枯草芽孢杆菌S6抗棉花枯萎病菌拮抗蛋白的分离纯化与抑菌活性研究

为了探寻枯草芽孢杆菌S6菌中对棉花枯萎病菌有拮抗作用的蛋白,将S6菌进行液体发酵培养,初步提取得到了粗蛋白提取液。粗提液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-50脱盐、Sephadex G-100凝胶层析、DEAE-52纤维素离子交换层析,得到了对棉花枯萎病菌有高效拮抗作用的蛋白质,纯化倍数达17。形成分离纯化S6菌株的棉花枯萎病菌拮抗蛋白的可靠技术路线,为研究和生产防治棉花枯萎病菌的生物制剂提供了理论基础。     

拮抗放线菌LJ50和MJ52的分离与初步鉴定

采用常规方法从3种蔬菜地土壤中筛选出2株对棉花黄萎病菌具有拮抗作用的放线菌LJ50和MJ52,通过传统的形态特征和部分生理生化测定,这2株拮抗放线菌属链霉菌属的白孢类群．离体条件下这2株拈抗放线菌的发酵液对棉花黄萎病菌、苹果轮纹病菌、黄瓜炭疽病菌、棉花立枯病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌等8种病原真菌均具有抑制作用。     

一株几丁质酶产生菌V-8对棉花枯萎病的防治作用(英文)

[目的]筛选对棉花枯萎病菌有拮抗作用的内生菌株。[方法]以采自湖北荆州棉花种植区的新鲜棉花植株为试验材料,对其进行内生菌株的分离,再通过几丁质酶及平板对峙双重筛选对棉花枯萎病菌有拮抗作用的菌株。[结果]从大田棉花植株内分离出83株细菌,其中6株为几丁质酶产生菌。通过几丁质酶及平板对峙双重筛选,从中获得菌株V-8对棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)拮抗作用最强,该菌株具有较宽的抑菌谱,对西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp niveum)等6种重要病原真菌均具有一定的抑制作用;在棉花根际土壤能稳定定殖,50d后定殖密度达6.2×105cfu/g;对棉花枯萎病的盆栽防效为73.2%。表明内生细菌V-8对棉花枯萎病的生物防治具有较大的潜力,可作为几丁质酶基因克隆的重要材料。[结论]该研究结果为棉花枯萎病的防治以及充分开发棉花内生菌资源、研制新型生物农药奠定了基础。     

短短芽孢杆菌A57对棉花主要病原真菌的拮抗机理

短短芽孢杆菌A57(Brevibacillus brevs,A57)是从棉花根际土壤分离出来的桔抗细菌。该细菌对棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani)、枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.vasinfectum)和黄萎病菌(Verticilli-um dahliae)具有较强拮抗作用,在PDA平板上对峙培养,平均抑制率分别是33.5%、39.5%、29.5%。该菌菌液稀释10倍对立枯病、枯萎病、黄萎病的防效分别是49.8%、56.8%、48.9%。还利用A57不同稀释度的无细胞滤液培养棉花无菌胚,发现无细胞滤液对棉花幼苗具有一定的促生作用,其中稀释500倍的促生作用最大,其胚轴20.2 mm,对照16.4 mm,较对照增加24.4%,从其无菌胚长成的幼苗提取浸提液,发现浸提液对棉花枯萎病菌仍有一定的拮抗作用,抑制率为5.7%。通过显微镜观察,发现A57菌株的主要拮抗机理是通过产生拮抗物质造成病原真菌菌丝体断裂、扭曲、畸形,抑制分生孢子的萌发,造成孢子畸形。用(NH4)2SO4沉淀法提取A57菌株的粗蛋白,对供试的病原菌仍具有较高的拮抗活性,70%浓度时其拮抗活性最大,A57粗提蛋白对棉花枯萎病菌的最大抑制率为23.7%,同时该菌经(NH4)2SO4沉淀后获得的粗提蛋白的上清液对病原指示菌仍具有一定的拮抗活性。以枯萎病菌为指示菌,研究了该菌株表现最佳拮抗活性时的菌液发酵条件,结果表明,A57适宜培养基为LB培养基,pH8,好气条件下抑菌活性最好。     

黄瓜枯萎病菌的拮抗放线菌筛选

采用对峙培养法和抑菌圈法进行黄瓜枯萎病拮抗放线菌筛选,结果表明:菌株PM-1对供试的14种病原菌均具有抑制作用,其中对番茄早疫病菌、小麦赤霉病菌、小麦纹枯病菌、黄瓜枯萎病菌以及棉花黄萎病菌的抑制作用尤为明显,抑菌带超过20mm.菌株PM-1无菌发酵液5倍、10倍稀释液对黄瓜枯萎病菌菌丝生长的抑制效率达88%以上,拮抗菌株PM-1产生的拮抗物质导致靶标菌菌丝细胞畸形,出现囊泡、肿胀,崩溃消融,从而抑制其生长.     

