拮抗放线菌6的鉴定及发酵条件优化

为探讨拮抗菌YH6在食品工程中的应用潜力,通过形态观察及16S r DNA序列分析确定了其分类地位,采用牛津杯法测定其发酵液的抑菌活性,并采用单因素试验与正交设计方法筛选出该菌株的优化发酵配方和发酵条件。结果表明,YH6为球孢链霉菌(Streptomyces globisporus);该菌株发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌都有较强的抑制活性。培养基优化组合为:甘薯粉8.0 g/L、硫酸铵10.0 g/L、蛋白胨3.0 g/L、Na Cl 2.0 g/L、Ca CO31.0 g/L,优化发酵条件为:初始p H值8.0、发酵时间5 d、发酵温度28℃、接种量8%、装液量50 m L/250 m L、转速120 r/min。     

拮抗农业致病真菌放线菌菌株CTF619-D的分离、筛选及初步鉴定

从黄河中分离筛选出若干放线菌菌株,并对放线菌菌株进行分离纯化,采用琼脂块法进行初筛,用纸片扩散法和生长速率法对抑菌效果较好的菌株进行抑菌活性复筛,发现菌株CTF619-D的发酵产物对番茄炭疽病菌、黄瓜炭疽病菌、苹果腐烂病菌等10多种真菌均有不同程度的抑制作用,其中对番茄炭疽病菌的抑菌圈最大能达到2.8 cm。通过对CTF619-D菌株形态特征、培养特征、生理生化特征、16S rDNA序列及系统发育分析等方面的研究发现,CTF619-D菌株与淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)FSHJ9菌株的序列同源性达100%,但在形态特征、培养特征和生理生化特性方面与其存在差异,因此初步确定CTF619-D为淡紫灰链霉菌的一个新变种。     

放线菌19G-317菌株的鉴定及其抑菌活性研究

    对分离自三江源自然保护区的1株放线菌(编号:19G-317)采用平板对峙法和盆栽试验测定其抑菌活性,并通过形态学观察、培养特征、生理生化特性和分子分类方法研究其分类地位.结果表明,放线菌19G-317菌株对供试的23种植物病原真菌均有不同程度地抑制作用,其中对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、水稻纹枯病菌(Thanatephorus cucumeris)等14种供试病原菌的抑制作用较强,其抑菌带均大于10 mm;盆栽试验结果表明,其发酵液对番茄灰霉病的保护效果和治疗效果分别为47.82%和45.77%;根据形态观察、生理生化特征和 16S rDNA序列比对分析,初步鉴定该菌株为链霉菌属中黄色类群链霉菌Streptomyces sp.     

抗真菌土壤放线菌的筛选鉴定、发酵培养基优化及发酵液稳定性研究

以6种农作物病原真菌为指示菌,从湖北省神龙架地区的土壤中筛选得到1株抗真菌放线菌,命名为ⅡB21.经过形态观察、生理生化分析和16 S rDNA序列同源性分析,初步鉴定该菌株属于链霉菌属(Streptomyces).通过单因素和正交试验确定优化后的发酵培养基配方为蔗糖10.00 g/L,牛肉膏4.00 g/L,K2HPO43.00 g/L,MgSO4 0.75 g/L,KH2PO4 1.00 g/L.发酵液稳定性试验表明,发酵液在30℃下达到最大抑菌活性,抑菌圈直径为41.16 mm,在4～60℃下具有较好的热稳定性,其抑菌圈直径均为最大抑菌活性的72.10％以上;发酵液在pH 3.0～10.0具有较好的酸碱稳定性,其抑菌圈直径均在最大抑菌活性的74.95％以上;发酵液中抑菌活性物质在紫外光照射下具有较好的稳定性.     

