化;腺苷含量显著高于黑暗处理组。     

不同培养条件对球孢链霉菌JK-1生长及其产生抗菌物质的影响

[目的]研究不同培养条件对球孢链霉菌JK-1生长及其产生抗菌物质的影响,明确该菌生长及其产生抗菌物质的最适培养条件.[方法]在不同培养条件下分别测量球孢链霉菌JK-1的菌体干重,并以稻瘟菌为指示菌,采用菌丝生长速率法测定不同培养条件下JK-1发酵液的抑菌活性.[结果]在供试的7种培养基中,LB培养基最有利于菌体生长,PSB培养基最有利于产生抗菌物质.JK-1在10~35℃范围内均可以生长并产生抗菌物质,25℃为菌体生长和产生抗菌物质的最适温度.JK-1在PSB中培养5d菌体干重可达最大值,培养7d抑菌活性可达到最大值.适宜于JK-1生长及其产生抗菌物质的pH值范围为6~8,最适为pH 7.JK-1能够有效利用多种碳源和氮源进行生长和产生抗菌物质,其中分别以甘油为碳源和酪氨酸为氮源时生长最好;以麦芽糖为碳源和硫酸铵为氮源时发酵液的抑菌活性最强.[结论]球孢链霉菌JK-1生长和产生抗菌物质的最佳培养条件为pH 7的PSB培养基,25℃条件下培养7d,甘油和酪氨酸最适于该菌的菌体生长,麦芽糖和硫酸铵最适于产生抗菌物质.     

长座虫草子实体的人工诱导研究

首次应用长座虫草的无性型—长座被毛孢对长座虫草子实体的生长条件进行了研究,并确立了最佳的培养工艺。结果表明,长座被毛孢液体摇瓶最佳培养时间为9 d,在营养液中添加10%的动物性蛋白(黄粉虫粉)有助于提高子实体产量,其所需营养液最佳pH为6.0,培养温度为25℃,初期菌丝培养时间为完全黑暗培养,待菌丝长满后给予1～200 lx连续光照,可获得更多的子实体。     

尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum Schl.）的生长特性

【研究目的】研究尖孢镰刀菌的生长特性,寻找培养过程的异质性指标。【方法】供试菌株为黄瓜尖孢镰刀菌F-H.6.5-030318-J2和花生尖孢镰刀菌F-P.5.0-030710,培养基采用PSA培养基,装液量为100ml/250ml,接菌量从培养7d的平板上打取3个6mm的菌片,培养温度为25±1℃,摇床转速为110r/min,培养10d,观察测定发酵液颜色、OD值、pH值、菌丝干重变化,并利用聚类分析方法划分生长阶段。【结果】在培养过程中,尖孢镰刀菌发酵液的颜色、OD值、pH值和菌丝干重都会随着培养时间而变化。在相同的培养条件下,来源于不同寄主的尖孢镰刀菌菌株之间在颜色和OD值变化存在着显著性差异,而pH值和菌丝干重变化未表现出显著性差异。来自黄瓜和花生的尖孢镰刀菌菌株的生长分为3个阶段:1￣2d为适应阶段,3￣5d为对数生长阶段,6￣10d为稳定阶段。【结论】尖孢镰刀菌在培养过程的色素变异和OD值的变化可作为菌株培养的表征性特征。     

中华被毛孢的液体培养条件优化

[目的]优化中华被毛孢的液体培养条件。[方法]通过18srDNA及系统进化树对中华被毛孢进行鉴定分析,然后以中华被毛孢菌丝体生物量为指标,采用单因素试验和正交试验研究菌丝体液深层发酵的培养条件。[结果]单因素试验表明,最佳的氮源为蛋白胨,其次为牛肉膏;最佳碳源为葡萄糖,其次为蔗糖和麦芽糖。正交设计试验表明,菌株的液体发酵的最佳配方:浓度1%葡萄糖+浓度0.5%蛋白胨+浓度0.1%酵母粉+浓度0.01%维生素B1+浓度0.05%KH2PO4+浓度0.05%MgSO4;在该浓度培养下,菌丝体生物量可达到20.8 g/L。[结论]该方法优化了中华被毛孢的液体培养条件,为中华被毛孢的的开发利用提供依据。     

