Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体效价与鸡攻毒保护相关性试验

取实验室试制的卵黄抗体,用磷酸盐缓冲液稀释成Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体琼扩效价分别为12、14和18,取不同效价卵黄抗体接种21和42日龄鸡,24 h后进行攻毒保护试验。结果表明,随着卵黄抗体效价的升高,抗体对鸡的攻毒保护率也随之升高,即抗体效价与攻毒保护率呈正相关。     

Ⅰ群禽腺病毒双价油乳剂灭活苗的研究

[目的]提高国内Ⅰ群禽腺病毒疫苗的防控能力,防止Ⅰ群禽腺病毒蔓延.[方法]优化Ⅰ群禽腺病毒的增殖条件,以Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAV-4)及血清8型(FAV-8)的抗原液制备油乳剂单价及双价灭活苗,比较甲醛及β-丙内酯(BPL)的灭活效果,并检验疫苗性状、监测免疫抗体水平及进行免疫攻毒试验和田间试验.[结果]疫苗灭活以1.00 mL/L终浓度的甲醛或0.500 mL/L终浓度的BPL为宜;3种疫苗均为白色状乳液,4 ℃下保存期均可达12个月,单价疫苗的最小免疫剂量为100 μL/羽,双价疫苗的最小免疫剂量为250 μL/羽;免疫抗体水平监测结果表明,免疫后第4周抗体水平达到峰值,且在免疫后第8周仍维持较高水平;免疫攻毒试验结果显示,3种疫苗的保护率均为100%,能完全抵抗病毒攻击;田间试验结果表明,在免疫初期3种疫苗抗体均达到预期免疫效果,免疫保护期在6个月以上,在生产中使用双价疫苗可以减少注射次数.[结论]FAV-4、FAV-8双价油乳剂灭活苗免疫效果好、保存期长、安全性好,为净化Ⅰ群禽腺病毒提供了技术支撑.     

中草药与卵黄抗体复合气雾剂体外抑制病毒试验

[目的]将不同配比的中草药与卵黄抗体复合气雾剂体外抑制病毒的能力进行比较,以确定中草药与卵黄抗体的最佳配比。[方法]试验样品为不同配比的中草药"禽喘康复散"与卵黄抗体复合气雾剂,配比分别为1:1.0、1:0.8、1:0.5、1:0.2,分别记为样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。采用病毒致细胞病变抑制试验和血凝抑制试验,测定样品抑制病毒的能力。[结果]结果表明,样品I对腺病毒7型(AdV7)的最小抑制浓度为1/640g/ml,作用弱于样品II,而对其他病毒的作用都最强。样品IV除对腺病毒3型(AdV3)的最小抑制浓度为1/640g/ml,对其余病毒的抑制作用在4种样品中最弱。体外抑制病毒试验表明中草药与卵黄抗体配比为1:1.0对各病毒的抑制效果最好。[结论]选用1:1.0配比的复合气雾剂最能有效防治呼吸道疾病。     

Ⅰ群禽腺病毒双价油乳剂灭活苗的研究

【目的】提高国内I群禽腺病毒疫苗的防控能力,防止I群禽腺病毒蔓延。【方法】优化I群禽腺病毒的增殖条件,以I群禽腺病毒血清4型（FAV-4）及血清8型（FAV-8）的抗原液制备油乳剂单价及双价灭活苗,比较甲醛及β-丙内酯（BPL）的灭活效果,并检验疫苗性状、监测免疫抗体水平及进行免疫攻毒试验和田间试验。【结果】疫苗灭活以1.00 mL/L终浓度的甲醛或0.500 mL/L终浓度的BPL为宜;3种疫苗均为白色状乳液,4°C下保存期均可达12个月,单价疫苗的最小免疫剂量为100 μL/羽,双价疫苗的最小免疫剂量为250 μL/羽;免疫抗体水平监测结果表明,免疫后第4周抗体水平达到峰值,且在免疫后第8周仍维持较高水平;免疫攻毒试验结果显示,3种疫苗的保护率均为100%,能完全抵抗病毒攻击;田间试验结果表明,在免疫初期3种疫苗抗体均达到预期免疫效果,免疫保护期在6个月以上,在生产中使用双价疫苗可以减少注射次数。【结论】FAV-4、FAV-8双价油乳剂灭活苗免疫效果好、保存期长、安全性好,为净化I群禽腺病毒提供了技术支撑。     