葡萄白腐病拮抗链霉菌G4的筛选、鉴定及发酵条件的优化

从长春市葡萄园采集的9份土样中分离出放线菌菌株70株,采用平板对峙法初筛到了对葡萄白腐病菌(Coplodiella diplodiella)有较好拮抗作用的放线菌菌株7株,采用琼脂扩散法复筛出拮抗作用最好的菌株G4.对G4菌株的发酵液进行了抗菌谱测定,结果表明发酵液对番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)等其他8种植物病原真菌都有拮抗作用,对葡萄白腐病菌的拮抗作用最好,抑菌圈直径达26.5 mm.通过对菌株G4的形态特征、培养特征、生理生化反应和16S rDNA鉴定该菌株为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae).通过发酵条件优化,确定了菌株G4的最佳发酵条件:玉米粉60 g/L,葡萄糖30 g/L,大豆粉60 g/L,硝酸钾5 g/L,磷酸二氢钾1g/L,碳酸钙3g/L,氯化钠1g/L,pH为自然,种龄22 h,装瓶量40 mL/250 mL,接种量4％,发酵温度28℃,转速200 r/min,发酵时间48 h.     

五味子叶枯病菌拮抗放线菌A-25-8的鉴定及发酵条件优化

经五味子根际土中分离获得1株高效拮抗五味子叶枯病菌的放线菌A-25-8,对其进行鉴定并研究其最佳发酵条件。根据菌株的形态与培养特征、生理生化特性、16SrDNA序列分析对其进行鉴定,应用牛津杯法研究A-25-8菌株抑菌活性及最优发酵条件。A-25-8菌株与Streptomyces anulatus(环圈链霉菌)的亲缘关系接近;最佳发酵条件:发酵培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基,碳源为葡萄糖,氮源为KNO_3,发酵培养基初始pH为7.5,发酵温度为28℃,发酵时间为3 d,接种量为10%,摇床转速为160 r·min~(-1)。拮抗放线菌A-25-8鉴定为环圈链霉菌(Streptomyces anulatus),优化后A-25-8无菌发酵滤液对五味子叶枯病菌显示出更强的抑菌活性。     

放线菌不同施入方式对连作番茄幼苗生长的影响

以"金鹏一号"番茄为试验材料,研究放线菌剂A[加州链霉菌(Streptomyces californianus)、假刺孢链霉菌(Streptomyces pseudovenezuelae)、肉质链霉菌(Streptomyces carnosus)、密旋链霉菌(Streptomyces pactum)、1株未定种的链霉菌(Streptomyces sp.)、球孢链霉菌(Streptomyces globisporus)等质量混合]和放线菌剂B[肉质链霉菌(Streptomyces carnosus)、密旋链霉菌(Streptomyces pactum)等质量混合]按照灌根和拌土2种不同方式施入对连作番茄生长的影响。结果表明,2种放线菌均可促进番茄地上部、地下部和整株鲜质量的增加、根系活力的增长和叶绿素质量分数的提高,且随着生长时期的延长,菌剂效应有所降低,菌剂A采用灌根方式的促进作用最为明显。     

番茄连作土壤中放线菌剂最佳施用量的筛选

以放线菌剂A［加州链霉菌（Streptomyces californicus)：假刺孢链霉菌（Streptomyces pseudovenezuelae)∶肉质链霉菌（Streptomyces carnosus)∶密旋链霉菌（Streptomyces pactum)∶1株未定种的链霉菌（Streptomyce ssp.)∶球孢链霉菌（Streptomyces globisporus）=1∶1∶1∶1∶1∶1（质量比）混合］和“金鹏1号”番茄为试材,以连作4 a番茄的土壤为供试土壤,采用盆栽试验,设置0、0.5、1.0、1.5、2.0 g/株5个施用量进行灌根处理,通过比较不同处理下番茄植株生物量及其部分生理指标的差异筛选番茄种植的最佳放线菌剂施用量。结果表明,当放线菌剂A施用量小于1.0 g/株时,能增加番茄植株的茎粗、株高、干鲜质量比、叶绿素含量、净光合速率、叶片和根系PPO活性,产生正效应;当放线菌剂施用量大于1.5 g/株时,则会对番茄生长产生一定抑制作用。建议用于改良连作番茄土壤的放线菌剂施用量宜为1.0 g/株。     

一株拮抗番茄溃疡病菌的海洋放线菌的分类鉴定及活性测定

从大连海域采集的海泥样品中分离得到1株放线菌菌株PH33,根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,鉴定该菌株为小链霉菌(Streptomyces parvus)。采用琼脂块法和牛津杯法测定了菌株PH33对番茄溃疡病菌的拮抗能力。结果表明:抑菌活性物质在100℃水浴加热、pH 2条件下的抑菌活性均不变,pH 12条件下抑菌活性稍有下降;紫外线照射不影响其抗菌活性。说明该菌株在预防和控制番茄溃疡病的发生及危害方面有潜在的应用价值。     

