免疫球蛋白G(IgG)三种提取方法比较

比较3种提取猪血清中免疫球蛋白IgG方法的提取效果。分别用辛酸沉淀法,硫酸铵分步沉淀法,辛酸-硫酸铵沉淀法粗提猪血清免疫球蛋白IgG,并通过SDS-PAGE凝胶电泳、AlphaEaseFC凝胶成像分析软件、Bradford蛋白浓度测定法等比较3种方法的提取纯度和得率,同时比较3种方法的时效性和经济性。辛酸沉淀法提取IgG所用时间最短,只需1h,得率较高但纯度不高;硫酸铵盐析法提取的IgG纯度较高、得率也高,但时间较长;辛酸-硫酸铵分步沉淀法所得IgG纯度很高,但所用时间较长,得率也较低。3种提取方法各有特点,可根据不同的实验条件和目的选择不同的提取方法。     

几种提纯鸭病毒性肝炎血清免疫球蛋白G方法的比较

用辛酸-硫酸铵法、硫酸铵法、硫酸钠法和聚乙二醇沉淀法分别提纯鸭抗DHV血清中免疫球蛋白G(IgG),经SDS-PAGE电泳、蛋白含量及生物活性测定分析表明,先用辛酸澄清,再用50%饱和硫酸铵粗提,最后用35%饱和硫酸铵重复两次提取的IgG纯度和生物活性均较其它方法高。此法操作简便,便于推广应用。     

卵黄抗体五种提取工艺比较及初步应用

为了得到较优的卵黄抗体提取工艺,试验改良了辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法与聚乙二醇沉淀法5种提取方法。IPGT诱导表达重组猪致病性大肠杆菌(Escherichia coli)毒素STxB蛋白(rSTxB),与佐剂71VG乳化制备免疫原免疫蛋鸡,利用改良的聚乙二醇沉淀法提取高免卵黄抗体,采用SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,通过Western blot检测卵黄抗体和血清抗体效价。结果表明,辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法、聚乙二醇沉淀法提取效率分别为96.00、81.99、155.50、65.34、46.00 mg/mL,其中聚乙二醇沉淀法的提取纯度最高。重组STxB蛋白分子量大小约25 kDa,血清中抗体效价最高达到64 000倍,卵黄抗体最高稀释倍数为16 000倍。综合评估,聚乙二醇的提取法相对较优,且提取的卵黄抗体具有良好的免疫活性。     

猪肺血管紧张素转化酶的提取与纯化

[目的]研究猪肺血管紧张素转化酶（ACE）的提纯方法,为其生产利用提供技术支撑.[方法]以新鲜猪肺组织为试验材料,匀浆离心后经硫酸铵分级沉淀透析,然后采用离子交换-超滤离心联合法对猪肺ACE粗提物进行纯化,测定ACE的分子量、酶活力、纯化倍数及酶活力回收率.[结果]通过离子交换-超滤离心联合法分离纯化猪肺ACE,可得到相对分子量182 kDa、酶比活力1.2476 U/mg的电泳级纯品ACE,其纯化倍数达357.31倍,酶活力回收率达12.28％.ACE催化反应动力学米氏常数（Km）为0.849 mmol/L,最大反应速率（Vmax）为9.775 nmol/min.[结论]采用离子交换-超滤离心联合法纯化猪肺ACE能够极大缩短分离与纯化时间,且获得较高的纯化倍数和酶活力回收率,是猪肺ACE的高效纯化方法.     

