肠型点状产气单胞菌口服疫苗对草鱼的免疫保护效应研究

采用生物可降解材料聚丙烯酸树脂制备含肠型点状产气单胞菌的微粒疫苗,口服免疫草鱼,测定实验鱼血清抗体及其对活菌攻击的保护率．实验结果显示,用肠型点状产气单胞菌微粒疫苗进行口服免疫或用全菌疫苗、佐剂疫苗进行注射免疫均可诱导草鱼的血清抗体应答,对肠型点状产气单胞菌攻击的草鱼具有一定的保护作用,保护率分别为52．4％、66．7％及71．4％,对照组仅有16．0％的存活率．可见,口服微粒疫苗对草鱼有显著免疫保护效应,可作为预防肠型点状产气单胞菌感染的疫苗．     

鱼用嗜水气单胞菌口服疫苗的免疫保护效应

目的:制备含嗜水气单胞菌被膜或全菌的PLG疫苗微粒,以草鱼为实验动物,研究疫苗微粒的免疫保护效应.方法:采用复乳挥发法制备PLG疫苗微粒,草鱼口服免疫在4周内进行3次(每次10 mg微粒),用ELISA法测定血清和肠粘液的抗体变化,保护效应用细菌攻击实验检测.结果:获得被膜和全菌的PLG疫苗微粒,蛋白含量分别为2.31%,6.12%,2种疫苗微粒均可诱导血清及肠粘液抗体应答.腹腔接种20 LD50嗜水气单胞菌后,被膜、全菌疫苗微粒组的存活率分别为46.7%和36.7%,相对存活率分别为42.9%和32.1%,接受空微粒的草鱼仅有6.7%的存活率.结论:被膜、全菌疫苗微粒对草鱼均有显著免疫保护效应,可作为预防嗜水气单胞菌感染的疫苗.     

鱼用嗜水气单胞菌口服疫苗的免疫保护效应

目的：制备含嗜水气单胞菌被膜或全菌的PLG疫苗微粒。以草鱼为实验动物，研究疫苗微粒的免疫保护效应。方法：采用复乳挥发法制备PLG疫苗微粒，草鱼口服免疫在4周内进行3次（每次10mg微粒），用ELISA法测定血清和肠粘液的抗体变化，保护效应用细菌攻击实验检测。结果：获得被膜和全菌的PLG疫苗微粒，蛋白含量分别为2．31％，6．12％，2种疫苗微粒均可诱导血清及肠粘液抗体应答。腹腔接种20LD50嗜水气单胞菌后，被膜、全菌疫苗微粒组的存活率分别为46．7％和36.7％，相对存活率分别为42．9％和32．1％，接受空微粒的草鱼仅有6．7％的存活率。结论：被膜、全菌疫苗微粒对草鱼均有显著免疫保护效应。可作为预防嗜水气单胞菌感染的疫苗。     

草鱼肠型点状产气单胞菌McAb制备及鉴定

为获得草鱼肠型点状产气单胞菌McAb,从患细菌性肠炎的草鱼机体上分离肠型点状产气单胞菌制成免疫原,免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得1株特异的针对肠型点状产气单胞菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为AM,用吉姆萨染色,其染色体条数平均在90-100条。小鼠腹腔扩大培养,其腹水单克隆抗体的ELISA效价为1∶16000,与其他细菌无明显的交叉反应,抗体类型为IgG1。证明实验制备的抗体为高特异性的针对肠型点状产气单胞菌的单克隆抗体,可以用于患细菌性肠炎病草鱼的快速诊断。     

荧光假单胞菌灭活疫苗对草鱼的免疫保护效应

从患病草鱼分离出荧光假单胞菌,制备甲醛灭活全菌苗、高温灭活全菌苗、可溶性蛋白及外膜蛋白疫苗.经腹腔注射草鱼后,研究这些疫苗的免疫保护作用.免疫后于不同时间采集血液,用试管凝集法测定血清抗体滴度.实验结果表明,上述疫苗均诱导较强的免疫应答.抗体峰值出现的先后顺序依次为可溶性蛋白组、外膜蛋白组、甲醛灭活全菌苗组及高温灭活全菌苗组;而抗体峰值从高到低依次为甲醛灭活全菌苗组、高温灭活全菌苗组、可溶性蛋白组及外膜蛋白组.细菌攻毒实验显示,4种疫苗免疫后均产生明显的保护效应.其中,高温灭活全菌苗相对保护率最高,达到75%,甲醛灭活全菌苗、外膜蛋白以及可溶性蛋白的相对保护率分别为70%,70%和65%,说明这些疫苗均可用于预防草鱼赤皮病.此外,实验亦显示血清抗体水平与疫苗保护效应并不完全一致.     

