水稻簇矮病毒：植物呼肠孤病毒属的一个新成员

水稻簇矮病毒（ＲＢＳＶ）是由黑尾叶蝉（Ｎｅｐｈｏｔｅｔｉｘｃｉｎｃｔｉｃｅｐｓ）和二点黑尾叶蝉（Ｎ．ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）传播的持久性病毒，但不经卵传递；病害表现有奇特的多蘖症或节枝症，且其病株汁液与水稻矮缩病毒（ＲＤＶ）抗血清不起免疫反应．采用差速离心和蔗糖密度梯度离心，可获得ＲＢＳＶ提纯制剂，提纯制剂经紫外扫描，呈典型的核蛋白吸收曲线，Ａ２６０／２８０＝１．６４．在电镜下观察提纯病毒，可见大量比较均一的球状粒体，直径为６０．０ｎｍ．病毒粒体有双层衣壳，蛋白亚基清晰可辨．通过免疫扩散和免疫电镜试验，病毒粒体与ＲＢＳＶ抗血清有明显的血清学反应，而这种抗血清与ＲＤＶ、水稻瘤矮病毒（ＲＧＤＶ）不起反应．提纯ＲＢＳＶ制剂以苯酚－甲基苯酚－ＳＤＳ方法提取核酸．将其注射到昆虫介体内，具有侵染性．核酸制品有典型的核酸紫外吸收曲线，Ａ２６０／２８０＝２．０２．根据核酸在不同离子强度下对ＲＮａｓｅ的稳定性等的测定，表明其核酸属双链ＲＮＡ．根据紫外吸收测定，ＲＮＡ在ＲＢＳＶ粒体中的含量为１７．５％．用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，其ＲＮＡ的总分子质量为１６．６６×１０６．各组分相对分子质量分别为２．７０×１０６、２．３０×１０６、１?     

侵染姜的烟草花叶病毒的鉴定

从莱芜市莱城区大田表现严重花叶的姜上分离到一种病毒,接种到１３ 科４３ 种鉴别寄主上,能侵染５ 科２５ 种植物。该病毒分离物的钝化温度为９５ ～９８ ℃,稀释限点为１０ － ７ ～１０ － ８ ,体外存活期为１２８ｄ 以上。提纯病毒呈典型的核蛋白吸收,最大吸收峰为２５８ｎｍ ,最小吸收峰在２４３ｎｍ , Ａ２６０／ Ａ２８０ ＝ １ ．３２ 。病毒外壳蛋白分子量为１７ ．３ Ｋ Ｄ,杆状粒体长度为３００ｎｍ ,该分离物与烟草花叶病毒的抗血清有明显的阳性反应。根据这些特性,该病毒分离物属于烟草花叶病毒属的烟草花叶病毒。     

山东省侵染四瓜的西瓜花叶病毒（WMV—2）和黄瓜花叶病毒（CM…

从采自平度、临沂两地的西瓜病叶中得到两个病毒分离物Ｗ－ＰＤ和Ｗ－ＬＹ。Ｗ－ＰＤ可侵染３料８种植物，可由桃蚜以非持久性方式传播。钝化温度６５℃，稀释限点１０＾－４－１０＾－５，体外存活期２０－２５ｄ。提纯病毒呈典型的核蛋白吸收，最大吸收峰为２６０ｎｍ，最小吸收峰２４６ｎｍ。Ａ２６０／Ａ２８０＝１．２４。病毒外壳蛋白分子量为３３．３４ＫＤ。Ｗ－ＰＤ的粒子线状，长度为６００－７５０ｎｍ。在病组织超薄切片     

大蒜茎尖组培苗的检测

从市售阿城紫皮蒜生长的叶片经ＰＥＣ沉淀差速离心提纯,获得复合病毒制剂,得率为４．９０ｍｍ（１００ｇ）－１叶。电镜观察病毒粒体为长度５５０～８００ｎｍ的线状物,经抗血清测定主要为洋葱黄矮病毒（ＯＹＤＶ）和大蒜潜隐病毒（ＧＬＶ）。用复合病毒制剂免疫制备的抗血清效价为１０２４～２０４８。ＯＹＤＶ抗血清检测茎尖脱毒组培苗,脱毒率为５０％左右,用ＧＬＶ抗血清检测,脱毒率为９５％～９７％,复合病毒抗血清检测结果与ＯＹＤＶ相同。证明复合病毒抗血清可用于组培苗的检测。组培脱毒大蒜在田间种植１年后发病率为５０％,３年后达８０％。茎尖组培脱毒率不高。需用抗血清逐株检测挑选,淘汰病苗,才能获得健康无毒的大蒜群体。     

葡萄扇叶病毒的ELISA检测技术

本文是关于葡萄扇叶病毒ＥＬＩＳＡ检测技术的报告。采用Ｌ．ｐｉｎｋ的方法提纯病毒，制备了兔抗血清和小鼠腹水抗体，效价分别达１：５１２００和１：５×１０￣６，特异性较强。经间接双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＧＦＶ提纯病毒最低浓度为３ｎｇ／ｍｌ。对葡萄的根、幼叶和嫩茎抽提液检测结果一致，稀释倍数１：２０。     

