生防枯草芽孢杆菌CAB-1抑菌蛋白产生条件及其稳定性研究

枯草芽孢杆菌CAB-1是一株对番茄灰霉病有显著防效的生防菌株,抑菌蛋白是其产生的主要抑菌物质之一。研究表明,菌株CAB-1产生抑菌蛋白的最佳培养条件为：接种量2%,培养温度30℃,转速180 r/min,装液量100 mL/250 mL,培养时间48 h。考马斯亮蓝法测得最佳培养条件下菌株CAB-1产生的粗蛋白浓度为0.16 mg/mL。该粗蛋白对胰蛋白酶及蛋白酶K不敏感,胃蛋白酶处理使其活性降低14%;抑菌蛋白在100℃以下处理30 min活性变化差异不显著,而121℃处理30 min其抑菌活性为对照的72%。抑菌蛋白对酸碱的耐受范围广,在pH值3~12的范围内抑菌活性均能保持在75%以上,pH值2时抑菌活性降低为对照的59%。经甲醇、氯仿、乙醚、乙酸乙酯及丙酮处理后该粗蛋白的抑菌活性变化不大。     

番茄叶霉病拮抗菌AYM-18抗菌物质的初步研究

[目的]探讨对番茄叶霉病具有较强抑制作用的拮抗菌AYM-18的抗菌物质,为利用该菌开发环境友好型的生物农药应用于番茄生产奠定基础.[方法]采用滤纸片法测定拮抗菌AYM-18的全细胞培养液、无菌滤液和菌体悬浮液对番茄叶霉病病原菌的抑菌活性,确定其抗菌物质的主要来源,并采用单因子试验测定其抗菌物质的稳定性及产生条件.[结果]拮抗菌AYM-18的全细胞培养液、无菌滤液对番茄叶霉病菌的抑菌效果明显,产生的抑菌带较早、较大;AYM-18菌株无菌滤液在pH 5～9、-20～80℃时均表现出很强的抑菌活性.AYM-18菌株抗菌物质产生的最佳培养条件为：培养基初始pH 6、接种量5％、28℃条件下培养36h.[结论]拮抗菌AYM-18对番茄叶霉病菌的拮抗作用源于其代谢物质,其抗菌物质具有一定的酸碱稳定性和热稳定性,产生条件温和,具有开发成生防制剂的潜力.     

番茄灰霉病菌拮抗稀有放线菌的分离及其抑菌物质分析

为筛选新型有效的番茄灰霉病菌天然抑制产物,采用平板对峙法和菌丝生长速率法从44株采自辽宁各地的放线菌中筛选植物病原真菌拮抗放线菌,通过孢子萌发生长法和系统发育树分析番茄灰霉病菌拮抗放线菌的抑菌活性和分类地位,测试高抑菌活性菌株无菌发酵液活性物质的稳定性,并以高分辨率飞行质谱扫描鉴定稀有放线菌发酵液的抑菌产物。结果表明,筛选到13株具有抑菌活性的放线菌,其中SA32、SA33、SA37、SA39、SA45、SA51这6株菌对番茄灰霉病菌的生长及其孢子萌发有抑制效果,SA37和SA45对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率分别高达75.13%和79.27%,对番茄灰霉病菌孢子萌发的抑制率分别高达86.25%和93.43%。系统发育树分析表明,SA45聚类于稀有放线菌北里孢菌属,其余5株菌均聚类于链霉菌属。对比高活性菌株SA37和SA45发酵液在-20～120℃、pH值1～14和3种酶(蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶)处理条件下的抑菌稳定性表明,SA45发酵液的抑菌活性和稳定性均高于SA37。高分辨率质谱分析不同溶剂提取的SA45活性物质表明,SA45发酵液中不存在已报道的活性物质。综上所述,北里孢菌SA45发酵液对番茄灰霉病菌具有高效和稳定的抑菌活性,可能存在新型抑菌物质,其菌株及发酵液具有较高的应用价值和研究价值。     