安卡拉病的防治措施

<正>2015~2016年,湖北、河南、安徽、山东、河北等省份暴发了鸡安卡拉病,主要特征为鸡肝炎和心包积液。安卡拉病也叫心包积液—肝炎综合征,病原是腺病毒1群4型毒株,该病原具有高度的宿主特异性,多危害3~6周龄肉鸡。禽腺病毒为无囊膜的双链DNA病毒,分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚群,禽腺病毒Ⅰ群有12个血清型,且有共同的群抗原,不同的血清型或相同血清型的不同毒株,其致病能力也不同,1群4型     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)抗体产生期和免疫持续期试验

以实验室制备的3批制品各经颈部皮下接种7日龄和21日龄SPF鸡,7日龄鸡于免疫后7、11、14、21、28 d及1、2和3个月;21日龄鸡于免疫后7、11、14、21、28 d及1、2、3、4和5个月时采血,分离血清,分别测定免疫鸡血清中鸡新城疫病毒、禽流感(H9亚型)病毒和禽腺病毒抗体效价。试验结果表明,实验室3批制品免疫7日龄SPF鸡后,免疫后11 d鸡新城疫病毒、禽流感(H9亚型)产生抗体,21～28 d时3种病毒抗体均达到抗体高峰,高峰期持续至免疫后1个月,免疫后3个月下降到有效保护标准以下。三联疫苗免疫21日龄SPF鸡,免疫后11 d鸡新城疫病毒、禽流感(H9亚型)产生抗体,针对3种病毒的抗体在免疫后21～28 d达到抗体高峰,高峰期持续至免疫后2个月,免疫后3个月开始下降,免疫后5个月下降到有效保护标准以下。因此,鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)免疫2周龄的鸡免疫持续期为2个月,免疫2周龄的鸡免疫持续期为4个月。     

鸡新城疫病毒、禽流感病毒（H9亚型）病毒、禽腺病毒三联灭活疫苗抗体免疫持续期研究

为了确定鸡新城疫病毒、禽流感病毒(H9亚型)、禽腺病毒三联灭活疫苗抗体免疫持续期,从而指导鸡病防控,试验将哈药集团生物疫苗有限公司试制的三批鸡新城疫病毒、禽流感病毒(H9亚型)、禽腺病毒三联灭活疫苗经颈部皮下分别接种7日龄和21日龄SPF鸡,7日龄鸡于免疫后第7 d、11 d、14 d、21 d、28 d、1个月、2个月和3个月采血;21日龄鸡于免疫后第7 d、11 d、14 d、21 d、28 d、1个月、2个月、3个月、4个月和5个月采血,分离血清,分别测定免疫鸡血清中鸡新城疫病毒、禽流感病毒(H9亚型)和禽腺病毒的抗体效价。结果显示:三批疫苗免疫7日龄SPF鸡后,免疫后11 d后鸡新城疫病毒、禽流感病毒(H9亚型)和禽腺病毒产生抗体,21～28 d三种病毒抗体均达到抗体高峰,高峰期持续至免疫后1个月,免疫后3个月下降到有效保护标准以下。三批疫苗免疫21日龄SPF鸡后,免疫后11 d鸡新城疫病毒、禽流感病毒(H9亚型)和禽腺病毒产生抗体,三种病毒的抗体在免疫后21～28 d达到抗体高峰,高峰期持续至免疫后2个月,免疫后3个月开始下降,免疫后5个月下降到有效保护标准以下。说明鸡新城疫病毒、禽流感病毒(H9亚型)、禽腺病毒三联灭活疫苗免疫2周龄以下的鸡免疫持续期为2个月,免疫2周龄以上的鸡免疫持续期为4个月。     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗(La Sota株+TJ株+HY株)抗体效价与鸡攻毒保护相关性试验