美人蕉黄瓜花叶病毒和菜豆黄花叶病毒研究

本文是对美人蕉上表现花叶，褪绿条纹和坏死线等症状的两个分离物进行的系统研究，分离物Ｃｌ系统侵染心叶烟，普通烟，蔓陀罗产生明显花叶症，在蚕豆，昆诺上产生局部枯斑，其ＴＩＰ为６０～６５℃，ＤＥＰ为１０＾－３～１０＾－４，ＬＩＶ为５～５ｄ，提纯病毒Ａ２６０／Ａ２８０＝１．１９，病毒粒子球形，直径３０ｎｍ，它与黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）抗血清呈阳性反应，为此，确证Ｃｌ病毒粒子球形，直径３０ｎｍ。它与黄瓜花叶病     

山东省侵染西瓜的西瓜花叶病毒（WMV－2）和黄瓜花叶病毒（CMV）的研究

从采自平度、临沂两地的西瓜病叶中得到两个病毒分离物Ｗ—ＰＤ和Ｗ—ＬＹ。Ｗ—ＰＤ可侵染３科８种植物，可由桃蚜以非持久性方式传播。钝化温度６５℃，稀释限点１０￣（－４）～１０￣（－５），体外存活期２０～２５ｄ。提纯病毒呈典型的核蛋白吸收，最大吸收峰为２６０ｎｍ，最小吸收峰为２４６ｎｍ。Ａ２６０／Ａ２８０＝１．２４。病毒外壳蛋白分子量为３３．３４ＫＤ。Ｗ—ＰＤ的粒子线状，长度为６００～７５０ｎｍ。在病组织超薄切片中可以看到风轮状和环状内含体。Ｗ—ＰＤ与ＷＭＶ—２的抗血清有明显的沉淀反应。以上结果表明，Ｗ—ＰＤ为ＷＭＶ—２的一个分离物。Ｗ—ＬＹ可侵染５科１３种植物。钝化温度７０℃，稀释限点１０￣（－３）～１０￣（－４），体外存活期３～５ｄ，可由桃蚜以非持久方式传播，与ＣＭＶ的抗血清有明显的沉淀反应。Ｗ—ＬＹ应为ＣＭＶ的一个分离物。ＷＭＶ—２是我省西瓜病毒病的主要毒原，其分出率为７５％，ＣＭＶ的分出率为１６．３５％。     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在FLISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射、肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６）；在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或Ｚμｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密度值之比大于或等于３作为判断待测样本为阳性反应的标准，结果表明：间接ＥＬＩＳＡ试验的灵敏度比生物检测的灵敏度要高３２～１６０倍。用间接ＥＬＩＳＡ检测矮牵牛的病毒样本３０份，ＣＭＶ占７０％。     

草莓伪温和黄边病毒抗血清制备及血清学检测技术研究

将提纯的草莓伪温和黄边病毒（ＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｐｓｅｕｄｏｍｉｌｄｙｅｌｌｏｗｅｄｇｅｖｉｒｕｓＳＰＭＹＥＶ）作抗原免疫家兔，获得效价较高的抗血清，经ＳＤＳ－对流免疫电泳测其效价为１：１２８．四点疫吸附固定法检测ＳＰＭＹＥＶ效果甚理想，可检测到微量病素，提纯病毒浓度低至０．０５μｇ／ｍｌ仍有效果．酶联免疫吸附测定法检出灵敏度也相当高，当病毒浓度为０．１μｇ／ｍｌ时及病叶汁液稀释至１０２４倍时，仍呈阳性反应．免疫电镜技术检视，ＳＰＭＹＥＶ抗血清能清晰地”捕获”同源病毒，并且有装饰作用，抗血清以稀释为１：５００时“捕获”病毒粒子最多．     

牛乳中超氧化物歧化酶(SOD)的提纯与鉴定

新鲜牛乳经超速离心,氯仿乙醇处理,丙酮沉淀、透析、ＤＥＡＥ纤维素柱层析等步骤使其中Ｃｕ－ＺｎＳＯＤ得到了纯化,提纯后酶的比活为１４９．５Ｖ／ｍｇ。该酶对Ｈ２Ｏ２敏感,并且在２７２ｎｍ和６７５ｎｍ处各有一吸收峰,证明被纯化的酶是Ｃｕ－ＺｎＳＯＤ。     

侵染观赏百合的黄瓜花叶病毒提纯和抗血清制备

采用PEG沉淀并结合差速离心技术,获得了精提纯的侵染观赏百合的黄瓜花叶病毒(CMV-Li).提纯病毒具有典型的核蛋白吸收峰曲线.OD260 nm/OD280 nm=1.236.将提纯病毒免疫兔子制备得CMV-Li抗血清.经微量沉淀法和间接ELISA法测定,其效价分别为1∶1024、1∶4096.两种方法相比,间接ELISA具有灵敏度高、特异反应强等优点.     

