SSR法鉴定水稻两系杂交种纯度的运用与探讨Ⅴ.不同引物检测同一品种纯度的准确性

试验将同一样品用不同引物检测纯度,发现不同引物检出的纯度结果不同。用SSR法检出的纯度结果不同引物之间的误差随着样品田间纯度的增高而呈现出降低的趋势。当品种不同时,室内检测结果有可能高于或低于田间鉴定结果。因此难以找到普遍适用的室内与室外检测的系统误差校正方法。     

田间小区种植鉴定农作物种子纯度的方法

1田间小区种植鉴定的必要性 该法主要是幼苗至成熟期间,根据不同品种植株形态特征和生育特性的差异,鉴别出异型植株的方法.田间小区植株鉴定是最为可靠、正确的种子真实性和品种纯度鉴定的方法.适用于国际贸易、省(区)间调种的仲裁检验,并作为赔偿损失的依据.在此种情况下,田间小区鉴定就显得十分必要了,因为田间小区鉴定时,植株形态特征和生育特性比其他方法有更多的特征特性可鉴别,有比较正确可靠的鉴定.这对异花授粉作物纯度鉴定尤为重要.     

田间小区种植鉴定农作物种子纯度的方法

1田间小区种植鉴定的必要性该法主要是幼苗至成熟期间,根据不同品种植株形态特征和生育特性的差异,鉴别出异型植株的方法。田间小区植株鉴定是最为可靠、正确的种子真实性和品种纯度鉴定的方法。适用于国际贸易、省(区)间调种的仲裁检验,并作为赔偿损失的依据。在此种情况下,田     

茎瘤芥(榨菜)杂交种涪杂2号种子纯度SSR鉴定

[目的]利用SSR分子标记技术对茎瘤芥涪杂2号种子纯度进行检测,为茎瘤芥及其他杂交种纯度鉴定提供参考,也为加快涪杂2号的推广应用打下基础.[方法]以茎瘤芥杂交种涪杂2号、父母本及易混杂植株为试验材料,应用SSR分子标记技术结合改良CTAB法快速提取DNA,进行特异引物筛选及验证,对涪杂2号种子纯度进行快速检测,并对检测结果进行田间表型鉴定.[结果]从80对SSR特异引物中筛选出6对特异性强的引物,其中引物Na14-G06能清晰地扩增出父、母本的特异性条带,并且双亲互补,该引物同时可将杂交种中的异源花粉植株分离出,其余5对引物可将机械混杂植株区分开;两对引物联用Na 14-G06+O11 1-H02、Na 14-G06+Na 14-G 10或Na14-G06+O112-D09能较好区分假杂株.利用所筛选引物对涪杂2号杂交种群体进行SSR检测,检测结果显示种子纯度为95.8%,与田间生物学表现性状检测结果(96.7%)基本一致.[结论]两对引物联用可用于涪杂2号杂交一代种子纯度的快速检测和准确鉴定,SSR分子标记技术应用于茎瘤芥杂交种子纯度检测具有可行性.     

利用InDel标记对青梗菜新品种15039进行纯度鉴定

本研究以青梗菜15039及其亲本为试验材料,通过对亲本进行全基因组重测序,分析设计出12对InDel标记。从12对引物中筛选出1对可用于青梗菜15039进行快速纯度鉴定的InDel标记jpk-7。使用这对引物对304株青梗菜纯度进行检测,有302株青梗菜检测结果与田间表型纯度相一致,比例为99.34%,因此,引物jpk-7可以应用于青梗菜15039植株纯度检测。     

DNA提取方法对转基因甘蔗PCR检测的影响

研究了不同提取方法和不同生长时期甘蔗提取的DNA对转基因甘蔗植株PCR检测的影响。结果表明,幼苗时期提取的甘蔗叶片模板DNA质量高于田间成熟植株;甘蔗幼苗时期的PCR检测易于成熟植株;CTAB法、SDS法和CTAB-SDS法提取的甘蔗叶片DNA均能满足幼苗期甘蔗抗性植株的PCR检测要求;对成熟转基因甘蔗植株而言,以CT...     

植物生长调节剂对魔芋软腐病影响的研究

抗生素与不同浓度的不同植物生长调节剂对魔芋种芋进行浸种处理,对魔芋产量和软腐病的田间发病率有一定影响。研究结果表明:不同的植物生长调节剂对魔芋软腐病的影响不同,同一种调节剂的使用浓度不同,其影响也不相同,当NAA的浓度在40mg/kg和6-BA的浓度在100mg/kg时可提高对植株的抗性,降低软腐病的田间发病率,同时提高魔芋产量。当NAA的浓度高于或低于40mg/kg、6-BA的浓度高于或低于100mg/kg时,对增加植株抗性无明显作用,还可能反而提高了软腐病的田间发病率。     

卡那霉素叶片涂抹法田间筛选转基因苜蓿的研究

以田间生长的苜蓿为材料进行卡那霉素(Kan)涂抹叶片筛选转基因植株最佳浓度和适宜观察时间的研究,并对筛选的抗性植株进行了PCR检测验证.结果表明,Kan叶片涂抹田间筛选的最佳浓度为1000 mg/L,观察时间以12天为宜;经PCR检测验证,Kan筛选抗性苗的阳性检测率达到93.8%.研究建立了一种在田间对转基因苜蓿进行大量筛选的简便方法,对于转基因苜蓿材料的选育具有重要利用价值.     