鸡血清IgG纯化方法研究

[目的]为了获得高纯度鸡免疫球蛋白(Ig),并保持其生物学活性。[方法]比较几种纯化鸡血清免疫球蛋白(IgG)的方法。用饱和硫酸铵(NH4)2SO4沉淀法或乙醇沉淀法提取鸡血清IgG,经透析除盐,将初提物过sephadexG-200柱进一步分离IgG,经免疫电泳和SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定。[结果]结果表明:在该试验条件下,(NH4)2SO4盐析和乙醇沉淀法获得的鸡IgG经sephadexG200柱分离获得高纯度的鸡IgG。[结论]该研究为找到较好的纯化鸡血清IgG方法提供了试验依据。     

低温β-半乳糖苷酶的分离纯化

[目的]分离纯化低温β-半乳糖苷酶。[方法]采用硫酸铵沉淀、凝胶色谱和离子交换色谱对低温菌株Rahnella aquatilis sp.14-1在摇瓶条件下的所产低温β-半乳糖苷酶进行了纯化,并对提纯的酶进行了酶学性质的研究。[结果]摇瓶发酵液经过超声波破碎细胞得到粗酶液体,用硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-25凝胶层析和DEAE-cellulose离子交换色谱分离纯化得到低温β-半乳糖苷酶,用SDSPAGE检测显示电泳单一区带,纯化的酶分子量为60 kD。[结论]研究可为低温β-半乳糖苷酶的开发应用提供参考依据。     

黑曲霉产β-甘露聚糖酶的纯化及酶学性质研究

［目的］分离纯化黑曲霉固态发酵产生的β-甘露聚糖酶,研究β-甘露聚糖酶酶学性质。［方法］黑曲霉经固态发酵制备粗酶液,分别采用硫酸铵分段沉淀法、丙酮沉淀法和Sephadex凝胶层析法对β-甘露聚糖酶进行分离纯化,用PAGE检验其纯度。同时测定纯化后的β-甘露聚糖酶酶学性质。［结果］β-甘露聚糖酶经40%～90%饱和度硫酸铵沉淀法纯化后比活力可提高到1 180.9 U/mg 经1.0 ∶1.0～1.6∶1.0（V/V）丙酮沉淀法纯化后的比活力可提高到1 847.0 U/mg;最后经凝胶层析法纯化后的比活力可提高到7 950.4 U/mg,纯化倍数为8.67,在PAGE凝胶电泳图谱上得到单一条带,即纯化后的β-甘露聚糖酶。［结论］纯化后β甘露聚糖酶的酶学性质为：最适pH值4.2,最适反应温度60 ℃,米氏常数Km 2.67 mg/ml。     

鸡血液中乙酰胆碱酯酶的提取研究

[目的]为了研究硫酸铵盐析法在乙酰胆碱酯酶分离纯化中的效果,从而利用乙酰胆碱酯酶的活性变化反映农药的污染情况。[方法]采用硫酸铵盐析和等电点区分的方法从鸡血中提取乙酰胆碱酯酶,并探讨其适宜的pH值范围。[结果]结果表明:pH值4.5左右大量的杂蛋白能被除去,可获得较高乙酰胆碱酯酶得率;采用饱和度为50%~60%的硫酸铵盐析效果较好,据此得出较佳的提取工艺。[结论]该研究结果为后续鸡血AChE的提取、分离、纯化等工作提供了相应的参考,同时为利用乙酰胆碱酯酶指示环境受有机磷和氨基甲酸酯类农药污染的后续研究和应用提供了理论依据。     

犬血清IgG的纯化、抗体制备及其鉴定

[目的]探讨犬血清IgG的纯化方法。[方法]采用硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析提取纯化犬血清IgG,利用SDS-PAGE电泳和免疫印迹法鉴定所得产品的纯度和免疫活性。[结果]获得的纯化犬血清IgG的SDS-PAGE图谱中存在2条蛋白条带,表明获得了高纯度的犬血清IgG;重链分子量为58kD,轻链分子量为27kD,IgG分子量为170kD。特异性检测发现犬血清IgG重链和轻链都能与鼠抗犬血清IgG抗体结合,表明纯化犬血清IgG具有免疫原性和反应原性。[结论]硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析可获得纯度高、活性好的纯化犬血清IgG,为犬血清IgG相关的免疫学试验提供了高质量的免疫材料。     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。