放线菌株D35的分离鉴定及其抗植物病原真菌活性

从湖南壶瓶山国家自然保护区土样中分离放线菌株,经平板对峙培养初筛和发酵过滤液抑菌试验,得到一个较好的菌株D35,其发酵液经5倍稀释对稻瘟病菌、柑橘炭疽病菌和烟草黑胫病菌的菌丝生长抑制率分别为47.6%、80.3%和54.2%.经培养性状观察,生理生化测定,并结合16S rDNA序列分析,初步鉴定D35为三泽链霉菌(Streptomyces misawanensis).     

新疆荒漠盐碱环境中抗动物病原菌的放线菌筛选与鉴定

【目的】从新疆荒漠地区特殊生境中,分离筛选对动物病原菌具有较高抑制活性的放线菌。【方法】采用皿内琼脂块法和发酵液滤纸片法,对新疆荒漠盐碱土环境中分离到的412株放线菌的拮抗性进行筛选,并对其中拮抗活性高的菌株进行形态特征、培养特征、生理生化特性及16SrRNA序列的分析鉴定,初步确定其分类地位。【结果】筛选结果显示:新疆地区荒漠土中39.6%的放线菌对所选的8种病原菌有拮抗作用,且随着靶标菌数的增加,拮抗比例减小;供试菌对革兰氏阳性菌的拮抗效果优于革兰氏阴性菌,对牛无乳链球菌Ⅰ、Ⅱ和猪金黄色葡萄球菌Ⅰ、Ⅱ的抑菌效果平均为26.0%和22.3%。通过初筛和复筛得到10株抑菌效果较好的拮抗性放线菌,经多相分类鉴定确定为链霉菌属的不同种,具体分类地位如下:XJ 6-2菌株为天蓝褐链霉菌(Streptomyces coeruleofuscus),XJ 1-5-10菌株为粪生链霉菌(Streptomyces fimicarius),XJ 2-9菌株为灰平链霉菌(Streptomyces griseoplanus),XJ 2-5-1菌株为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae),XJ 19-11菌株为变异链霉菌(Streptomyces variabilis),XJ 1202菌株为苍黄链霉菌(Streptomyces luridus),XJ 1625菌株为微黄绿链霉菌(Streptomyces flavidovirens),XJ 2-9-7菌株为库尔萨诺夫链霉菌(Streptomyces kurssanovii),XJ 617菌株为堆孢链霉菌(Streptomyces massasporeus),而XJ 1-6-5菌株的序列相似度在98%以下,可能为潜在新种,需要进一步鉴定。【结论】新疆地区荒漠土中存在大量拮抗性放线菌,并且获得了10株对动物病原菌有较高抑制活性的放线菌。     

梨黑斑病菌拮抗菌的筛选及鉴定

本研究筛选到1株对梨黑斑病菌——链铬孢菌(Alternaria alternate)有较强抑制作用的放线菌菌株B186,通过形态特征、生理生化特性以及16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为金色链霉菌(Streptomyces aureus).该菌株产生的抗菌物质可有效抑制链铬孢菌菌丝生长,具有较好的防病效果,并且抑菌谱广.     

土壤中抑菌放线菌的筛选鉴定及发酵条件研究

采用弹土法从高黎贡山百花岭段土壤中共分离到放线菌38株,对分离得到的38株放线菌的发酵液进行抑菌活性测定,其中H33菌株对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和白假丝酵母都具有较好的抑菌作用,其抑菌直径都在8 mm以上。通过对H33菌株培养特征、显微特征和生理生化特征的研究,初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)。H33菌株的最佳发酵培养基为发酵培养基2(葡萄糖0.5 g、蛋白胨0.25 g、胰胨0.15 g、NaCl 0.25 g、重铬酸钾7.5 mg、复合维生素10 g、水500 mL,pH 7.2),最佳发酵时间为6 d,最适发酵培养基pH为7.0,最适培养温度28℃。     