玉米Bt转基因植株抗虫性鉴定研究初报

经室内喂虫和田间接种,鉴定了Ｍｏ１７,４７８等４个常用自交及其与９１－１－８杂交的抗虫转基因杂种Ｆ１的抗虫性。结果表明,不同转基因材料之间以及同一转基因材料的不同单株间抗虫性差异很大,有少量植株表现高度抗性,个别植株几乎没有抗性。     

应用RT-PCR检测歇马杏李属坏死环斑病毒

利用作者已建立的PNRSV RT-PCR检测体系对辽宁省大连市地方特产歇马杏田间植株携带PNRSV的情况进行了调查,结果表明被检植株PNRSV的感染率达83.33%,但带毒程度不同。     

胭脂萝卜种子纯度的RAPD检测研究

用80个随机引物对胭脂萝卜及杂株(花心萝卜和白心萝卜)的总DNA进行了RAPD分析,发现引物S 50可在胭脂萝卜和杂株(花心萝卜和白心萝卜)的RAPD图谱中形成多态性差异,可用于胭脂萝卜种子的纯度检测.对1份胭脂萝卜种子进行RAPD检测,其结果与田间形态鉴定结果一致.     

甘蓝类蔬菜小孢子再生植株染色体倍性与气孔保卫细胞叶绿体数的相关性

 【目的】研究甘蓝类蔬菜游离小孢子再生植株的染色体倍性与气孔保卫细胞叶绿体数的相关性,为甘蓝类蔬菜提供一种快速、简易、经济、实用而又可靠的倍性鉴定方法。【方法】采用分布型分析和t测验,对结球甘蓝、青花菜和芥蓝不同倍性的小孢子再生植株的气孔保卫细胞叶绿体数进行统计分析。以根尖染色体计数法和田间形态学观察法的倍性鉴定结果,对叶绿体数分界法的可靠性进行验证。【结果】同一倍性植株上的不同叶片间及同一叶片的不同部位间,气孔保卫细胞叶绿体数平均值及变异幅度非常接近。同一小孢子再生植株群体内的不同倍性植株的叶绿体数平均值差异极显著。不同倍性植株间的气孔保卫细胞叶绿体数均呈正态分布。本研究提出了一种根据甘蓝类蔬菜气孔保卫细胞叶绿体数进行染色体倍性鉴定的方法,即气孔保卫细胞叶绿体数≤10的为单倍体,10＜叶绿体数≤15的为二倍体,＞15的为多倍体。该方法经花期形态学观察和根尖染色体计数法验证,其吻合率达93.93%,且此倍性鉴定方法稳定,不受植株生长环境等外界因素影响。【结论】甘蓝类蔬菜游离小孢子再生植株的染色体倍性,可于幼苗期根据气孔叶绿体数目的多少进行鉴定,而且此倍性鉴定方法简单、快捷、经济而又可靠。     

胭脂萝卜种子纯度的RAPD检测研究

用80个随机引物对胭脂萝卜及杂株（花心萝卜和白心萝卜）的总DNA进行了RAPD分析,发现引物S50可在胭脂萝卜和杂株（花心萝卜和白心萝卜）的RAPD图谱中形成多态性差异,可用于胭脂萝卜种子的纯度检测。对1份胭脂萝卜种子进行RAPD检测,其结果与田间形态鉴定结果一致。     

玉米种室内纯度检验结果与田间种植鉴定相关性研究

以38份玉米杂交种为试验材料,利用改进的蛋白质电泳技术进行纯度鉴定,同时将这些品种田间种植,对两种鉴定方法的检验结果进行相关性分析,结果表明:室内蛋白质电泳检测结果与田间种植鉴定结果呈显著相关,电泳技术可以作为品种纯度鉴定的可靠方法。     

醇溶蛋白电泳与田间种植鉴定油菜杂交种纯度的相关性研究

纯度检测是油菜杂交种种子质量控制的最重要环节之一。采用醇溶蛋白电泳与田间种植法对48份油菜杂交种样品进行纯度检测,并对2种方法所得数据进行了回归分析。结果表明:2种纯度鉴定方法所得结果相关性达极显著水平,相关系数r=0.927**,线性回归方程为:y=16.211+0.842x,表明利用醇溶蛋白电泳技术鉴定油菜杂交种纯度是可靠的。该研究在生产中可用醇溶蛋白电泳纯度推算出田间纯度。     