实验室制备的三联灭活疫苗分别以不同免疫剂量免疫接种21日龄SPF鸡,免疫后21日,分别采血测定血清抗体效价,并根据抗体效价重新分组,进行攻毒保护试验。试验结果表明,三联灭活疫苗各组分抗体效价与攻毒保护均呈正相关,疫苗各组分抗体效价可代替动物效检试验。根据试验结果及我国兽药标准,将三联灭活疫苗血清标准确定为:新城疫病毒HI抗体效价的几何平均值应≥1:16;禽流感(H9亚型)病毒HI抗体效价的几何平均值应≥1:128;Ⅰ群4型禽腺病毒抗体效价应≥1:1。     

雏鸭病毒性肝炎病毒山东株的分离鉴定

自山东地区疑似雏鸭病毒性肝炎的发病或病死肉雏鸭的肝脏中分离到3株病毒,经病毒分离、血清中和试验、单抗Dot-ELISA鉴定、氯仿敏感试验以及动物回归试验,确诊该地区雏鸭所患为Ⅰ型鸭病毒性肝炎。高免卵黄抗体的被动保护试验结果表明,高免卵黄抗体可有效控制Ⅰ型雏鸭病毒性肝炎的发生。     

鸡源禽腺病毒的LMH细胞传代及细胞传代毒株对SPF鸡的致病性

为建立禽腺病毒4型的禽源细胞感染模型,并考察细胞培养毒株对动物的致病性,将实验室2014-2017年间分离的5株血清4型禽腺病毒接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH)并盲传,选取各病毒的LMH细胞培养物,按一定剂量经腿部肌肉注射接种4周龄SPF鸡;记录试验动物的发病情况,剖检采集发病或死亡鸡的脏器并制作病理切片,观察并分析病毒细胞培养物感染SPF鸡的组织病理变化。结果发现:5株血清4型禽腺病毒在LMH细胞上盲传至第4代时开始出现I群禽腺病毒所致的特异性细胞病变,提取培养物中病毒核酸并进行PCR鉴定,均能扩增出大小约564bp的特异性扩增片段,表明病毒能在LMH细胞上稳定增殖。选取各病毒第10代细胞培养物进行SPF鸡回归试验,发现细胞培养上清接种4周龄SPF鸡后第3天开始,有部分鸡开始精神沉郁,食欲消退、卧地不起瘫痪并迅速死亡,病理剖检及病理组织切片结果显示HB-1、HB-2、HB-3和SD-1毒株保持对4周龄SPF鸡的致病性,病死鸡中能观察到典型的组织病理学变化,而对照组不出现任何临床症状及病理变化。以上结果表明,LMH细胞可用于禽腺病毒增殖传代,是开展禽腺病毒分子致病机制研究的理想细胞模型。     

禽腺病毒4型的分离与初步鉴定

从疑似心包积液综合征的病死鸡组织中分离获得1株病毒,该病毒无血凝活性,提取其核酸经禽流感病毒、新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽脑脊髓炎病毒、禽白血病病毒、传染性法氏囊病毒、禽偏肺病毒和包涵体肝炎病毒特异引物扩增均为阴性,而经禽腺病毒4型特异性引物检测为阳性,则将其暂命名为禽腺病毒4型FJ1674株。将其扩增产物回收后克隆,经序列测定分析表明该株病毒与国内外禽腺病毒4型毒株的同源率为99.4%~100%;经遗传进化分析表明,其与禽腺病毒4型关系密切,共处同一分支。     

GPV·MDPV和FAdV-4三重PCR检测方法的建立

[目的]为快速地鉴别鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽腺病毒血清4型(FAdV-4)3种病毒,建立一种特异强、敏感高、重复性好的三重PCR检测方法.[方法]根据Genbank登录的MDPV、GPV和FAdV-4的基因序列,设计3对特异性引物,以提取的核酸为模板,进行PCR特异性、敏感性和重复性试验.[结果]采用所建立的方法能够扩增出GPV、MDPV和FAdV-4特异性片段,且不能检出鸭黄病毒(DFV)、鸭I型肝炎病毒(DVH-Ⅰ)和禽呼肠孤病毒(ARV);GPV、MDPV和FAdV-4核酸模板的最低检测量分别为20、2、2 pg;对8份阳性临床病料进行检测,可见MDPV、GPV和FAdV-4的检出率均为100％.[结论]建立的三重PCR检测方法能够对MDPV、GPV和FAdV-4这3种病毒进行快速、准确的诊断.     