拮抗放线菌S-091菌株的发酵条件

为提高拮抗放线菌S-091菌株发酵液的抑菌活性,对其发酵培养的营养及环境条件进行研究。用番茄灰霉病菌作为抑菌活性测定的靶标菌,分别测定该菌株发酵培养基营养成分中不同种类的碳源、氮源、微量元素等物质以及发酵温度、培养基初始pH值、装液量、摇床转速等不同的发酵条件下菌株发酵液对靶标菌抑制作用的大小,以筛选出最适宜S-091菌株发酵培养的营养组成和环境条件。结果表明:在营养条件方面,可溶性淀粉和花生饼粉是菌株产抗生素的较优碳源和氮源营养;多种微量元素中KCl对菌株抗生素产生有明显的促进作用;在发酵环境条件方面,S-091菌株抗生素产生的较优培养温度为32℃,pH值为7,摇床转数为140r·min-1,适宜的装液量为250mL三角瓶装液100mL,最适宜的发酵时间为7d。     

一株从酸菜中分离的产细菌素乳杆菌的鉴定及其所产抑菌物质的研究

从酸菜汁中分离出一株有抑菌活性的菌株,经鉴定为乳杆菌A5。温度、pH对菌株发酵上清液的影响以及发酵上清液对酶的敏感性的研究表明,发酵上清液中的抑菌物质对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶较敏感,说明抑菌物质是一种蛋白质,确定为细菌素。该细菌素具有良好的热稳定性,在121℃20min的高温条件下,仍具有较强的抑菌活性。菌株所产细菌素在酸性条件下有较强的抑菌活性(pH3.0～5.0);菌株产生的细菌素可以较好地抑制革兰氏阳性、阴性菌,表明菌株所产细菌素是一类具有广谱抑菌活性的细菌素。     

蜡样芽孢杆菌B-02菌株培养基及培养条件的优化

为研究培养条件对蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)B-02菌株生长和对番茄灰霉病菌(Botrytis ci-nerea)抑菌活性的影响,分别采用分光光度计法、琼脂孔扩散法和杯碟法进行Bacillus cereusB-02菌株的菌体量和抑菌活性的测定。结果表明,B-02菌株的最佳培养条件为:装液量50 ml(250 ml三角瓶),接种量1%(V/V),转速140 r/min,温度32℃,初始pH值为9.0的NB培养基中培养36 h;在此条件下B-02菌株抑菌活性比初始条件提高16.22%。     

恒定pH对Xenorhabdus nematophila YL001抑菌活性及抑菌物质合成相关基因表达的影响

为明确恒定pH对Xenorhabdus nematophila YL001抑菌物质产生及相关抑菌物质合成的影响,对pH 5.5、pH 7.0及pH 8.5培养条件下X.nematophila YL001的抑菌活性、主要抑菌物质[Xenocoumacin1(XCN1)和Nematophin]的代谢差异及主要抑菌物质的生物合成基因与相关转录调节子基因的表达量进行分析。结果表明,X.nematophila YL001发酵液对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑菌作用在pH 7.0时最佳,而其胞外产物乙酸乙酯与甲醇提取物对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑菌作用在pH 8.5时最佳;LC-MS分析表明,随pH的升高,活性物质xcn1的相对含量逐渐升高,而Nematophin的相对含量则先升高后下降;qRT-PCR分析表明,不同恒定pH下,X.nematophila YL001主要抑菌物质生物合成基因及相关转录调节子基因的表达量存在显著差异。pH可显著影响X.nematophila YL001菌株的抑菌活性及代谢,且碱性条件更利于活性物质的产生并保持稳定性。     

