生防菌HT3和HT5代谢产物对灰葡萄孢菌的抑菌作用

为了明确从核桃上分离筛选的2株内生菌HT3和HT5的代谢产物对灰葡萄孢菌的抑菌活性及其与农药混配后的抑菌效果,采用孢子萌发法和菌丝生长速率法进行了室内抑菌作用测定。结果表明,菌株HT3和HT5代谢产物对灰葡萄孢菌孢子萌发影响较大,致使孢子畸形或抑制萌发,抑制率分别达到100%和98%;菌株HT3和HT5代谢产物对灰葡萄孢菌菌丝生长也均有显著的抑制效果,其中,菌株HT3代谢产物的抑制率为58.69%,菌株HT5代谢产物的抑制率为63.07%。HT3,HT5代谢产物与杀菌剂速克灵50倍稀释液混配对病原菌菌丝生长的抑制具有一定的增效作用,其中,以速克灵(50倍稀释液)∶HT3=50∶50,速克灵(50倍稀释液)∶HT5=25∶75这2个组合的抑制率较高,分别为87%和86%,增效比均为1.3。     

长白山地区不同海拔环境拮抗放线菌的筛选

利用稀释平板倾注法从吉林长白山地区不同海拔高度的不同环境中共分离到各种放线菌菌株104株.以24种农业常见植物致病真菌作为目标供试菌,采用抑制菌丝生长速率法对104株放线菌进行抗菌活性筛选,优选抗菌活性较佳的12株.将最佳放线菌No.6菌株进行液体发酵,并测定其发酵液滤液的抑菌活性.结果表明,No.6放线菌菌株对香蕉灰纹菌、辣椒疫霉菌、黄瓜炭疽菌、番茄灰霉菌、黄瓜黑星菌、番茄叶霉菌、番茄炭疽菌、棉花黄萎菌、黄瓜枯萎菌、小麦赤霉菌、稻曲病菌、水稻恶苗病菌、小麦纹枯病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯菌、油菜菌核菌均具有优异的防治效果,发酵滤液稀释10倍后对黄瓜黑星菌、番茄炭疽菌、稻曲病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯菌的抑制率分别达90.0%、93.3%、92.0%、93.3%、92.0%.     

海洋源拮抗细菌对水稻纹枯病的防治

从连云港海域的海水和海泥中分离海洋细菌,以水稻纹枯病菌为指示菌对分离到的海洋细菌的抑菌活性进行检测,经过初筛、纯化、定量复筛,获得11株抑菌效果较好的海洋细菌.采用室内抑菌法测定了这11个活性菌株对8种植物病原真菌的抑制效果,结果表明,菌株MG-sm-3、PY-sw-1、PY-sw-9和Ns-sw-6的抑菌谱广且抑菌活性强.用硫酸铵沉淀法提取了这11个活性菌株的胞外粗蛋白,平板抑菌试验结果表明,菌株PY-sw-1的胞外粗蛋白对7种病原真菌的菌丝生长均有抑制效果,尤其对云薹链格孢(Alternaria brassicae)、灰梨孢(Pyricularia grisea)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)有显著抑制作用.田间试验结果表明,菌株PY-sw-1及其胞外物质对水稻纹枯病的防治效果最好,喷施后7 d的防效分别为63.2%和53.9%.以上试验结果说明一些海洋源微生物对植物病害的防治具有一定的功效.     

细辛精油和4种化学药剂对黄瓜灰霉病菌的抑制作用

采用菌丝生长速率法及孢子萌发法分别测定了细辛精油和4种化学药剂(30%嘧霉胺BC、50%双福生WP、75%百菌清WP、70%正品甲津托 WP)对引起黄瓜灰霉病的灰葡萄孢菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用.结果表明,供试药剂对灰葡萄孢菌的菌丝生长和孢子萌发均有抑制作用,且对孢子萌发的抑制效果明显好于对菌丝生长的抑制效果;百菌清对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑菌效果最好,EC50为1.6231 mg/L;双福生对灰葡萄孢菌孢子萌发的抑制效果最好,EC50为0.0042 mg/L;细辛精油对黄瓜灰葡萄孢菌的抑菌效果与其他4种化学药剂相比效果较差,对菌丝生长的EC50为159.580 mg/L,对孢子萌发的EC50为71.1840 mg/L,虽然其EC50偏高,但作为纯植物提取物,其抑菌中浓度低于160 mg/L.     