冬虫夏草子囊孢子及其无性型在培养过程中的形态学观察

在显微镜下挑取冬虫夏草弹射的单子囊孢子接种于平板上,18℃培养,在显微镜下观察其生长过程,发现单子囊孢子产生芽管后,直接进行微循环产孢,产生被粘液包裹的球状分生孢子团,经过缓慢生长形成菌落后,开始无性繁殖产生大量分生孢子。取其分生孢子接种到液体培养基中,在18℃下振荡培养,观察其生长过程。分生孢子液态培养主要经过:(Ⅰ)分生孢子萌发进行微循环产孢;(Ⅱ)孢子萌发产生菌丝;(Ⅲ)菌丝产生芽生孢子;(Ⅳ)芽生孢子生长形成新的芽孢。结果表明,分离得到的冬虫夏草的无性型是中国被毛孢,且分生孢子在液体培养中也存在微循环产孢的现象。     

富硒灵芝菌株的选育及发酵性能研究

[目的]选育富硒灵芝高产菌株并研究其液体发酵性能。[方法]应用添加Na2SeO3的培养基筛选富硒能力较强、菌体生物量及菌体多糖产量均较高的菌株,并研究其发酵性能。[结果]筛选到菌株Ganoderma lucidumZ-4-25,在液体培养基中添加浓度0.08%的Na2SeO3即能有效促进菌体生长,在浓度0.16%的Na2SeO3液体培养基中培养192 h,灵芝菌粉有机硒含量达到13 000μg/g菌体。在添加浓度0.08%的Na2SeO3条件下,10 L发酵罐发酵216 h,菌体生物量干重达到26.82 g/L,灵芝菌粉有机硒含量达到9 800μg/g菌体。[结论]该研究为富硒灵芝的液体发酵生产奠定了基础。     

冬虫夏草无性型菌丝体的原生质体制备条件研究

以冬虫夏草无性型中国被毛孢为原材料,通过液体培养获得菌丝体,经酶解处理后在不同条件下获得原生质体,以研究酶的种类及浓度、渗透压稳定剂及浓度、酶液pH值以及酶解时间等不同因素对中国被毛孢原生质体制备的影响。结果显示,中国被毛孢菌株原生质体的最佳制备条件为:使用浓度配比分别为4和3 mg·mL-1的Yatalase和Glucanex酶,在1.0 mol·L-1KCl作为渗透压稳定剂,酶液pH值为6,酶解3 h,所得原生质体量最多。     

顶孢霉菌(Acremonium hansfordii)液体培养最适条件及杀蚜毒力的研究

对自然感病的桃蚜幼虫上获得的顶孢霉菌株(Acremonium hansfordii)的最适培养条件及对甘蓝蚜的致病力进行了研究.结果表明,顶孢霉菌生长和产孢的最佳碳源为木糖,菌丝生物量和产孢量分别为1.806 mg/mL和7.061×106个孢子/mL;最佳氮源为尿素,其菌丝体含量和产孢量分别为0.242 mg/mL和54.07×106个孢子/mL;最适于顶孢霉菌菌丝生长和产孢的C/N为10∶1.液体培养至6-7 d时,菌丝生物量和产孢量均达到高峰,因此液体发酵终止时间应选择在接种后6-7 d.在接种后的第6 d,顶孢霉菌对甘蓝蚜的LC50为1.650×106个孢子/mL.     

