解毒酶降解甲基对硫磷的研究

为验证产碱假单胞菌代谢产生的解毒酶对农药的降解作用,研究了该酶对水体系和蔬菜中的甲基对硫磷的降解规律,同时采用气相色谱-质谱法(GC-MS)分析了酶作用后甲基对硫磷的降解产物。结果表明:此酶可以有效降解甲基对硫磷的残留,且酶浓度越高,其降解效果越好。当水体系中甲基对硫磷起始浓度为03 mg/L时,添加320 mg/L的酶作用90 min后,甲基对硫磷的降解效果可达81.7%;当蔬菜体系中甲基对硫磷浓度为0.5 mg/kg时,添加相同量的酶作用60 min后,甲基对硫磷的降解效果可达58.5%。通过GC-MS确定降解产物为4-硝基酚,水体系中甲基对硫磷的降解规律符合一级反应动力学模型(R2>0.84),这为促进其在实际生产中的应用提供理论依据。     

外源脯氨酸对番茄体内残留百菌清降解的调控作用

为探索外源脯氨酸(Pro)对番茄残留农药降解代谢的调控作用,以番茄浙杂205为供试植物,以杀菌剂百菌清为供试农药,研究外源Pro对番茄体内喷施百菌清后的农药残留量、活性氧含量、抗氧化酶和解毒酶的影响。研究表明,外源3 mmol·L^-1的Pro预处理显著降低了百菌清处理7 d后番茄体内的农药残留量。与对照相比,外源Pro预处理可显著提高百菌清处理后番茄过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDAR)的活性,进一步提高农药处理后12~96 h的GSH/GSSG比值,及谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性和非蛋白结合态巯基化合物(NPT)含量。因此,外源喷施Pro可提高SOD、MDAR、CAT、POD等抗氧化酶活性,促进GSH的再生,提高GST等解毒酶活性,从而加速番茄体内百菌清的降解代谢,为促进蔬菜残留农药的降解提供一条新途径。     

有机磷降解酶及毒素解毒酶的分子改良与产品研制

针对当前已分离得到的有机磷降解酶、黄曲霉素解毒酶和N-酰化高丝氨酸内酯降解酶的缺陷与不足，以蛋白质组学和生物信息学为基础，利用基因改组、定点突变、随机突变、蛋白分子修饰等手段及蛋白质分子设计技术，结合生物信息学理论，对有机磷降解酶、黄曲霉毒素解毒酶关键氨基酸残基的分析，并通过理性设计和密码子偏好性改造等，着重对酶蛋白特性进行分子改良，     

有机磷降解酶及毒素解毒酶的分子改良与产品研制

课题内容、目标： 针对当前已分离得到的有机磷降解酶、黄曲霉毒素解毒酶和N-酰化高丝氨酸内酯降解酶的缺陷与不足，以蛋白质组学和生物信息学为基础，利用基因重组、定点突变、随机突变、蛋白质分子修饰等手段及蛋白质分子设计技术，结合生物信息学理论，对有机磷降解酶、黄曲霉毒素解毒酶关键氨基酸残基的分析，并通过理性设计和密码子偏好性改造等，着重对酶蛋白特性进行分子改良，     

有机磷农药降解酶的研究进展

有机磷农药污染严重,利用有机磷农药降解酶是治理有机磷农药残留的新技术,综述了有机磷农药降解酶的作用机理、基因、应用等方面的研究现状。     

新型农药残留降解技术问世

目前，“蔬菜瓜果农药降解酶”研制成功并通过了国家鉴定。该技术可全面分解农药毒性分子。去除农药残留，具有国际领先水平。该农药降解酶可迅速作用于农药残留的有机磷分子，通过生化反应降解分子中的磷酯键，使其不溶性的剧毒成分瞬间分解为无毒、可溶于水的小分子，彻底去除农药残留。降解后的溶液是无毒水溶液，对环境不会有二次污染。对自然环境如湖泊、土壤中的农药残留也具有极高的净化功效。     

农药残留降解方法研究进展

农药的使用对农业的发展发挥着重大作用,但同时也造成严重的农产品污染和环境污染。对农药残留降解方法进行了综述,重点介绍了超声波技术、吸附、洗涤和辐照等物理方法,水解、氧化分解和光化学降解等化学方法,微生物、降解酶和工程菌等生物方法对农药残留的降解作用。     