Ⅰ群禽腺病毒的诊断与防治

Ⅰ群禽腺病毒感染导致家禽心包积水综合征、包涵体肝炎等疾病,近几年主要流行毒株是FAdV-4、FAdV-8b及FAdV-11血清型。防控方案除了加强饲养管理,提高生物安全措施外,可制备腺病毒灭活疫苗进行预防,也可注射使用腺病毒抗体进行治疗。     

禽腺病毒Ⅰ群4型疫苗研究态势分析——专利布局的视角

禽腺病毒是家禽养殖的一项重大疾病,对禽腺病毒Ⅰ群4型系列疫苗的研发,将极大提升科技供给质量,对产业发展和保障畜禽产品安全具有重要意义。本文依托江苏省专利信息检索分云平台、中国兽药信息网国家兽药基础数据库等权威数据平台,运用专利布局的理念和方法,对主题技术专利授权和产品开发情况进行检索分析。研究得出主要竞争主体、总体研发进度、当前研究空白和后期可开发、具备较高开发价值领域,为禽腺病毒Ⅰ群4型技术研发和产品开发提供精准依据。     

蛋鸡Ⅰ亚群禽腺病毒感染的诊治

腺病毒是一种在全世界广泛存在侵袭家禽和野禽的一种病原体,病原主要分为Ⅰ群禽腺病毒、Ⅱ群禽腺病毒及Ⅲ群禽腺病毒。腺病毒能在健康家禽体内复制,但显现出的症状较为轻微,且通常没有明显的临床症状,但当家禽发生并发感染或其他因素刺激时,腺病毒会作为一种条件病原引起患病。本文以家禽中的蛋鸡为例,论述腺病毒中的Ⅰ群禽腺病毒感染的诊治措施。     

鸡法氏囊和腺病毒精制卵黄抗体制备与应用

利用当地分离的禽法氏囊和腺病毒流行株制备二联油乳剂灭活疫苗后制备高免精制卵黄抗体,通过多次加强免疫,以PEG6000沉淀提取和微滤孔滤膜过滤获得精制卵黄抗体,并对卵黄抗体的质量进行检验和临床试验,结果表明,卵黄抗体的预防和治愈效果较好。     

鸡心包积液-肝炎综合征卵黄抗体对机体排毒的影响

为研究应用卵黄抗体防控鸡心包积液-肝炎综合征(HHS)的可行性及其对病毒分布和机体排毒的影响,采用卵黄抗体肌肉注射28日龄SPF鸡,同时设置对照组(生理盐水),2 d后用血清4型禽腺病毒分离株(HuBei 201801)进行人工感染,采用PCR方法检测病毒的分布及排毒情况;对临床发病肉杂鸡注射卵黄抗体,检验其保护效果。结果显示,人工感染SPF鸡14 d后,试验组存活率为93.33%,而对照组存活率为40.00%。试验组只有肝脏PCR检测呈阳性,其他器官均呈阴性;对照组肝脏PCR阳性率为100%,心脏、肾脏、脾脏等器官阳性率为60%。试验组未检出口腔排毒,泄殖腔排毒7dpi时阳性率为20.0%,其他时间未检出;对照组口腔排毒7dpi时阳性率为50.0%,其他时间未检出,在3、5、7dpi时均检出泄殖腔排毒,7dpi时排毒率达66.7%。临床发病肉杂鸡注射卵黄抗体24 h后死亡数明显减少,72 h后很少死亡。由此可见,卵黄抗体可以有效降低感染鸡的排毒率,阻止该病原的传播,为鸡群提供有效保护。应用卵黄抗体是防控鸡心包积液-肝炎综合征的一项有效措施。     

