肠型点状产气单胞菌口服疫苗对草鱼的免疫保护效应研究

采用生物可降解材料聚丙烯酸树脂制备含肠型点状产气单胞菌的微粒疫苗,口服免疫草鱼,测定实验鱼血清抗体及其对活菌攻击的保护率.实验结果显示,用肠型点状产气单胞菌微粒疫苗进行口服免疫或用全菌疫苗、佐剂疫苗进行注射免疫均可诱导草鱼的血清抗体应答,对肠型点状产气单胞菌攻击的草鱼具有一定的保护作用,保护率分别为52.4%、66.7%及71.4%,对照组仅有16.0%的存活率.可见,口服微粒疫苗对草鱼有显著免疫保护效应,可作为预防肠型点状产气单胞菌感染的疫苗.     

草鱼点状产气单胞菌单克隆抗体的制备与双抗原夹心ELISA法的建立

为了建立一种快速、准确能早期检测草鱼肠炎病原菌的方法,以患病草鱼为材料,制备点状产气单胞菌单克隆抗体(McAb),并鉴定其特异性和抗原表位;采用过碘酸钠方法,以辣根过氧化物酶标记单抗,用试管凝集试验测定其活性;建立点状产气单胞菌McAb的双抗原夹心ELISA检测方法,确定包被单抗和酶标单抗的浓度,并测定其灵敏度和特异性。结果:1)获得了2株特异性强和抗原表位不同的单抗,其ELISA效价为1∶16 000。2)辣根过氧化物酶标记的抗体活性为1∶640。3)建立了包被抗体稀释度为1∶800、酶标抗体稀释度为1∶1 600的双抗原夹心ELISA检测方法,该方法与点状产气单胞菌呈强阳性反应,与近似菌无交叉反应,灵敏性为7×103cfu/mL。结论:制备的点状产气单胞菌McAb的效价高、特异性强;建立的双抗原夹心ELISA方法操作简单、灵敏度高、特异性强,可应用于草鱼肠炎病原体的早期快速检测。     

肠型点状产气单胞菌口服疫苗对草鱼的免疫保护效应研究

采用生物可降解材料聚丙烯酸树脂制备含肠型点状产气单胞菌的微粒疫苗,口服免疫草鱼,测定实验鱼血清抗体及其对活菌攻击的保护率．实验结果显示,用肠型点状产气单胞菌微粒疫苗进行口服免疫或用全菌疫苗、佐剂疫苗进行注射免疫均可诱导草鱼的血清抗体应答,对肠型点状产气单胞菌攻击的草鱼具有一定的保护作用,保护率分别为52．4％、66．7％及71．4％,对照组仅有16．0％的存活率．可见,口服微粒疫苗对草鱼有显著免疫保护效应,可作为预防肠型点状产气单胞菌感染的疫苗．     

草鱼新旧"三病"防治

细菌性肠炎病、烂鳃病、赤皮病是草鱼的旧三大主要病害。草鱼细菌性烂鳃、细菌性肠炎、赤皮病的病原分别是柱状嗜纤维菌、肠型点状气单胞菌和荧光假单胞菌，它们均属革兰氏阴性菌。     

草鱼肠道正常菌群与肠炎病原菌关系的初步研究

本文运用微生态学原理和方法,对二龄健康草鱼和肠炎草鱼肠道中的大肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌四种优势常居菌及草鱼肠炎病原菌——点状产气单胞菌进行了定量检测。同时,对草鱼肠道中厌氧菌和需氧菌比值也进行了测算。通过对试验数据的统计学处理分析,阐明了点状产气单胞菌与肠道正常菌群的量变关系,提出了两个回归计算式。另外,还从微生态学角度,对草鱼肠炎的发病机理和生物防治进行了讨论。     

辽宁地区草鱼细菌性肠炎及烂鳃病的综合防治技术

<正>1草鱼细菌性肠炎及烂鳃病产生的原及症状细菌性肠炎的病原为肠型点状气单胞菌,一般生长在25度的环境中,当草鱼感染此病后,症状表现为肛门红肿,腹部变大等,当对腹部进行轻轻按压后,会流出一些黄色液体。通过对病鱼的腹腔进行解剖,发现里面有积水,并且肠壁相比原来变薄。烂鳃病产生的病原为柱状黄杆菌,一般情况下生产在25.8℃度的环境中,当草鱼患上此病后,身体会变为黑色,且行动明显变慢,并且腮丝出现肿胀的情况,经常会带有一些碎屑等杂物。2草鱼细菌性肠炎及烂鳃病的流行情况2.1细菌性肠炎     

池塘草鱼病害综合防控措施

<正>当然,由于人们对草食性鱼类的需求越来越大,草鱼的养殖也愈来愈热。但是草鱼疾病多,难控制,易造成大量死亡。为提高养殖草鱼成活率,在草鱼养殖中要采取综合防治,提早预防和科学用药,笔者为指导渔业生产提供理论和实践依据。一、发病菌源及症状草鱼常见病有2类,即新、旧三大病害。细菌性烂鳃病、细菌性肠炎病、赤皮病是草鱼的旧三大病害,其病原分别是柱状嗜纤维菌、肠型点状气单胞菌和荧光假单胞菌,它们均     