寄主植物与昆虫抗药性的关系

昆虫取食不同的寄主植物后，会对杀虫药剂产生不同程度的抗性。这主要是由于寄主体内的次生物质和植物营养对昆虫有不同程度的影响，次生物质会对解毒酶系产生诱导作用，这种诱导作用会使解毒酶降解杀虫药剂，植物营养会影响昆虫的生长发育状况。因此寄主植物与昆虫抗药性关系的研究在害虫综合治理中有着重要意义。     

“百株”作为农药解毒降毒剂的研究报告

“百株”作为农药解毒降毒剂使用是起作用的。研究结果表明，在1升PH8的溶液中，使用1％浓度的“百株”，处理30min，可使36mg敌百早降解24．7mg，解毒降毒效果约达60％以上。     

我国研制成功“有机磷农药降解酶制剂”

中国农业科学院宣布，一项新技术成果“有机磷农药降解酶制剂”，近日在我国研制成功。这种新型的、具有完全自主知识产权的科研创新成果，能够有效降解有机磷农药、彻底除去农产品的农药残留。据介绍，该成果已在中试水平上（3t发酵罐）确立了利用基因工程酵母菌生产有机磷降解酶的稳定的发酵工艺，其发酵方法简单易行，发酵原料易得，技术指标优越，为有机磷降解酶的产业化奠定了基础。据悉，该制剂有望在2006年投入生产，到2007年底，预计可生产1404t“比亚”降解酶，可以解决125万t蔬菜水果的残留农药降解问题。     

有机磷农药乐果降解菌的分离及其活性研究

从污泥中分离到一株可降解有机磷农药乐果（dimethoate）的细菌G1，初步鉴定为不动菌属（Acinetobacter)。该菌专性好氧，最适生长温度为30℃，最适pH7．0，以共代谢方式降解乐果，还能降解有机磷农药敌敌畏（dichlovos）和对硫磷（parathion)，不降解甲胺磷（metharnidophos)。     

Propanil hydrolysis: inhibition in rice plants by insecticides

Hydrolysis of the herbicide propanil (3', 4'-dichloropropionanilide) by rice plants is inhibited by insecticides. The inhibitory activity of an organophosphate such as paraoxon in vivo and in vitro is significantly stronger than that of an organothiophosphate such as parathion. The injury to rice plants by insecticides sprayed on them with propanil seems to be caused by the inhibition of the propanil detoxifying enzyme.     

利用生物信息学手段获得两个对硫磷水解酶

以黄杆菌(Flavobacterium)对硫磷水解酶(parathion hydrolase)的序列(AAA24930．1)对芽孢杆菌的基因组进行BLASTP,从Bacillus halodurans中发现两个对硫磷水解酶类似蛋白PTEa和PTEb,长度分别为679和331个氨基酸。利用conserved domain search和motif scan软件分析的结果证实它们具有对硫磷水解酶的结构特征。PTEa和PTEb的对硫磷水解酶上游标志区分别是“GVCACHEHL”和“GFTYSHEHI”,与标准的“G—x—T—L—x—H—E—H-【LIV]”大致吻合。PTEb的对硫磷水解酶下游标志区“AVARAHHETKAPIHSH”也与典型的“A—x—A—x—A—x(4)-G—x—P-[LIVM]-x(2)-H”基本一致,而PTEa中缺乏明显的下游标志区。PTEb序列对枯草杆菌基因组TBLASTN的结果表明枯草杆菌也可能存在对硫磷水解酶类似蛋白。     

通过正交实验设计突变体组合提高甲基对硫磷水解酶OPHC2对乙基对硫磷的降解能力

分别自假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes C2-1)和假单胞菌（Pseudomonas sp. 1-7）中克隆得到甲基对硫磷水解酶基因ophc2和ophc3,其编码甲基对硫磷水解酶OPHC2和OPHC3的氨基酸序列相似性达98.5%,仅5个氨基酸残基不同,但酶学性质差异很大,特别是对不同底物降解特性有很大差异。OPHC2对甲基对硫磷的催化效率是OPHC3的2.75倍,对乙基对硫磷的催化效率仅为OPHC3的12.9%。为了提高OPHC2对乙基对硫磷的降解活性,以OPHC3的序列为依据,针对5个不同的氨基酸设计正交实验,对OPHC2进行组合突变,最终获得了一个突变体P165S/A169V,对乙基对硫磷的催化效率是OPHC2的1.19倍,对甲基对硫磷的催化效率是OPHC2的1.36倍。     