不同氮源对中国被毛孢生长的影响

为了探讨不同类型的氮源对中国被毛孢生长的影响,摸索优化中国被毛孢人工培养的培养基配方,本研究将8种不同类型的有机氮源添加到基础培养基中,考察了不同的有机氮源对中华被毛孢的生长速度和总生物量的影响。结果表明,添加黄粉虫蛹粉作为氮源无论是在菌落大小还是总生物量上都具有明显优势。效果较好的前3种氮源依次是：黄粉虫蛹粉>牛肉蛋白胨>黄粉虫粉。而大豆蛋白胨效果最差,仅优于对照组（不添加任何氮源）。由此可以推断：中华被毛孢在生长过程中会优先利用和天然寄主蛋白类型更为接近的动物性有机氮源。     

顶孢霉(Acremonium hansfordii)Ahy1菌株加工工艺的研究

通过对顶孢霉Ahy1菌株加工工艺的初步研究,筛选出了一级固体培养最适培养基为麦麸培养基,最佳培养时间为6 d;二级液体振荡培养的最适接种液为马铃薯-糖培养液,以120 r/min振荡培养(25±1)℃,3 d;通过13种培养介质培养顶孢霉菌的含孢量和活孢率检测,筛选出了三级产孢培养介质为低值陈米,初步获得孢子粉,孢子含量为5.8×1010孢子/g,含水量6%,活孢率93.5%.     

铁皮石斛原球茎固体培养和液体悬浮培养动力学研究

为筛选适合铁皮石斛原球茎的最佳培养方式，采用固体培养和液体悬浮培养两种培养方式，并研究液体悬浮培养的营养消耗变化规律，同时考察了液体培养液中pH值和电导率的变化。结果表明：原球茎在固体培养条件下，培养60d后干重达到最大，为13．40g／L，多糖产量最大值为2412．5mg／L；在液体悬浮培养条件下，干重仅需要50d可达到17．64g／L，多糖产量最大值为3081．2mg／L。液体培养在生物量、多糖产量上均优于固体培养；原球茎生长与碳源、氮源和磷的消耗存在着密切关系，培养基电导率变化与原球茎的生物量积累呈线性关系。     

毛酸浆果醇提物抑菌机理的初步研究

通过观察大肠埃希菌标准菌株、金黄色葡萄球菌标准菌株生长曲线和菌体超微结构的变化,探讨毛酸浆果醇提物的可能抑菌机理。以金黄色葡萄球菌标准菌株和大肠杆菌标准菌株作为指示菌,在分别绘制细菌生长曲线的基础上,于不同时间点蜕察加药后细菌生长曲线的变化,并以透射电镜观察细菌菌体超微结构的改变。在毛酸浆果醇提物最低抑菌浓度作用下,大肠埃希菌标准菌株生长曲线的各时间点菌体浓度OD值始终保持在0．5以下。透射电镜下可见：大肠埃希菌标准菌株生长0h时,细菌出现明显的分裂相;4h后,大肠埃希菌菌体内部出现许多空泡,分裂相明显减少;8h后,出现较多死亡菌体。毛酸浆果醇提物能有效地抑制大肠埃希菌的生长,使大肠埃希菌的菌体结构出现质壁分离、空泡样变和死亡现象。     

双孢蘑菇W192液体菌种摇瓶培养过程中的生理生化分析

【目的】研究双孢蘑菇W192液体菌种摇瓶培养菌丝体生长规律,为液体种子活力判断提供参考。【方法】采用液体摇瓶培养,分别测定了液体培养过程中双孢蘑菇菌丝体生物量、菌丝球数量和直径、发酵液pH值、还原糖和氨基氮含量、羧甲基纤维素酶、淀粉酶、酸性蛋白酶、漆酶胞外酶活性生理生化指标。【结果】摇瓶培养第8 d时,双孢蘑菇菌丝体生物量最大,为9.7 mg·mL~(-1);菌丝球数量最多,为880个·mL~(-1);菌丝体平均直径最大,为0.809 mm;培养液中还原糖、氨基氮含量最高,分别为5.228、0.079 mg·mL~(-1);羧甲基纤维素酶、淀粉酶、漆酶酶活性最高,分别为0.69、2.11、15.02 U。摇瓶培养第10 d时,酸性蛋白酶活性最高,酶活性为2.93 U。将摇瓶培养8 d的液体种子转接液体培养基中进行模拟发酵罐液体菌种培养,获得的菌丝球数量最多,达115个·mL~(-1),菌丝体生物量最大,达7.56 mg·mL~(-1)。【结论】双孢蘑菇液体菌种活性与上述指标具有一定的相关性,结合液体种子活力验证,判断第8 d的液体菌种活力最高,可作为液体种子用于发酵罐扩繁培养。     