侵染观赏百合的黄瓜花叶病毒血清学检测方法研究

采用摩擦接种和PEG沉淀法对侵染观赏百合的黄瓜花叶病毒(CMV)进行了提纯,提纯病毒具有典型的核蛋白吸收峰曲线,D260 nm/D280 nm=1.236;利用提纯的CMV免疫大白兔制备抗血清,经微量沉淀法测定,其效价为1∶1024;用硫酸铵沉淀法提纯IgG,制备了辣根过氧化物酶标抗体,利用自制抗血清对DAS-ELISA、间接-ELISA和DIBA-ELISA检测侵染观赏百合的CMV灵敏度和检测范围进行了比较试验,结果表明DAS-ELISA检测的灵敏度较高,是间接-ELISA和DIBA-ELISA灵敏度的4倍;间接-ELISA和DIBA-ELISA的检测范围比DSA-ELISA宽.对21个观赏百合样品的CMV检测结果表明,DIBA-ELISA的检出率为66.67%,间接-ELISA的检出率为38.09%,二者的检出率分别比DAS-ELISA的检出率(23.81%)提高了42.86%和14.28%.     

水稻条纹叶枯病的研究 Ⅲ.病害的病原性质

水稻条纹叶枯病系由水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)所致.病毒由灰飞虱(Laodelphax striatellus)以持久性方式并经卵传播,介体灰飞虱有明显的间歇传毒现象.提纯病毒制剂具有典型的核蛋白紫外吸收曲线,最大吸收260nm,最小吸收245nm,A260/280=1.54.病毒粒体长丝状,粒体直径约8nm,与日本的水稻条纹病毒抗血清呈阳性反应.将提纯病毒制剂免疫家兔制备抗血清,其效价可达1∶2048.采用该抗血清,通过免疫扩散和ELISA间接法反应,可很灵敏地检测病叶中的RSV.     

大蒜病毒病原的鉴定及组培脱毒研究

系统鉴定的结果表明,为害大蒜的病毒有GLV,GMV和TMV。GMV引起大蒜花叶及条纹花叶,而GLV在大蒜上表现潜隐症状。GLV的紫外吸收峰最低在245.2nm,最高在275.7nm,其A260/280为1.36。GLV和GMV粒子大小分别为548～700×13nm和750～773×13nm。德国GLV抗血清仅与GLV有阳性反应。采用0.10～0.25mm生长点能完全脱除病毒,而用0.30～0.70mm有部分脱毒效果。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒抗血清制备及应用

用葫芦[Lagenaria siceraria（Molina）Stand．]作为黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）的繁殖寄主,通过差速离心和PEG二次沉淀法进行病毒提纯,用提纯病毒液免疫新西兰兔制备CGMMV抗血清。制备的CGMMV抗血清经间接ELISA法测定效价为1：5120;利用制备的抗血清检测田间样品,证明其可以用于CGMMV的血清学及免疫捕获RT—PCR检测。研究结果对今后开展葫芦科作物CGMMV检测,及时发现疫情以便采取防控措施,避免病毒扩散为害,确保葫芦科作物的安全生产具有重要意义。     

侵染马铃薯的烟草坏死病毒的鉴定、提纯及抗血清制备

自马铃著植株上分离得到了烟草坏死病毒(TNV)。在测试的13科53种植物中,能侵染8科34种,但人工接种仅在接种叶上引起局部侵染,未发现其系统侵染寄主。该病毒的钝化温度为78～80℃,稀释限点10~(-5)～10~(-6),体外保毒期27～28天。提纯病毒经紫外吸收测定,最高吸收峰为260 nm,最低吸收峰为245 nm,提纯得毒率为7.8 mg/kg接种叶。病毒粒体球状,直径约28 nm。经免疫琼脂双扩散测定,该病毒与TNV标准抗血清产生明显的反应沉淀线。人工接种该病毒不能侵染马铃薯植株的地上部分。块茎病斑为ABC病的C型症状。感病植株所结块茎仅部分带毒。受侵染块茎下一年可产生病苗。     

玉米矮花叶病毒山东和北京两分离物的比较鉴定

引起北京和山东玉米矮花叶病的北京分离物(MDM-BJ)和山东分离物(MDM-SD)主要侵染禾本科植物，二者的寄主范围和症状反应又有一定的差异。提纯MDM-BJ的最大吸收峰在260nm，最小吸收峰在240nm，OD260／CD280=1．18。提纯病毒产量为1．5mg／100g鲜病叶。病毒粒体弯曲线状，平均长度为710nm。在感病组织内可以观察到风轮状、卷旋状和片层凝集状内含体。MDM-BJ和MDM--SD都能与玉米矮花叶病毒(MDMV)的抗血清反应。上述结果表明，北京和山东的两个分离物都是玉米矮花叶病毒(MD-MV)。引起我国玉米矮花叶病的毒原是不同于国外毒原的新株系。     

昆明香石竹斑驳病毒鉴定

 从表现为叶斑驳、花碎色症状的香石竹病株上获得一病毒分离物,经电镜负染观察,该病毒为直径是28～33 nm的球状粒子,病毒提取液经紫外光测定呈典型核蛋白吸收曲线,OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.70;血清学反应与CarMV抗血清出现明显的沉淀线。由此,可基本认为该病毒分离物为香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus, CarMV)。