泥鳅养殖过程常见疾病防治

正一、肠炎症状:食欲减退或不吃,肛门部分红肿外突,稍压腹部有血水或黄色液体流出。病因:由肠型点状产气单胞菌感染引起的细菌性肠炎,属于条件致病菌,当水质恶化、溶氧低、摄食变质饵料等引起抵抗力下降时,容易爆发此病。预防:每千克饲料添加整肠生10克+黄芪多糖10克,进行周期性预防。     

论池塘草鱼病害综合预防与用药方法

<正>当前,由于人们对草食性鱼类的需求越来越大,草鱼的养殖也愈来愈热。但是草鱼疾病多,难控制,易造成大量死亡。为提高养殖草鱼成活率,在草鱼养殖中要采取综合防治,提早预防和科学用药,笔者为指导渔业生产提供理论和实践依据。一、发病菌源及症状草鱼常见病有2类,即新、旧三大病害。细菌性烂鳃病、细菌性肠炎病、赤皮病是草鱼的旧三大病害,其病原分别是柱状嗜纤维菌、肠型点状气单胞菌和荧光假单胞菌,它们均属革兰     

常见鱼病防治新技术(4)细菌性肠炎病

病原 细菌性肠炎病又称烂肠瘟、乌头瘟,病原体为肠型点状产气单胞菌,为条件致病菌,鱼类的肠道中都存在此类病菌.但在健康的鱼体中,该菌处于弱势,不会引发疾病.但当受到水质环境恶化、溶氧降低、投喂变质的饲料以及投饵不定时、不定量等原因影响时,引起鱼体的抵抗力下降,从而病原菌随鱼的粪便排到水体中污染水质及饲料,经鱼嘴传染到其他鱼类.     

抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定

制备抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体并对其进行鉴定.采用纯化抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌抗AIV-H5N1的单克隆抗体细胞株,将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对腹水抗体进行纯化,测定抗体亚类,并对其抗原结合位点进行分析.共获得了5株单克隆抗体杂交瘤细胞株,均为抗AIV-H5N1的特异性单克隆抗体,而且与H9N1型禽流感病毒,H13型禽流感病毒,鸡新城疫病毒,产蛋下降综合征病毒,鸡传染性支气管炎病毒均无交叉反应.     

草鱼肠型点状产气单胞菌双抗夹心ELISA试剂盒的研制

通过对包被单抗和酶标单抗以及抗原最佳工作浓度的优化,建立草鱼肠型点状产气单胞菌双抗夹心ELISA试剂盒检测体系。用分光光度法对检测体系的特异性、稳定性和灵敏度进行测定;用脱脂奶平板法对试剂盒的临床应用进行检测。结果表明,单抗最适稀释液为pH9.4的碳酸盐缓冲液,洗涤液为含φ=0.05%Tween-20的PBS,包被单抗最适体积稀释倍数为1∶800,酶标单抗最适体积稀释倍数为1∶6 000,抗原最佳工作浓度为3×104cfu/mL。试剂盒与肠型点状产气单胞菌有特异性反应,脱脂奶平板法与试剂盒法对草鱼患病检出率基本一致,符合率达90%;试剂盒有很好的储存稳定性,检测灵敏度为7×103cfu/mL。     

一株分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞的鉴定

[目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His—PoIFN一γ免疫BALB／c小鼠4次,然后进行细胞融合,再以纯化的GST—PoIFN一1作为包被抗原,用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系,最终获得能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对其进行问接ELISA和Westernblot检测。[结果]试验获得l株能稳定分泌抗猪IFN一1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,被命名为B3株,经间接ELISA和Westernblot检测,该株分泌的抗体能与融合蛋白His—PoIFN一γ和GST—PoIFN一γ发生特异性反应,而与其他表达鸡γ-干扰素、His和GST蛋白等的重组质粒均不发生反应。B3株分泌的抗体小鼠腹水的ELISA效价达到1：160000,抗体亚型为IgG1型,且轻链为κ链。[结论]该研究为建立猪γ-干扰素检测方法,研究机体的免疫状态及免疫机制提供了技术基础。     

抗牛轮状病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以从黑龙江省腹泻犊牛粪便中分离的牛轮状病毒(bovine rotavirus)为抗原,免疫6～8周龄BALB/_c小鼠,取血清抗体阳性小鼠的脾细胞与SP_(2/0)骨髓瘤细胞融合。用ELISA间接法检测抗体,通过有限稀释法,克隆出一株分泌抗牛轮状病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经鉴定,此杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体为IgM,轻链为K链。通过连续传代证明,此杂交瘤细胞株具有稳定分泌单克隆抗体的性质。杂交瘤细胞诱生BALB/_c小鼠腹水的单克隆抗体滴度可达1:10000以上。     