不同营养物质对莱氏野村菌Nr16生长的影响

为探索适宜莱氏野村菌生长的营养条件,研究了12种碳源、6种氮源、5种金属离子、7种维生素及不同碳氮比对莱氏野村菌Nr16菌落生长速度、菌落直径、菌丝干重及产孢量的影响。结果表明:莱氏野村菌Nr16液体、固体培养对各营养物质的需求并不是完全一致的,不同营养物质对该菌的菌落生长、菌丝干重及产孢量有明显影响。莱氏野村菌Nr16菌落生长的最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为酵母膏,最优碳氮比为20∶1,Zn2+对菌落的生长有利,维生素对菌落的生长无显著影响;液体菌丝生长的最佳碳源为葡萄糖,氮源为酵母膏,碳氮比为10∶1,金属离子对其无显著影响,维生素中VC对其生长有明显促进作用,而VB1与VB2对液体菌丝的生长有明显的抑制作用;明显促进该菌产孢的最佳碳源为葡萄糖,氮源为酵母膏,碳氮比为20∶1,金属离子对产孢无显著影响,其中,Cu2+对产孢有一定的抑制作用,维生素对产孢亦无显著影响,叶酸对该菌的产孢有显著抑制作用。     

姬松茸液体发酵培养条件的研究

[目的]研究姬松茸的液体发酵培养条件.[方法]通过摇瓶培养对影响姬松茸菌球液体发酵的4个因素（转速、温度、接种量、pH）进行单因素试验,并通过正交试验确定最佳的液体发酵培养条件.[结果]当培养温度为25℃、转速为150 r/min、pH为7.0、接种量为6％时,菌体含量最大,此时菌体干重可达到13.2 g/L.当培养温度为25℃、转速为150 r/min、pH为6.5、接种量为8％时,胞外多糖含量最大,达到6.95 mg/ml.[结论]该方法优选了姬松茸的液体发酵培养条件,为姬松茸的进一步放大培养提供了理论依据.     

枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的共培养及其对生物活性物质产生的影响

研究了枯草芽孢杆菌Bs5 5和Bs90菌株分别与苏云金芽孢杆菌Bt1和Bt2菌株在共培养条件下的菌体生长、抗菌活性物质脂肽类化合物和杀虫活性物质伴孢晶体蛋白的产生状况。结果表明 ,Bs5 5与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs5 5相似 ,未检测到伴孢晶体蛋白 ,但有Bt特异性蛋白存在 ;Bs90与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs90有相对较大的差别 ,检测到伴孢晶体蛋白。说明Bs与Bt可以共生 ,组合适当时可以产生各自的生物活性物质     

红豆杉内生真菌产紫杉醇的发酵条件优化研究

采用高效液相色谱法(HPLC)检测方法,对内生真菌Metarhizium anisopliae LB-10发酵产紫杉醇的工艺条件进行了研究。在单因素试验的基础上,进一步采用L9(34)正交试验,优化了发酵过程中的最佳组合:A2B2C3,即温度27℃,p H值7. 0,接种量5%,其紫杉醇平均含量达到949. 6μg/L。同时,制作了菌体生长曲线和代谢产紫杉醇含量变化曲线,选取发酵时间为14 d并在第10 d处于对数生长末期加入调节物质为最优条件。     

不同液体培养基对淡紫拟青霉菌繁殖和毒力的影响

采用11种液体培养基对淡紫拟青霉菌进行培养,通过对培养液中孢子浓度和菌体含量、上清液对根结线虫的毒力、上清液中蛋白酶活性的测定,筛选到一种高产孢量的培养基,其主要成分为200 g/L马铃薯 1%鸡蛋黄 20 g/L蔗糖,在该培养基中淡紫拟青霉菌在接种培养后6 d孢子浓度达到1 ml 7.017×109个。对孢子浓度和菌体含量之间、上清液毒力和上清液中蛋白酶活性之间的相关关系分析结果表明,孢子浓度和菌体质量之间的相关性较高,上清液毒力与蛋白酶活力之间的相关性较低。