介绍两个特色高新棉花品种雪绒花抑菌棉-冀审棉653

冀审棉653是由河北省棉花专家通过海岛棉与陆地棉远缘杂交将抑菌基因"轮枝毒素拮抗因子"转移到植株体内培育而成."轮枝毒素拮抗因子"能够有效抑制棉花体内病菌生成,尤其对棉花枯、黄萎病的致病因子半知菌亚门真菌有极强的抑制作用,不仅能附着在病菌表面,破坏病菌的新陈代谢系统,抵制病菌的再生,而且能持续抵抗土壤及外界病菌的侵入.实验证明,冀审棉653抑菌棉种含有抑菌基因,不但能有效抵抗棉种体内及外界病菌浸染,而且可以抵制病菌的传播,使棉花在整个生育期内健壮生长.     

棉花枯萎病菌拮抗内生菌的筛选和拮抗效果检测

从甘草、阿魏、苦豆子中筛选出4株对棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporium)抑制效果较好的内生菌,通过其生理生化检测、16S r DNA序列分析进行鉴定;选择抑菌效果最好的拮抗菌A,分别测定其胞内、胞外分泌物的抑菌效果,并检测该菌株对棉花种子萌发和活性氧酶系统的影响。结果表明,拮抗菌A为解淀粉枯草芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),其胞内分泌物对枯萎病菌菌丝生长、产孢、孢子萌发的平均抑制率均高于胞外分泌物。拮抗菌A处理棉花可提高其成活率,但不引起植株系统诱导抗性。拮抗菌A的主要抑菌物质存在于细胞内,抑制产孢是其主要拮抗途径。     

缙云山土壤拮抗放线菌的分离、筛选与发酵条件优化

以烟草赤星病菌为指示菌,从缙云山土壤中分离和筛选出6株拮抗放线菌,其中JY-22对指示菌拮抗效果最好。对JY-22的抑菌谱测定结果表明:JY-22对棉花枯萎病菌、烟草赤星病菌、小麦纹枯病菌、柑橘疮痂病菌、茶云纹叶枯病菌和柑橘青霉病菌都具有较强的拮抗作用,抑菌率达41.9%~75.7%。通过单因子和正交试验对拮抗放线菌JY-22进行发酵条件的研究,结果表明,其最佳培养基组成和培养条件为:1 000 mL培养基中含葡萄糖2.0%、玉米粉1.5%、黄豆粉3.0%、氯化钠0.25%、碳酸钙0.2%,初始pH值为自然,250 mL三角瓶装液量为50 mL,发酵周期为72 h。     

4种茄科作物内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

番茄、茄子、烟草和辣椒健康植株内生细菌的分离及拮抗菌的筛选结果表明,植物的不同种、品种及植物的不同部位,内生细菌数量有所不同.不同作物每克鲜重平均内生细菌数量为1180-11160 cfu;各作物植株不同部位均以果中内生细菌的数量最少,根和茎中的内生菌数量较多.拮抗测定表明,各植物体内均存在对番茄青枯病菌和黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的内生细菌,对番茄青枯病菌具有拮抗作用的植物内生细菌占总数的16.21%,而对黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的内生细菌占总数的28.53%.从拮抗菌株中筛选出3株对多种植物病原真菌有较好拮抗作用的菌株,对黄瓜枯萎病有20.83%-79.17%的防病效果,此3菌株对水稻白叶枯病菌和番茄青枯病菌也有一定拮抗作用,内生性测定表明,3菌株均能进入宿主植物番茄和茄子体内,经初步鉴定3菌株均为芽孢杆菌(Bacillussp.).     