放线菌HJ1-2菌株发酵液抑菌谱及稳定性的研究

采用菌丝生长速率法、管碟法和活体组织法测定发酵液的抑菌活性,在不同条件下测定发酵液的稳定性,捷克溶剂系统纸层析法鉴别发酵液中抗生素类型.发酵液的抑菌活性测定结果表明,放线菌HJ1-2菌株发酵液对20种供试病原真菌均具有不同程度抑制作用,其10倍稀释液对其中10种病原真菌菌丝生长的抑制率达到80%以上;供试7种细菌中放线菌HJ1-2菌株发酵液对白菜软腐病菌的抑制作用最强,抑菌圈直径为17.75 mm;放线菌HJ1-2菌株发酵液对油菜菌核病和番茄灰霉病的抑制率分别为100 %和71.39 %.发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液对热、酸和紫外线均较稳定,发酵液在80℃处理后抑菌活性开始下降,发酵液在pH3～9条件下抑菌活性稳定.捷克溶剂系统纸层析法测定表明,发酵液中主要抑菌活性物质为大环内酯类抗生素.该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值.     

土壤中抗真菌放线菌LH33发酵提取物活性研究

【目的】对抗真菌放线菌LH33菌株发酵提取物的活性进行初步测定,为后续的生防制剂研发提供科学依据。【方法】制备从渭北旱塬轮作土壤中筛选出的放线菌菌株LH33的发酵提取物,检测其对番茄灰霉病菌孢子萌发的抑制作用及对番茄灰霉病的防治和番茄的促生作用,并采用生长速率法测定其抑菌谱。【结果】在离体条件下,LH33发酵提取物对番茄灰霉病菌孢子的萌发具有强烈的抑制作用。在温室条件下,LH33发酵提取物对蕃茄灰霉病具有很好的预防和治疗效果,100 mg/L的LH33发酵提取物对番茄灰霉病菌预防和治疗效果最高,分别为94.2%和80.4%。LH33提取物对大多数供试病原真菌都有很好的抑制效果,其中1 mg/L药液对部分病原真菌抑制率在45%以上。菌株LH33发酵提取物能促进番茄的生长,番茄植株鲜质量的增幅可达到95.1%。【结论】菌株LH33可防治水稻、番茄、小麦、棉花等多种植物真菌病,并对植物的生长有促进作用。     

发光杆菌Photorhabdus sp．HBgyl3菌株对4种蔬菜病原菌的抑菌活性

测定了发光杆菌属Photorhabdus sp．HBgy13菌株对番茄菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)，冬瓜枯萎病菌(Fusarium axysporum)、萝卜褐腐病菌(Rhizoctoniasolani)、黄瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)等4种蔬菜病原真菌的抑制作用，并对该菌株发酵液中抑菌活性成分的理化特性及滤液活性进行了研究。结果表明：该菌株对黄瓜灰霉病菌和萝卜褐腐病菌有较好的抑制作用；该菌株在200r／min，28℃，96h发酵后，抑菌活性达到最大，抑菌圈分别达到2．28cm和2．74cm；发酵液经50℃处理10min后，对黄瓜灰霉病菌和萝卜褐腐病菌抑制活性分别下降34．2％、43．7％，经80℃处理10min后，对这2种病菌的抑菌活性消失，说明发酵液中的抑菌活性成分不耐高温；发酵液经紫外线处理30min后抑菌活性完全消失；发酵液pH值为7时，抑菌活性最强。滤液对黄瓜灰霉病菌和萝卜褐腐病菌的抑制活性分别为原液的33．O％和33．2％。     

非一般培养亲件下瘤胃液质量培养基质对培养液pH值的影响

非一般体外培养条件下，用Ｌ４２（３）正交设计研究培养瓶中瘤胃液质量，培养基质中能量和蛋白质对培养液ｐＨ值的影响。结果表明：１．影响培养液ｐＨ值的主要因素是基质。量大时ｐＨ下降得快。其中的蛋白质和能量在不同时间发挥作用的地位不同。２．培养液中微生物首先利用基质中能量物质生长，同时分解蛋白质；然后利用基质中能量和蛋白质生长繁殖，在合成微生物蛋白的同时导致ｐＨ值下降；最后利用能量维持自身。３．瘤胃液质量也即瘤胃液微生物区系和其活性也影响培养液ｐＨ值，并在不同的时间发挥不同性质的作用。说明生产上饲喂动物应有合理的饲喂方法。     