5株放线菌对9种靶标病原真菌的持续抑菌作用

测定了采用“诱捕分离”法获得SC1,SC11,A3,A4和SE25株放线菌的皿内抑菌活性,对受抑菌丝进行了显微观察,在此基础上,研究了5株放线菌对9种靶标真菌的持续抑菌作用。结果表明,放线菌A3菌株对灰葡萄孢菌和立枯丝核菌、菌株A4对梨状毛霉菌和立枯丝核菌以及菌株SE2对灰葡萄孢菌、梨状毛霉菌和立枯丝核菌均表现出显著的抑菌活性,抑菌率均大于80％;经放线菌处理后,靶标真菌的基内菌丝不同程度地发生了畸变,随着处理时间的延长畸变程度升高;5株放线菌对供试的靶标真菌均不同程度地表现出持续抑菌作用,同一放线菌的持续抑菌作用谱不同,同一靶标真菌被持续抑制的放线菌种类和数量也不同,菌株SC1,A3和A4表现的持续抑菌作用最强。     

番茄内生放线菌ts-6及其次生代谢产物对番茄灰霉病的防病效果

测定了番茄内生放线菌ts-6对灰葡萄孢菌的拮抗作用及其防病效果,结果表明:对峙培养时ts-6菌株对灰葡萄孢菌菌丝生长有明显的拮抗作用,培养7d后可形成直径30mm的抑菌圈,抑菌带宽度达12mm。显微镜下可见抑菌圈边缘菌丝体畸形膨大,分隔、分枝增多,部分菌丝顶端膨大呈泡囊状,有的泡囊破裂、原生质外泄t。s-6菌株胞外分泌物对灰葡萄孢菌孢子萌发和菌丝生长的抑制试验说明,其胞外分泌的拮抗物质中既有能耐高温的抑菌物质,又有遇高温易失活的抑菌物存在。离体和温室防治试验说明,ts-6菌株培养液对灰霉病的防效显著高于菌悬液和无菌滤液。挑战接种间隔期为24h时,无菌滤液的防治效果高于菌悬液;挑战接种间隔期为48h时,菌悬液的防治效果高于无菌滤液。     

灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)次生代谢产物的抑菌活性初步研究

用生长速率法及抑菌圈法测定了灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)高产菌株次生代谢产物提取物对6种植物病原菌的抑菌活性。结果表明,灰葡萄孢菌的提取物对稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)、烟草赤星病菌(Alternaria alter-nata)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)和梨黑星病菌(Venturia nashicola)的菌丝生长有明显的抑制作用,能够完全抑制菌丝生长的浓度分别为2、2、4和8mg/mL,EC50则分别为0.1039、0.3816、0.8418和1.4950mg/mL。对烟草野火病菌(Pseudomonas syuringae pv.tabaco)、白菜软腐病菌(Erwinia carotovora)2种细菌也有抑制作用,在浓度为2mg/mL时,抑菌圈直径均为2.8cm。     

高产抗生素木霉菌株的选育及初步研究

为选育高产抗生素木霉菌株,利用在培养基中加入高浓度木霉菌代谢产物作为选择压力,通过紫外线诱变,以立枯丝核菌作为指示菌,结合平板对峙法、发酵产物平板活性测定法,筛选高产抗生素木霉菌株.经初筛、复筛共得到6株对立枯丝核菌具有较强抑制作用的突变株,进一步对突变株的发酵液进行活性测定,选育出了两株遗传稳定的高产抗生素木霉突变株TD103-UV-4和TD103-UV-13,生长速度分别是出发菌株的1.86倍和1.95倍,发酵产物抑菌活性明显提高.其中菌株TD103-UV-4发酵液对立枯丝核菌的抑制率在80%以上,并且对灰葡萄孢菌等植物病原菌有较强的抑制作用,产抗生素能力比出发菌株提高了47.1%.     

小麦纹枯病菌拮抗细菌的稳定性及对小麦纹枯病菌致病作用的影响

从江苏省51个市(县)采集的550余份小麦纹枯病病叶鞘上共分离获得441个细菌分离物,其中35个菌株对小麦纹枯病菌产生了拮抗作用,占总菌株数的7.94%。经300 d转代保存后仍有28株菌保持了对小麦纹枯病菌的拮抗或抑制作用。拮抗细菌与纹枯菌混合接种小麦,对纹枯菌的侵染有抑制作用,其中GC4菌株对纹枯病的抑制率达63%。     