放线菌制剂对番茄PPO活性及生物量的影响

【目的】研究2种放线菌制剂对供试番茄生物量、保护性酶活性的影响,探索生防菌剂的防病促生机理。【方法】以Act1(加州链霉菌Streptomyces californicus)、Act2(假刺孢链霉菌Streptomyces pseudovenezuelae)、Act11(肉质链霉菌Streptomyces carnosus)、Act12(密旋链霉菌Streptomyces pactum)及Act8(1株未定种的链霉菌Streptomyces sp.)5种放线菌为材料,制成菌剂BCA1(由放线菌Act1、Act11和Act12按1∶1∶1的质量比混合而成)和菌剂BCA2(由Act1、Act2和Act8按1∶1∶1的质量比混合而成)2种放线菌制剂。以不接菌为对照,分别将BCA1和BCA2进行稀释后对番茄进行蘸根处理,采用常规称质量及PPO酶活性测定法分别对番茄生物量及叶片PPO酶活性进行测定。【结果】2种放线菌制剂均使苗期番茄叶片PPO活性降低,根系PPO活性升高,随着植株生长期的延长,菌剂对PPO活性的影响逐渐减小。②接种2种放线菌制剂对番茄生长均有明显的促进作用,BCA1使番茄的总生物量、茎质量、根系质量及须根质量分别增加了44.27%,47.38%,14.58%及52.85%;BCA2使番茄的总生物量、茎质量、根系质量及须根质量分别增加了46.87%,47.89%,42.63%及93.65%。【结论】接种放线菌制剂对番茄有明显的促生作用,可促进根系生长,增加生物量,并提高根系PPO活性,进而增强番茄根系的免疫力和抗病性。     

秦岭链霉菌发酵液中二丙酮胺的分离及抑菌活性初步研究

【目的】对1株新放线菌——秦岭链霉菌中(Streptomyces qinlingnensissp.nov)的抑菌活性成分进行研究。【方法】采用离子交换和硅胶柱层析,对秦岭链霉菌发酵液中的有效成分进行分离,并采用高分辨质谱和核磁共振技术对分离到的有效成分进行结构鉴定,采用抑制菌丝生长速率法测定有效成分对8种真菌的抑菌活性,采用管碟法进行8种细菌对有效成分的药敏性试验。【结果】从秦岭链霉菌发酵液中分离出了一个抑菌活性成分,鉴定为二丙酮胺,测定其对8种真菌和8种细菌的抑菌活性,结果表明,马铃薯干腐病菌、西瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌对二丙酮胺相对比较敏感,其IC50值分别为49.57,85.08和74.69μg/mL;蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌对二丙酮胺相对敏感,当二丙酮胺质量浓度为31.3μg/mL时,其抑菌圈直径分别为13和16 mm。【结论】对二丙酮胺的抑菌活性以前未见文献报道,其有可能作为一种抑菌活性先导化合物,或直接开发成农用杀菌剂。     

人参锈腐病生防用高效拮抗放线菌分离鉴定及抑菌作用

为筛选和鉴定对人参锈腐病菌具有高效抑菌作用的拮抗放线菌,为生物防治人参锈腐病奠定基础。采用稀释涂布法和平板对峙法分离筛选高效拮抗放线菌,采用纸片法测定了菌株发酵浓缩液的抑菌活性,并采用培养特性、形态特征、生理生化特性和分子生物学方法鉴定了菌种。结果表明:采用稀释涂布法分离纯化出94株放线菌,其中20株为拮抗放线菌;通过复筛,筛选出2株高效拮抗放线菌YBUF5和YBUF7;这2株放线菌菌株及菌株发酵浓缩液对供试9种植物病原菌菌丝的生长均具有较强抑制作用; 2株放线菌菌株及菌株发酵浓缩液在温度15～25℃、pH为6时对人参锈腐病菌的抑制作用最强;根据培养特征、形态特征、生理生化特征及16S r DNA寡核苷酸序列分析结果,YBUF5菌株和YBUF7菌株初步鉴定为生暗灰链霉菌(Streptomyces caniferus)和湿链霉菌(Streptomyces humidus)。这说明筛选出的YBUF5和YBUF7菌株及发酵浓缩液不仅具有较宽的抑菌谱而且不同条件下对人参锈腐病菌均具有很强的抑制作用,在人参锈腐病生物防治方面具有较大的应用潜力。     