银杏提取物抑菌效果的研究

测定了不同浓度的银杏叶提取物对五种常见菌的抑菌活性,研究了不同的pH条件和热处理对抑菌活性的影响。结果表明：随着银杏叶提取物浓度的增加,其抗菌活性也显著增强;细菌的最低抑菌浓度为4％,霉菌的最低抑菌浓度为6％;银杏叶提取物的活性物质具有热稳定性,高温短时间加热不影响其抗菌活性;在pH为7的条件下,抗菌活性最强。     

内缓冲法提高乳清发酵剂活力的研究

在干酪乳清中添加一定量的ｐＨ６；０的柠檬酸钠──柠檬酸缓冲液可大大提高其缓冲能力。当在乳清中添加５％（０．５Ｍ，ｐＨ６．０）并以此为基质制备发酵剂时（发酵剂菌种组成为Ｓｔｒ．ＳａｌｉｖａｒｉｕｓＳｗｂｓｐ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ和Ｌｂ．ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉＳｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）可延缓乳酸菌发酵产酸所导致的ｐＨ下降过快而引起的抑制作用，与未添加者相比，制得的乳清发酵剂活力大为提高。当缓冲液添加量达１０％时，由于渗透压的增高抑制了乳酸菌的生长，对提高发酵剂活力没有作用。     

模拟酸雨对黄瓜种子萌发及幼苗生理特性的影响

[目的]衡量黄瓜对酸雨的耐受能力,同时也为正确评估酸雨给黄瓜规模化生产造成的损失提供参考。[方法]以津优1号黄瓜为试验材料,研究6个不同pH（6.5、5.04、.03、.5、3.02、.5）的模拟酸雨对黄瓜种子萌发和幼苗生理特性的影响。[结果]pH≤3.5的酸雨胁迫对黄瓜种子的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数均表现明显抑制作用,pH 2.5时,种子不萌芽;根（茎）抑制指数随pH降低而升高,同一pH下对主根的抑制强于茎,pH 5.0的弱酸对侧根的形成有促进作用;随着pH逐渐下降,根系活力和POD活性呈先升高后降低的趋势,而相对电导率和MDA含量一直上升。[结论]酸雨对黄瓜种子萌发及幼苗生理活动影响的阈值大致在pH 3.5。     

不同玉米杂交种亲本磷营养特征及对低磷胁迫的响应

为比较不同玉米杂交种亲本在不同磷水平下植株生长和养分吸收特性,以及养分在体内的循环和分配的差异,选取我国在生产中大面积推广且抗逆性较强的玉米杂交种亲本:郑58/昌7-2(郑单958),PH6WC/PH4CV(先玉335),利用营养液培养的方法进行了这些玉米磷营养特征的研究,通过供磷和缺磷营养液培养研究缺磷对不同基因型玉米生长发育,根系形态、活性和生理特性的影响,玉米苗期光合速率变化,并比较基因型间差异。结果表明,与供磷相比,缺磷亲本的干质量降低,磷增长量降低,根干质量增加,根冠比增加;根长增长,根半径降低,根表面积增加,总吸收面积和比表面积均降低;pH值降低;吸收H2PO4-和耐低磷能力提高,叶面积和光合速率下降。不同亲本间存在显著差异,其中,PH4CV具有相对较大的根长和根表面积,较活跃的根系吸收活性,干重增长较大,吸收速率大,叶面积和光合速率下降幅度较低,耐低磷能力强。     