莨菪碱在草鱼口服免疫中佐剂性的初步研究

将莨菪碱添加在酚灭活的柱状嗜纤维菌和菌体脂多糖疫苗中，分别口服免疫接种草鱼后，通过检测血液中吞噬细胞的吞噬活性、血清中凝集抗体效价和活菌攻毒等方法，探讨了莨菪碱在草鱼口服免疫中的佐剂性。结果表明，用添加莨菪碱的疫苗免疫接种草鱼后，受免鱼体血液中吞噬细胞的吞噬活性、血清中凝集抗体效价和活菌攻毒后的免疫保护率，都明显地高于未添加莨菪碱疫苗的免疫组。从而证明了莨菪碱在草鱼口服免疫中具有良好的佐剂性。     

荧光假单胞菌灭活疫苗对草鱼的免疫保护效应

从患病草鱼分离出荧光假单胞菌,制备甲醛灭活全菌苗、高温灭活全菌苗、可溶性蛋白及外膜蛋白疫苗。经腹腔注射草鱼后,研究这些疫苗的免疫保护作用。免疫后于不同时间采集血液,用试管凝集法测定血清抗体滴度。实验结果表明,上述疫苗均诱导较强的免疫应答。抗体峰值出现的先后顺序依次为可溶性蛋白组、外膜蛋白组、甲醛灭活全菌苗组及高温灭活全菌苗组;而抗体峰值从高到低依次为甲醛灭活全菌苗组、高温灭活全菌苗组、可溶性蛋白组及外膜蛋白组。细菌攻毒实验显示,4种疫苗免疫后均产生明显的保护效应。其中,高温灭活全菌苗相对保护率最高,达到75%,甲醛灭活全菌苗、外膜蛋白以及可溶性蛋白的相对保护率分别为70%,70%和65%,说明这些疫苗均可用于预防草鱼赤皮病。此外,实验亦显示血清抗体水平与疫苗保护效应并不完全一致。     

浸泡免疫预防草鱼细菌性烂鳃病效果的研究

用酚灭活的柱状嗜纤维菌和从该菌体提取的菌体脂多糖浸泡接种２０～２５ｇ的草鱼鱼种，共浸泡２次间隔一周。通过检测受免鱼体血清、肠和体表粘液中凝集抗体效价、血液中吞噬细胞的吞噬活性和采用活菌攻毒的方法，探讨了浸泡免疫接种疫苗对预防草鱼细菌性烂鳃病的效果。结果表明，受免鱼体与对照鱼相比，血清、肠和体表粘液中凝集抗体效价和血液中吞噬细胞的吞噬活性都有明显上升。经活菌攻毒后，酚灭活柱状嗜纤维菌疫苗免疫组免疫保护率达３０％，而脂多糖疫苗免疫组免疫保护率为５５％。     

草鱼对点状气单胞菌菌苗的免疫反应

将点状气单胞菌用福尔马林、苯酚以及加热来灭活后，给草鱼注射接种，通过测定免疫鱼血清凝集抗体效价、血液中吞噬细胞的吞噬活性和强毒攻击的免疫保护力，证实了３种方法灭活的菌苗对草鱼均具有较强的免疫原性，并以苯酚灭活菌苗的免疫保护力最强。     

黄鳝出血病三联微胶囊口服疫苗制备及免疫效果研究

【目的】制备出能有效防御黄鳝出血病的三联微胶囊口服疫苗,促进黄鳝养殖业健康发展。【方法】以嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌及温和气单胞菌为抗原,海藻酸钠为壁材,利用乳化法制备三联微胶囊口服疫苗,然后直接拌入饵料对健康黄鳝进行口服免疫,7 d后进行加强免疫,测定各项血清免疫指标。加强免疫结束15 d后,经腹腔注射3种活菌(1.0×109 CFU/mL)进行攻毒试验,检验三联微胶囊口服疫苗对黄鳝的免疫保护率。【结果】制备获得的三联微胶囊口服疫苗的平均粒径为44.5μm,平均含菌量为4.56×109 CFU/mg。按0.4和0.6 g/kg的剂量口服免疫黄鳝,其血清补体C3含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、酸性磷酸酶(ACP)活性均显著高于对照组(P<0.05),血清平均抗体效价分别为7.5949和11.0651,对应的免疫保护率为60%和65%,且0.6 g/kg剂量组的各项指标均高于0.4 g/kg剂量组。【结论】制备获得的三联微胶囊口服疫苗能显著提高黄鳝血清SOD、ACP活性及刺激血清补体C3产生,有效抵御由嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和弗氏柠檬酸杆菌引起的出血病,生产使用时须进行加强免疫,并适当加大免疫剂量。