多种接种途径对草鱼细菌性烂鳃和肠炎病的免疫预防效果

将柱状嗜纤维菌（Ｃｙｔｏｐｈａｇａｃｏｌｕｍｎａｒｉｓ）和点状气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｐｕｎｃｔａｔａ）分别制成酚灭活菌苗（ＰＫＣ）和提取其菌体脂多糖（ＬＰＳ），采用浸泡加注射和口服加浸泡的多种接种途径，对草鱼免疫接种４周后，测定受免鱼血清中凝集抗体效价。无论是浸泡加注射还是口服加浸泡的免疫应答均较对照鱼有明显上升，对活菌攻毒的免疫保护率也达到了５０％～８８．９％。证明了多种接种途径免疫预防草鱼的细菌性烂鳃和肠炎病的效果是明显的。     

抗猪IgG单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG. 经SDS-PAGE电泳鉴定, 纯化的IgG达到电泳纯. 以此纯化的IgG, 采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠, 取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合, 融合率为90.3%. 建立间接ELISA, 用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体. 初检阳性率为13.9%. 经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 命名为6B4、 4B8. ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG, 6B4、 4B8经反复冻存, 复苏及多次传代, 仍能分泌高效价抗体, 分泌抗体均属IgG1、κ型. 本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用.     

抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

【目的】针对O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth Disease Virus,FMDV)制备特异性的单克隆抗体,为进一步研制O型口蹄疫诊断方法提供物质基础。【方法】用纯化的O型口蹄疫病毒免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,结合间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)筛选,有限稀释法克隆,建立稳定的阳性杂交瘤细胞株,并对制备的单克隆抗体进行生物学特性鉴定。【结果】获得了2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2B9和5F7,抗体亚类鉴定其均为IgG1/κ类型;IFA结果显示,2株单克隆抗体仅与O型FMDV反应,不与Asia1型FMDV反应,推测其均为抗O型FMDV的型特异性单克隆抗体;Western blot结果显示,2株单克隆抗体均无特异性条带出现,表明其所针对的抗原表位均为构象型表位;相加ELISA试验表明,2B9与5F7两株单克隆抗体识别的抗原表位相近或相同;经硫氰酸盐洗脱法测定,2B9和5F7的相对亲和力指数均为1.5 mol/L;中和试验显示,2株单克隆抗体都不具有中和活性。【结论】2株单克隆抗体的获得及其生物学性质的鉴定,为O型口蹄疫诊断方法的建立提供了基础材料。     

抗猪IgG单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG.经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的IgG达到电泳纯.以此纯化的IgG,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,融合率为90.3%.建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体.初检阳性率为13.9%.经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6B4、4B8.ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG,6B4、4B8经反复冻存,复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体,分泌抗体均属IgG1、κ型.本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用.     

鸡IgG单克隆抗体的制备与鉴定

[目的]制备鸡免疫球蛋白单克隆抗体,提高诊断鸡特异性抗体的水平。[方法]应用盐析法粗提和葡聚糖G200凝胶层析分离纯化鸡血清IgG,免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合和ELISA筛选。[结果]间接ELISA法检测C44、C45、C67和C68共4株鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞的腹水效价分别为1∶640000、1∶320000、1∶640000和1∶80000。Westernblot分析显示,C44和C45株单克隆抗体识别鸡IgG轻链,而C67和C68株单克隆抗体识别鸡IgG重链,它们与鸭、猪等血清Ig均没有反应。小鼠Ig亚类分析表明,4株细胞分泌的抗体均为IgG1型。[结论]成功获得了4株稳定分泌鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞。     

水稻细菌性条斑病病原菌(Xanthomonas campestris pv.oryzicola)单克隆抗体的研究

应用淋巴细胞杂交瘤技术,融合经水稻细菌性条斑病病原菌(Xanthomonas campestris pv.oryzicola)免疫的BALB/C小鼠脾细胞和Sp2/O骨髓瘤细胞,经细条病菌典型菌株R17,R25和GX-1单独及三者混合包被进行ELISA检测筛选,建立了能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株18G 9,19D8,21F2,21G3,25E6和26F9细胞株。体外连续传代培养三个月,液氮冻存四个月后复苏培养,分泌抗体稳定。六株杂交瘤细胞的腹水单克隆抗体ELISA效价在1:2000左右。各株细胞的培养上清液ELISA效价为1:8左右。18G9,19D8和25E6细胞株所分泌的抗体为小鼠IgM类,21F2和21G3分泌的抗体为小鼠IgG_3亚类,26F9分泌的抗体为小鼠IgG_(2b)亚类。根据与植物病原细菌4个属6个种的20个不同菌株的特异性反应,将六株单克隆抗体分为A,B,C三组,20个菌株分为3个血清型和1个菌株群。