用于检测蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的酶抑制分光光度法研究进展

对利用酶抑制分光光度法检测蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒的原理、最主要影响因子和存在的问题进行了探讨 ,重点分析了酶抑制分光光度法出现假阳性、负抑制率以及该方法不适用于检测韭菜等蔬菜中的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的原因     

液液萃取-固相萃取气相色谱法测定火腿中有机磷农药残留量

[目的]建立火腿中多种有机磷农药残留量同时测定的方法。[方法]火腿中有机磷农药经乙腈提取后,用乙腈-正己烷液液萃取除去脂类和色素,再经石墨碳黑固相萃取小柱净化,气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD)测定。[结果]16种有机磷农药在DB-17、DB-1色谱柱上均获得良好分离,在0.05~1.00μg/m L范围内,农药残留量色谱分析的线性关系良好,满足定量分析要求,加标水平为0.08和0.20 mg/kg时,农药的平均回收率在71.96%~117.21%,变异系数为1.73%~12.84%。方法的检出限为0.005 3~0.011 8 mg/kg。[结论]该方法具有前处理简单、净化效果好、方法准确、灵敏度高、杂质干扰少的特点,适合火腿中有机磷农药残留量的分析。     

反相高效液相色谱法测定有机氯及含氮杀虫剂在水体·土壤沉积物及鱼体中的残留

[目的]测定水体、土壤沉积物以及鱼体内有机氯及含氮杀虫剂残留物,为科学评估杀虫剂残留对巴基斯坦地区公共卫生、农业和环境的影响提供依据。[方法]以食用鱼南亚野鲮为材料,设计2组体重,采用高效液相色谱法分别测定水体、土壤沉积物以及南亚野鲮体内α-硫丹、DDE、甲基对硫磷、异丙隆、呋喃丹、阿特拉津等含量。[结果]土壤沉积物中DDE的含量达（2．340±0．025）μg／g,在250～750g的南亚野鲮体内的含量分别为（0．270±0．0006）μg／g,但在水体中未发现DDE残留;不同饲料中农药残留物90％为有机磷、呋喃丹以及有机氯杀虫剂,6％为杀菌剂,仅4％为除草剂,在250～750g以及800～1300g的南亚野鲮体内硫丹的含量分别达到（0．491±0．0006）μg／g和（3．050±0．0608）μg/g,异丙隆的含量分别达到（0．010±0．0003）μg／g和（0．014±0．0006）μg／g,且随体重上升,其脂肪含量增加,积累的农药残留物则越多;硫丹、甲基对硫磷、阿特拉津和呋喃丹的含量在水体达到最大残留限量水平0．001μg／g。[结论]通过生物积累和在自然界中的运输以及再沉积作用,有机氯及其他杀虫剂的使用给全球的环境造成了严重污染,因此,在巴基斯坦已经禁止使用DDT等有机氯农药。     

大棚黄瓜中有机磷农药残留调查

本文对大棚黄瓜中3种有机磷农药残留量进行了调查。结果表明黄瓜中有机磷农药残留量范围为敌敌畏未～1．584mg·kg－1、甲基对硫磷为未～0．133mg·kg－1，马拉硫磷未～0．0188mg·kg－1。大棚黄瓜中3种有机磷农药残留量的检出率和超标率为甲基对硫磷＞敌敌县＞马拉硫磷。     

用臭氧降解蔬菜中的残留农药

以HPLC和GC MS为检测手段 ,对臭氧降解大白菜中农药残留进行了研究。结果表明 ,用臭氧处理时间愈长 ,大白菜中农药愈易降解 ,处理 30min后 ,久效磷、甲基对硫磷、乐果及灭多威的降解率均超过 5 0 %。     

气相色谱法测定水产品中有机磷的残留量

建立了水产品中甲胺磷、乙酰甲胺磷、敌敌畏、乐果、对硫磷、甲基对硫磷、马拉硫磷7种有机磷农药残留量的测定方法.样品用正己烷配合乙腈均质提取,经凝胶柱净化后进行气相色谱(GC)分析,采用外标法定量.优化条件下该方法的定量限(S/N=10):甲胺磷为0.0083 mg.kg-1,敌敌畏为0.011 mg.kg-1,乙酰甲胺磷为0.020 mg.kg-1,乐果为0.039 mg.kg-1,甲基对硫磷为0.063 mg.kg-1,马拉硫磷为0.055 mg.kg-1,对硫磷为0.031 mg.kg-1.在加标水平为0.0667、0.333和1.67 mg.kg-1时,7个组分的回收率为74.4%-108%,相对标准偏差为2.06%-6.98%(n=6).