3种作物纹枯病菌生物学特性差异的比较

较系统地比较了水稻、玉米和小麦3种作物纹枯病菌的培养性状及其在不同培养基、温度、碳源、氮源、pH值和光照条件下生物学特性的差异。结果表明:供试的3种纹枯病菌菌株在菌落生长速率、菌落和菌核颜色、菌核数量和菌核在培养皿的分布等方面均有明显差异;水稻、玉米和小麦纹枯病菌在Czapek培养基上菌丝生长最快、产生的菌核最多,在Richard培养基上菌丝生长最慢,在WA培养基上产生菌核极少或无;水稻和玉米纹枯病菌菌株生长温度范围为10～35℃,最适温度为25～30℃,而小麦纹病菌枯菌株生长温度范围为5～30℃,生长最适温度为20～25℃;3种纹枯病菌菌株对供试碳源中的可溶性淀粉、蔗糖和葡萄糖能很好地利用,但水稻和玉米纹枯病菌菌株对甘露醇的利用能力最差,而小麦纹枯病菌菌株对乳糖的利用能力最差;硝酸钾、亚硝酸钠、硫酸铵、脲和L-亮氨酸5种氮源对3种纹枯病菌菌丝的生长影响不显著,但对菌核的形成有显著影响;3种纹枯病菌菌株在pH 4～10时均可生长和形成菌核,pH 6时生长最快、形成菌核较多。试验结果还表明,光照对3种纹枯病菌菌丝的生长影响无明显差异,但对菌核数量和颜色有显著影响。     

拮抗细菌R26发酵滤液对灰葡萄孢菌的抑菌活性研究

在离体条件下,测定了拮抗细菌R26对灰葡萄孢菌的抑制作用,结果表明,R26发酵滤液能抑制灰葡萄孢菌丝生长,EC50值为10.63μL/mL;经R26发酵滤液(40μL/mL)处理后,灰葡萄孢菌体形态发生明显变化;R26发酵滤液能抑制灰葡萄孢菌孢子萌发,并能抑制芽管伸长,当浓度达80μL/mL时,对灰葡萄孢菌产孢量的抑制率达57.51%。     

菌核净与福美双混配对黄瓜灰霉病菌的抑制效果

采用生长速率法测定了菌核净(Dimetachlone)、福美双(Thiram)及二者不同比例的混剂对黄瓜灰霉病菌的抑制作用。通过不同浓度配比的菌核净和福美双混剂对黄瓜灰霉病原菌的菌丝抑制试验和机率分析,确定了这2种药剂不同配比的联合毒力,为2种药剂的定型配比提供了依据。试验结果表明,菌核净与福美双以1∶2.5混用对黄瓜灰霉病菌菌丝的抑菌作用最佳,联合增效作用最明显,其EC50为0.35 mg/kg,共毒系数(CTC)为912。     

拟南芥不同生态型对灰葡萄孢的抗病性

为明确拟南芥不同生态型对灰葡萄孢的抗病性,并筛选具有抗性的拟南芥材料,试验通过对拟南芥11个生态型进行接种试验,研究其对21个灰葡萄孢菌株的反应,结果发现,有10个灰葡萄孢菌株对拟南芥的11个生态型表现抗/感差异。其中Col-0、Ws-0和Ler生态型接种灰葡萄孢菌株BC18后表现典型的抗病和感病反应。组织病理学试验进一步确定了Col-0、Ws-0生态型为抗病生态型,而Ler为感病生态型,试验结果为进一步的植物抗病基因的克隆和相关作物的遗传改良奠定基础。     

An ABAGS-Like Metabolite of Botrytis cinerea Isolate BC4 and Its Inhibitory Activity to Seed Germination of Weeds

Aimed at finding out natural compounds to kill weeds, a plant pathogenic fungus, Botrytis cinerea isolate BC4, was chosen as a source. A significantly polar metabolite, which was different in chromatographic behavior from ABAGE-like metabolite, was isolated from cultural filtrate of the fungus by column chromatography on silica gel, preparative LC, TLC and HPLC. The structure of the metabolite was determined by HPLC-ESI MS, g.l.c, IR, ^1H NMR and hydrolysis. The results showed that this metabolite was quite similar with ABAGS. The bioassay showed the metabolite had inhibition to seed germination of both broadleaf weeds [Amaranthus retroflerus L. and Chenopodium album L.] and gramineae weeds [Digitaria sanguinalis L. Scop and Echinochloa crusgalii L. Beauv]. It also had inhibitory activity to the seedling growth of broadleaf weeds. The bioassay, using Amaranthus retroflexus L. as an indicator, showed that the lowest concentration of the metabolite to inhibit root＋sprout growth of A. retroflexus was 0.6 μM, and the concentration for 50% inhibition was 1.3μM.     

An ABAGE-Like Metabolite of Botrytis cinerea Isolate BC4 Inhibited the Growth of Hypocotyls and Roots of Amaranthus retroflexus Seedlings

A metabolite, which had an inhibitory effect on plant growth, was isolated from cultural filtrate of Botrytis cinerea isolate BC4 by column chromatography on silica gel and preparative HPLC. Its structure was determined from HPLC-ESI MS, GC, IR, ^1H NMR and ^13C NMR spectral data, as well as chemical hydrolysis. The results showed that this metabolite was quite similar to abscisic acid-β-D-glucopyranosyl ester（ABAGE） in structure. The inhibitory effect of the ABAGE-like metabolite on plant growth was investigated using a weed Amaranthus retroflexus L. as a bioassay material. The results showed that it inhibited hypocotyls and roots growth of A. retroflexus （Amaranthus retroflexus L.） seedlings when its concentration was over 0.5 μM. The concentrations for 50% inhibition of hypocotyls and roots growth of A. retroflexus seedlings were 2.8 and 1.4 μM, respectively.     