虎杖内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性

采集秦巴山区野生虎杖(Polygonurn cuspidatum),选取以海藻糖、葡萄糖、淀粉等为主要营养和能源的4种培养基,经分离纯化得到47株内生放线菌.经形态学鉴定并结合16S rDNA序列分析,将6株具有较强抑菌活性的菌株初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)2株,小单孢菌属(Micromonospora)2株,链孢囊菌属(Streptosporangium)2株;采用滤纸片法初步研究了内生放线菌发酵液的抑菌活性.结果表明,17株菌株具有不同程度的抗菌活性,占所有分离菌株的36.2%,其中6株具有较明显的抑菌活性,菌株PEA023对所有靶标菌均有较强的抑制作用,菌株PEA023和PEA032对铜绿假单胞菌具有拮抗活性.     

丛生盔形珊瑚共附生放线菌NLG-3的抑菌活性及鉴定

【目的】探究丛生盔形珊瑚共附生放线菌NLG-3对植物病原菌的抑菌活性,对其分类地位进行鉴定,为丛生盔形珊瑚共附生放线菌的开发利用提供依据。【方法】采用平板对峙法测定NLG-3对12种植物病原真菌的抑菌活性;采用滤纸片法测定NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物对5种病原细菌的抑菌活性;通过改变pH、温度及光照条件,测定该菌株发酵液的稳定性;采用几丁质平板培养法测定该菌株产几丁质酶的能力;通过基因扩增检测该菌株是否含有非核糖体多肽合成酶(NRPS)和聚酮合成酶(PKS)基因;结合菌株形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析对该菌株进行分类鉴定。【结果】菌株NLG-3具有广谱抑菌活性,对供试病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)和胶孢炭疽病菌(C.gloeosporioides)的抑菌率均在85%以上。NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物可以明显抑制蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的生长,1 mg/mL NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物对蜡样芽孢杆菌的抑菌圈直径达(2.20±0.11) cm。NLG-3发酵液在中性(pH=7)条件下抑菌活性突出,经40℃及以上高温处理其活性丧失,光照对其抑菌活性无影响。NLG-3能产生几丁质酶,分解培养基中的几丁质。该菌株具有合成酶基因PKS-Ⅱ和NRPS,经初步鉴定该菌株为白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)。【结论】NLG-3抑菌活性较好,具有潜在防治热带植物病害的应用价值。     

放线菌株SJY56的分离鉴定及其抗菌活性的初步研究

从青海省三江源国家自然保护区土样中分离放线菌株230个,经平板对峙培养初筛和发酵过滤液抑菌试验,得到一个较好的菌株SJY56,其发酵液经5倍稀释对金黄色葡萄球菌有显著抑制活性,抑菌圈直径为21mm.经培养观察,生理生化测定,并结合16S rDNA序列分析,初步鉴定SJY56为链霉菌(Streptomyces atroolivaceus).     

长白山地区不同海拔环境拮抗放线菌的筛选

利用稀释平板倾注法从吉林长白山地区不同海拔高度的不同环境中共分离到各种放线菌菌株104株.以24种农业常见植物致病真菌作为目标供试菌,采用抑制菌丝生长速率法对104株放线菌进行抗菌活性筛选,优选抗菌活性较佳的12株.将最佳放线菌No.6菌株进行液体发酵,并测定其发酵液滤液的抑菌活性.结果表明,No.6放线菌菌株对香蕉灰纹菌、辣椒疫霉菌、黄瓜炭疽菌、番茄灰霉菌、黄瓜黑星菌、番茄叶霉菌、番茄炭疽菌、棉花黄萎菌、黄瓜枯萎菌、小麦赤霉菌、稻曲病菌、水稻恶苗病菌、小麦纹枯病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯菌、油菜菌核菌均具有优异的防治效果,发酵滤液稀释10倍后对黄瓜黑星菌、番茄炭疽菌、稻曲病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯菌的抑制率分别达90.0%、93.3%、92.0%、93.3%、92.0%.