聚糖内切酶EGⅢ的克隆及其在酵母中的表达（摘要）

[目的]构建可降解纤维类固体废弃物的工程菌。[方法]采用RT-PCR方法克隆了绿色木霉（Trichoderma viride）AS313711的葡聚糖内切酶Ⅲ（EGⅢ）的cDNA,测序后构建到酵母表达载体pESP-2上,并通过电击法将其转到酵母感受态细胞中去,得到酵母表达转化子。通过DNS法测定该转化子在不同温度、不同pH值下酶活力的大小。[结果]EGⅢ的cDNA开放阅读框长度为1 257 bp,编码418个氨基酸,推测蛋白质分子量为44.1×10~3。在pH值为4.9、温度在60℃条件下,EGⅢ酶活力最高,相对酶活为100%。[结论]获得了高表达效率的EGⅢ-T-pESP-2酵母表达载体,其表达活性要比天然的酶高出3～5倍,只要调节好温度、pH值的关系,可提高纤维素葡聚糖内切酶的下游转化纤维素效率,在大规模生产中生产出大量的葡萄糖。     

短小芽孢杆菌XZG33耐高温酸性β-甘露聚糖酶酶学性质研究

[目的]从短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）XZG33发酵液中分离纯化甘露聚糖酶,并对其酶学性质进行研究。[方法]利用硫酸铵分级盐析、DEAE-cellulose DE52阴离子交换层析和Sephadex G-100分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的蛋白酶,酶纯度提高了39.7倍,回收率20.2%。通过SDS-PAGE电泳和SephadexG-75分子筛凝胶电泳测得酶蛋白分子量是40.0 kDa,为单亚基蛋白。酶最适作用pH值5.0,最适作用温度60℃,在pH值2.0～8.0范围内酶活性及稳定性较高。在80℃以下保温1 h,残余酶活还在80.0%以上。二价金属离子Mg2＋、Ca2＋、Co2＋及Mn2＋对酶有明显激活作用。酶对槐豆胶有强的底物水解特异性,而对淀粉、羧甲基纤维素钠以及桦树木聚糖水解活性极低。在最适作用条件下,以槐豆胶为底物测定Km为4.6 mg/ml。[结论]鉴于短小芽孢杆菌XZG33甘露聚糖酶具有以上优良的酶特性,它在食品原料及功能性低聚糖的开发方面有着潜在的应用价值。     

土壤中砷的吸附和砷对水稻的毒害效应与pH值的关系

盆栽试验、吸附实验和调查研究表明,砷在土壤-植物系统中的变化与土壤pH值关系密切。土壤pH值升高时,土壤中砷的吸附减少、溶解度增大,因此,水稻植株对砷的吸收量增加,砷对植物的毒性增强。逻辑斯蒂曲线的模拟结果显示,在碱性条件下,pH值的变化对土壤中砷的吸附和毒害效应的影响较大;而在酸性时,pH值的变化对砷的吸附作用和毒害效应的影响相对较小。     

模拟酸雨对不同层次的红壤元素迁移作用的影响

模拟酸雨作用下土壤酸化在垂直方向上具有阶段性，这决定着土壤元素迁移的阶段性。表现为在红壤酸化初期表层（Ａ层）元素快速向底层（Ｂ或Ｃ层）迁移，随着酸化由表土向下的深入，淀积于Ｂ层的元素又可以发生再迁移。酸雨的输入总体上加速了元素迁移的速率，同时也促进了土壤矿物风化和元素形态从迟效状态向可供作物吸收的易迁移状态转化。     

Ribonuclease activity in the developing seeds of normal and opaque-2 maize

During development, the ribonuclease activity of maize endo sperm homozygous for the opaque-2 gene increased earlier and, after a longer period of exponential increase, was much higher finally than in normal endosperm. The maximum difference was about sixfold and occurred 22 to 25 days after pollination. Heterozygotes on day 23 did not show a comparable in crease in endosperm activity. No differ ence in the activity ratio (pH 6.0: pH 5.2) was found between normal and opaque-2 endosperm, indicating that the increase in activity in opaque-2 was due solely to an increase in ribo nuclease A. The ribonuclease activity of opaque-2 embryos increased more rapidly than that of normal embryos, but the final activity was the same in each case.