The Herbicidal Activity of Mutant Isolates from Botrytis cinerea

Fifteen mutant isolates were obtained by ultraviolet mutation from parent isolate Botrytis cinerea BC-4. Among them three mutant isolates, BC4-1, BC4-2, and BC4-15, showed strong herbicidal activity. BC4-1 showed maximum herbicidal activity for inhibition of germination and growth of Digitaria sanguinalis L. and Arnaranthus retroflexus L. The results also showed that herbicidal activity was influenced by differing pH of PD media, with pH value of 4.0 being the optimum. The crude toxin was extracted using chloroform, petroleum ether, and ethyl acetate, respectively, and the ethyl acetate extracts showed the strongest inhibitory activity on the germination and growth of D. sanguinalis L. and A. retroflexus L. Using HPLC, one fraction with an absorption peak at 271 nm was separated from the crude toxin. This fraction could strongly inhibit the growth of D. sanguinalis L. at a concentration of 100 mg L^-1 and could completely inhibit the seed germination of D. sanguinalis L. and A. retroflexus L. at a concentration of 50 mg L^-1 .     

灰葡萄孢诱变菌株毒素的除草活性研究

 对灰葡萄孢BC4菌株进行紫外线诱变得到了15个诱变菌株, 经测定筛选出BC4-1、BC4-2和BC4-15等3个诱变菌株中以BC4-1菌株效果最好。试验发现，用于毒素产生的PD培养基的pH 值对产毒能力影响很大，以pH 4.0最优。用三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯萃取培养滤液制备BC-粗毒素，生物测定结果表明，以乙酸乙酯萃取所得粗毒素对杂草种子萌发及生长抑制作用最强。通过柱层析法和HPLC法分离和纯化除草活性组分,得到1个在271 nm有最大UV吸收的化合物,该组分在100 mg·L-1浓度下对马唐的生长具有强烈的抑制作用，在50 mg·L-1浓度下可完全抑制马唐和反枝苋种子的萌发。     

山西省灰霉菌对啶酰菌胺的敏感性测定

啶酰菌胺是一种较新的用于防治灰霉菌的杀菌剂,国内鲜有灰霉菌对该杀菌剂的抗性报道。为了明确山西省灰霉菌对啶酰菌胺敏感性情况,通过菌落直径法测定了山西省8个地区139株灰霉菌对该杀菌剂的敏感性。结果表明,所采菌株中137株为相对敏感菌株,2株表现为低抗,敏感菌株占98%以上,说明山西省灰霉菌对啶酰菌胺具有较高的敏感性,但啶酰菌胺具有中度抗性风险,且灰霉菌极易产生抗药性,故有必要做好抗性预防工作。     

番茄灰霉生防菌XF的筛选、鉴定及生防因子的初步探索

菌株XF是一株分离自甘肃省兴隆山原始森林土壤的对番茄灰霉病具有良好防治效果的拮抗细菌。通过对该菌株的形态学特征观察以及16S rDNA序列的分析鉴定,确定菌株XF为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。拮抗试验表明,菌株XF能显著抑制番茄灰霉菌菌丝的生长,抑制率可达66.35%,并使菌丝出现异常分枝,囊泡状畸形且伴有细胞壁破裂,内涵质外泄的现象。菌株XF发酵60 h,10%无菌滤液对番茄灰霉菌菌丝的抑制率为98.19%。生化分析测定结果表明,菌株XF的次生代谢物含有蛋白酶、葡聚糖酶、几丁质酶、铁载体以及生长素IAA,表明该菌株具有生物防治潜力。     

枯草芽孢杆菌FR4对采后草莓的保鲜效果

研究了枯草芽孢杆菌FR4对草莓病原菌灰葡萄孢霉的抑制效果及贮藏品质的影响。在抑菌试验的基础上,分别采用活菌液、离心上清液和过滤液对新鲜草莓进行处理,处理后的草莓置于常温下(20±1℃),每隔24 h观察草莓的腐烂情况,并对草莓品质指标进行检测。结果表明:FR4活菌液和离心上清液对灰葡萄孢霉的抑制效果较好,过滤液次之,但均显著好于对照;不同处理可明显减少草莓腐烂率,降低失重率,减少还原糖含量和可滴定酸含量的损失,但对Vc含量没有显著影响,且活菌液和离心上清液处理优于过滤液。