土壤拮抗放线菌S-5210-6的筛选及其初步分类鉴定

从秦岭山区不同海拔、不同植被类型土壤中分离出750株放线菌,对其进行皿内琼脂平板、放线菌发酵液及拮抗菌单胞菌的拮抗性筛选。结果表明,S 5210 6号菌株对稻瘟病菌(Pyriculariagrisea)、小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)、小麦根腐病菌(Bipolarissorokiniana)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicumleonard)、黄瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerium)、番茄枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.lycopersici)、番茄早疫病菌(Altermariasolani)、小麦白粉病菌(Erysiphegraminis)8种供试病原真菌具有强烈的拮抗和溶菌作用,根据其形态特征、培养特征、生理生化特征及细胞壁化学成分分析,确定其归属于链霉菌属(Streptomyces)。     

耐药猪链球菌膜蛋白图谱分析及能量抑制剂对其敏感性的影响

为证实国内临床分离的动物源链球菌菌株中是否存在与红霉素耐药性相关的主动外排机制,选取含有mefA基因和ermB基因和不含mefA/ermB基因的链球菌耐药菌株和青霉素、红霉素均敏感菌株,在能量抑制剂氰氯苯腙(CCCP)存在时,采用棋盘法分析红霉素、阿齐霉素、替米考星、青霉素对分离菌MIC的影响,并采用SDS-PAGE电泳分析分离株的膜蛋白图谱.结果显示:CCCP可对含有mefA基因的耐药菌株产生影响,可增强其对红霉素、阿齐霉素的敏感性,但不影响其对替米考星和青霉素的敏感性.含有ermB基因、不含mefA/ermB基因的耐药菌,对红霉素、阿齐霉素、替米考星和青霉素的敏感性不受CCCP的影响.菌株膜蛋白的SDS-PAGE电泳图谱显示,含有mefA基因的耐药菌株与其他菌株的膜蛋白图谱差异较大,其膜蛋白条带多而深浓,在45 000处有明显的条带,其他菌株无该条带,推测该蛋白可能是膜主动外排的相关蛋白.本试验结果佐证了在链球菌内存在与红霉素耐药相关的主动外排机制.     

禽畜粪便堆肥中优势菌株的分离及对有机物质降解能力的比较

通过对猪粪堆肥各个阶段的微生物进行分离、纯化,得到84株纯菌株.经过对比测定,选出生长相对较快,降解淀粉、油脂、蛋白质及纤维素能力较强的53株菌株,包括常温细菌15株、高温细菌4株、常温放线菌17株、高温放线菌6株、常温霉菌11株.其中,细菌对于淀粉和蛋白质分解能力较好,但对纤维素和油脂的分解能力差,由放线菌和霉菌的分解作用进行补充.高温期细菌和放线菌起着至关重要的作用,霉菌则主要在堆肥末期发挥作用,在高温期活性很弱.     

三环唑抑制稻瘟病菌MIC的测定及菌株产黑色素能力比较

测定了三环唑抑制黑龙江省116个稻瘟病菌菌株黑色素化的MIC值、黑色素合成量及三环唑抑制菌丝黑色素生物合成的有效中浓度(EC50-H),测定结果表明,黑龙江省稻瘟病菌菌株产黑色素的能力差异较大,产黑色素能力最强的菌株与产黑色素能力最弱的菌株的黑色素产值相差7.26倍。从三环唑抑制稻瘟病菌黑色素合成来看,绝大多数供试菌株对三环唑表现为较敏感。     

广式凉果成品中的微生物种群调查

对16类广式凉果中的菌落总数、真菌总数及其中的微生物种群进行调查研究,结果表明,大部分凉果产品的菌落总数和真菌总数都比较低,符合国家标准,只有2类产品的菌落总数不符合国家标准:在16类凉果产品中分离到44株菌株,其中含有芽孢的细菌32株、不含芽孢的细菌3株、酵母4株、霉菌5株.含有芽孢的细菌是凉果中最主要的微生物种群,分属芽孢杆菌属中的11个种,其中地衣芽孢杆菌有16株,此外还发现了对人体健康有一定威胁的腊样芽孢杆菌和炭疽芽孢杆菌.     