血管瘤型禽白血病的实验室诊断

采用血清学方法和分子生物学技术对某蛋鸡场感染鸡进行实验室诊断,采用禽白血病A或B亚群抗体检测试剂盒对该鸡场的血清样本进行检测,抗体阳性率达到70%(7/10);针对ALV群特异性抗原P27基因进行PCR扩增,血液、肝脏病料样本中核酸的检出率分别为66.7%(4/6)、75%(3/4);取ALV 囊膜糖蛋白gp85 基因的扩增产物进行酶切分析,扩增的目的片断中存在BglⅡ和 SspⅠ酶切位点,BamHⅠ不能切割PCR 产物.试验结果证实本次疫病是由ALV-A 亚群病毒引起的血管瘤型白血病.     

70例免疫性血小板减少症的病原学及治疗分析

目的分析各种致病原对免疫性血小板减少症（ITP）发病的影响。方法对2008年7月至2013年7月在我院儿科收治的70例ITP患儿,分别用被动凝聚法检测肺炎支原体（MP）抗体;免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒抗原,腺病毒抗原,流感病毒A、B型,副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型;酶联免疫吸附法（ELISA法）检测EB病毒抗体4项（包括EB病毒早期抗原IgM抗体、EB病毒衣壳抗原IgM抗体、EB病毒衣壳抗原IgG抗体、EB病毒核心抗原IgG抗体）,优生优育抗体[包括弓形虫IgM抗体、风疹病毒IgM抗体、巨细胞病毒（CMV）IgM抗体、单纯疱疹病毒Ⅰ型抗体、单纯病毒Ⅱ型抗体];根据其结果阳性与否给予相应治疗,对发病诱因及转归进行回顾性分析。结果本组CMV-IgM阳性、CMV-DNA阳性19例（27.1%）,MP-Ab阳性14例（20.0%）,呼吸道合胞病毒抗原阳性13例（18.6%）,EA-IgM阳性、VCA-IgM阳性8例（11.4%）,腺病毒抗原阳性6例（8.6%）,副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型阳性6例（8.6%）,流感病毒A、B型阳性4例（5.7%）。治愈42例（60.0%）,良效19例（27.1%）,进步8例（11.4%）,无效1例（1.5%）。加用更昔洛韦治疗的CMV感染者血小板上升比不加用者更为显著,治疗1、2周后的血小板计数恢复更快（P〈0.01）。结论临床医生在治疗ITP时应尽量完善病原学检查,若为阳性应加以相应药物;通过针对病原进行有效合理的治疗,可以缩短病程,减轻患儿家庭经济负担,值得临床推广应用。     

新型鸭呼肠孤病毒卵黄抗体被动免疫持续期试验

为了确定鸭新型鸭呼肠孤病毒卵黄抗体被动免疫持续时间,试验取3批哈药集团生物疫苗有限公司试制的新型鸭呼肠孤病毒卵黄抗体,按1.0 mL·只^-1颈部皮下接种1日龄易感雏鸭,分别在注射抗体后1、3、5、7 d攻毒(抗体试验组),分析攻毒保护情况,剖检试验雏鸭,观察病理变化,同时设攻毒对照组(不接种卵黄抗体但攻毒)和健康对照组(不接种卵黄抗体也不攻毒)。结果显示:雏鸭接种卵黄抗体后1~5 d,卵黄抗体对雏鸭的攻毒保护率均在90%以上;注射后第7天的攻毒保护率为53.3%;攻毒对照组雏鸭均90%~100%发病。剖检发病雏鸭,可见肝脏和脾脏均呈典型的坏死及出血性病理变化;抗体试验组存活雏鸭剖检无病理变化;健康对照组雏鸭均100%健活,剖检无病理变化。说明注射卵黄抗体5 d内能对机体产生良好的保护作用,而7 d后保护作用大幅减弱,确定新型鸭呼肠孤病毒卵黄抗体的被动免疫持续期为5 d。