转Bt基因玉米回交二代的抗虫性鉴定

对112-1,8085,综3,N808等4个BC2Bt基因材料进行田间抗虫性接卵鉴定和PCR分子检测。同等条件下,在BC2群体内;田间抗虫性接卵鉴定结果表明:不同遗传背景的转基因材料,抗性表现不同,不同植株之间抗性各异。MPCR检测结果表明,扩增产物的条带在100bp附近,与引物设计的片段大小吻合,说明转基因后代中外源Bt的存在。田间鉴定和室内分子鉴定基本一致,为抗虫株的选育提供了理论依据。     

兼抗虫、除草剂、干旱转基因玉米的获得和鉴定

【目的】培育抗玉米螟、抗草甘膦、抗旱的转基因复合性状玉米种质。【方法】通过农杆菌介导的玉米茎尖遗传转化法,把重组到同一植物表达载体的cry1AcM、epsps、GAT和ZmPIS转入玉米骨干自交系9801和齐319（Q319）,获得转基因植株。通过逐代除草剂筛选、分子检测和抗虫性鉴定,从大量转基因株系中优选出6个优良玉米株系。在此基础上,以非转基因自交系9801、Q319为对照,在严格控制条件下对6个转基因株系进行抗虫、抗除草剂和抗旱性检测。由于不同生长时期植株对玉米螟危害的敏感程度有差异,在抗虫性检测试验中,对不同生长阶段的转基因玉米的抗虫性,分别进行了田间和室内玉米螟接种试验,并以灌浆期玉米的籽粒和苞叶饲喂玉米螟幼虫检测其杀虫性。在草甘膦抗性鉴定试验中,对6叶期田间玉米植株喷洒大田除草用量的草甘膦溶液评估其应用价值;采用3倍应用剂量的草甘膦溶液喷施3叶期玉米植株测试其草甘膦耐受力。在抗旱性鉴定试验中,对10叶期玉米植株进行干旱胁迫处理,观测转基因植株的表型变化并测定光合作用和叶绿素荧光等参数。【结果】选择出6个遗传稳定的兼抗亚洲玉米螟、抗草甘膦和抗旱性提高的转基因玉米株系,其中株系L1-L3来自自交系9801,Q1-Q3来自自交系Q319。通过RT-PCR检测4个转基因的转录强度,证明它们在转基因植株中有效表达;利用Western blot方法检测cry1Ac蛋白的表达水平,确定其在玉米植株中稳定表达。植株抗虫性鉴定结果显示这6个株系在玉米营养生长期和灌浆期的抗虫能力均显著高于未转基因自交系。在草甘膦抗性测试中,转基因植株表现出明显高于未转基因自交系的草甘膦抗性。在干旱控水期间,转基因植株能维持较强的光合能力和光系统Ⅱ活性,对干旱胁迫的抗性显著高于对照植株。【结论】将cry1AcM、epsps、GAT、ZmPIS一同转入玉米,赋予了植株抗玉米螟、抗除草剂草甘膦特性,提高了植株的抗旱性,达到生产中应用标准。培育出具有优良复合性状的转基因玉米新材料。     

纯度对玉米群体的田间性状及产量的影响研究

研究了不同纯度条件下郑单958品种玉米群体的田间性状及产量。结果表明:纯度与群体株高呈极显著正相关,处理间差异显著;随着纯度降低,株高整齐度下降,同一冠层高度透光率增加。产量与纯度为极显著正相关关系,纯度每降低1%,产量下降0.6%～0.7%。     

杂交油菜苗期纯度鉴定对盛花期纯度的影响

杂交油菜在秧苗三叶期及移栽前根据植株形态特征进行苗期纯度测定 ,并将实测得“F1”代秧苗与“异型株”秧苗分类设区栽入大田。分别在越冬期和盛花期追踪调查种植纯度 ,测定其吻合率。同时 ,提出了在杂交油菜种植过程中 ,应把好育苗去杂关 ,掌握在苗床三叶期或直播田定苗时 ,根据不同组合的植株形态特征 ,采取去小苗、留大苗 ;移栽前采取栽大苗、去小苗的保纯观点。     

茄子SSR多态性标记筛选及杂交种纯度鉴定

[目的]建立一套快速、准确、高效的茄子杂交种纯度鉴定方法,为其制种过程中除伪存真及大面积推广应用提供技术支持.[方法]挑选已公布的48对SSR引物对2个茄子杂交种15-16和1-7的亲本进行多态性标记筛选,选取有效引物对茄子杂交种进行纯度鉴定,并结合田间植株纯度鉴定,验证SSR分子标记纯度鉴定的有效性.[结果]在48对SSR引物中,有12对引物在杂交种15-16亲本材料中存在多态性,其多态性引物带型呈互补带型的有8对(SM14、SM15、SM17、SM20、SM29、SM30、SM34和SM45);有5对引物在杂交种1-7亲本材料中存在多态性,其多态性引物带型呈互补带型的有4对(SM15、SM20、SM24和SM29).分别选取2对呈互补带型的SSR引物进行杂交种纯度鉴定,结果显示杂交种15-16和1-7的纯度分别为99%和100%,与田间种植鉴定结果一致.[结论]采用SSR分子标记检测茄子杂交种纯度具有准确、高效的特点,可为茄子杂交制种过程中真假杂种鉴定提供技术支持.