姜瘟病原菌田间自然群体毒力及不同接种方法的比较研究

[目的]为姜瘟病病原菌自然群体毒力组成的监测提供参考。[方法]从同一个姜瘟病田的不同区域分离获得26个菌株,观察其细胞学性状,测定其生物型,从灌根法、注射法、剪叶法中筛选姜瘟病病原菌适宜的接种方法。[结果]分离获得的26个菌株的形态、培养性状、染色反应及生理生化特性和对照菌株L2、G2表现完全一致,确定其是青枯假单胞杆菌Pseudomonas solanacearum Smith),即姜瘟病病原菌,其中7株为Ⅱ型,占总菌株数的27%,19株为Ⅲ型,占总菌株数的73%。在田间进行姜瘟病病原菌接种时,建议使用茎基部注射法。[结论]从1块有代表性的病田的不同病株上分离25个以上的菌株的致病力的测定结果是该地区姜瘟病病病菌自然群体毒力组成系统监测的重要参考。     

动物微生态制剂猪肠源芽孢杆菌的分离与鉴定

本次试验的菌种是从宁夏平罗县边远农村基本自然生长的健康肉猪的小肠、大肠和盲肠中分离获得的,共分离出28株菌株.通过对这28株菌株的菌落形态观察、革兰氏染色和芽孢染色镜检,筛选出12株芽孢杆菌(Bacillus)菌株进行了生理化学鉴定,其中有11株分属于芽孢杆菌的3个种.确定8株为蜡状芽孢杆菌(B.cereus),1株为枯草芽孢杆菌(B.subtilis),2株为短芽孢杆菌(B.brevis).这11株菌株的各项鉴定结果均符合芽孢杆菌属和相应种的菌落形态、革兰氏染色和芽孢染色特征以及生理生化鉴定标准.     

根瘤菌竞争结瘤的研究进展

近年来已通过自然选育或基因工程技术获得了不少具有高效固氮能力的菌株。并在人工控制的条件下证明它们能够使豆科作物显著增产。但由于人工接种剂与土著根瘤菌的竞争结瘤问题一直未得到很好解决，阻碍了这些高效固氮菌株田间应用效果的发挥。尽管人们对这一问题已进行了大量的研究。但也根瘤菌结瘤基因的研究相比。我们对根瘤菌的竞争结瘤机制的认识仍非常有限。已有的研究结果表明，影响根瘤菌竞争结瘤的因素主要包括根瘤菌与宿主植物的遗传基因和生态学因素两个方面。     

哈维氏弧菌的血清型与菌苗抗原性的关系

采用不同血清型哈维氏弧菌Vibrio hanwyi624、809和106等3个菌株，制备成福尔马林灭活菌苗，注射接种大黄鱼4周后，通过血清中凝集、交叉凝集抗体效价测定以及活菌攻毒试验，证明了3个菌株制备的菌苗抗原性存在差异。     

6株肠艾美耳球虫繁殖力的比较研究

[目的]为肠艾美耳球虫的早熟选育及兔球虫疫苗的研制提供理论依据。[方法]采用6个不同地区肠艾美耳球虫的孢子化卵囊经口接种45日龄无球虫兔,接种剂量为1×104个卵囊/只,并对6株肠艾美耳球虫的繁殖力进行比较。[结果]衡水株排卵量最多,张家口株次之,胶南株排卵量最少。睢宁株的排卵量接近胶南株,如皋株、通江株相近,在感染后第8.5～9天均有排卵,各虫株的排卵高峰期相似,第13天排卵量达到峰值,第21天接近0。[结论]不同地理株肠艾美耳球虫的排卵量不同,但排卵高峰相一致。     

动物微生态制剂菌种的分离与鉴定--猪肠源乳杆菌的分离与鉴定

本次试验的菌种是从宁夏平罗县边远农村半自然状态生长的健康肉猪的小肠、大肠弄口盲肠中分离获得的，共分离出64株菌株．通过对这64株菌株的菌落形态观察和革兰氏染色镜检．筛选出14株进行了乳杆菌属的生理生化鉴定，初步确定这14株杆菌属于乳杆菌属（Lactobacillus）．再通过糖醇类发酵产酸鉴定，确定4株为植物乳杆菌（L．plantayum），3株为短乳杆菌（L．brevis），2株为小鼠乳杆菌（L．murinus），3株为类布氏乳杆菌（L．parabuchneri），1株为丘状乳杆菌（L．collinoides），1株为玉米乳杆菌（L．zeae）．各项鉴定结果均符合乳杆菌属和相应种的鉴定标准．