转病毒移动蛋白及复制酶基因烟草的协生和重组风险分析

 对转化番茄花叶病毒 (ToMV)、烟草花叶病毒 (TMV)移动蛋白 (MP)基因和黄瓜花叶病毒P1株系(CMV P1)部分复制酶基因的 3种转基因烟草 ,分别接种马铃薯X病毒 (PVX)、马铃薯Y病毒 (PVY)、CMVRB株系 (CMV RB)和TMV。症状观察和ELISA测定发现 ,各病毒在转基因烟草和非转基因烟草上的症状及病毒浓度没有显著差异 ,表明这些病毒在转基因烟草上没有协生作用发生。对转化ToMVMP基因和转化CMV P1部分复制酶基因的转基因烟草 ,分别接种TMV和CMV RB ,定期进行生物学、ELISA和免疫捕获反转录PCR(IC RT PCR)检测 ,在 16个月的连续测定中未发现病毒重组现象。     

毛白杨TIR-NBS-LRR基因转化烟草的研究

该文采用农杆菌介导法将从毛白杨中克隆得到的TIR-NBS-LRR抗病基因（PtDRG01）导入烟草中,经抗生素筛选和PCR分子检测,获得了一批阳性转化植株。进而对这些阳性转化植株进行烟草花叶病毒接种实验,从表型观察结果发现,在接种病毒1周和6周后,转基因烟草株系TG-11的发病程度明显低于非转基因烟草。荧光定量分析结果显示,转基因烟草株系TG-11叶片中的烟草花叶病毒(TMV)数量显著低于非转基因植株,且该转基因株系中的PtDRG01基因转录水平显著高于非转基因植株。这些结果表明,毛白杨PtDRG01基因具有明显的抗病功能,其高效表达能够显著提高烟草的抗TMV能力。该文通过对烟草的遗传转化与病毒接种实验,鉴定了PtDRG01基因的功能,可为其他TIR-NBS-LRR基因的功能鉴定提供参考。      

水杨酸诱导的烟草对烟草花叶病毒的抗性

采用水杨酸(SA)诱导烟草对烟草花叶病毒(TMV)的抗性,间接ELISA法检测诱导后烟草叶片的病毒含量,并用枯斑寄主的半叶法检测诱导抗性程度。结果表明,水杨酸处理后烟草叶片内TMV含量明显降低,随着病毒挑战接种后时间延长,病毒含量增多,第28d普通烟叶片的病毒含量达到最大值。SA诱导处理后,处理叶片(T-SA)与其上部未处理叶片(N-SA)比较,枯斑数基本一致,均比对照处理明显减少。     

抗TMV、CMV转基因烟草的初步选育

将烟草花叶病毒复制酶54 KD蛋白基因构建到质粒pSSZ32.54K,导入根癌农杆菌EHA105株系,用农杆菌介导的叶盘法转化含CMV CP基因的纯合系烟草,获得了含CMV CP基因和TMV RepE基因的转基因烟草,以及只含TMV RepE基因的转基因烟草.以繁殖于新鲜普通烟叶片上的TMV为毒源,机械摩擦接种含双基因的烟草和只含CMV CP基因的烟草.接种15 d后,观察植株发病情况,发现转双基因的烟草无花叶症状出现,而对照植株(只含CMV CP基因)出现花叶症状.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病毒含量,发现转基因植株体内无病毒积累,而对照植株体内有病毒积累.因此,含RepE基因的烟草对TMV有一定抗性.     

水杨酸衍生物诱导烟草抗TMV及对几种防御酶活性的影响(英文)

[目的]研究水杨酸衍生物是否可诱导烟草抗TMV,及其对几种防御酶活性的影响。[方法]用外源水杨酸衍生物处理烟草以诱导其对烟草花叶病毒的抗性,并测定其对接种TMC的烟草叶片中防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POX)的活性。[结果]水杨酸衍生物处理可使烟草叶片中PAL、POX活性有不同程度的提高,但对烟草花叶病毒的抗性影响较小。[结论]该研究为植物抗病机制的研究提供了理论依据。     

转截短hpalXoo基因烟草抗病防御酶活性分析

[目的]探讨转截短hpalXoo基因烟草中与抗病性有关的5种防御酶系的活性变化.[方法]以转截短hpalXoo基因烟草A6-1和对应的非转基因烟草Xanthi叶片为材料,接种烟草花叶病毒（TMV）,测定苯丙氨酸解氨酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性.[结果]未接TMV时,转截短hpalXoo基因烟草中POD、PPO和CAT酶活性均高于未转基因对照品种,而SOD和PAL活性与未转基因烟草无显著差异.接种TMV后,转截短hpalXoo基因烟草中5种防御酶活性均显著增加,且高于未转基因烟草,并维持在一个较高的水平.[结论]截短的hpalXoo基因在烟草中表达能显著提高其抗病防御酶活性水平.     

水杨酸诱导的烟草对烟草花叶病毒的抗性

采用水杨酸（SA）诱导烟草对烟草花叶病毒（TMV）的抗性．间接ELISA法检测诱导后烟草叶片的病毒含量．并用枯斑寄主的半叶法检测诱导抗性程度。结果表明．水杨酸处理后烟草叶片内TMV含量明显降低．随着病毒挑战接种后时间延长．病毒含量增多．第28d普通烟叶片的病毒含量达到最大值。SA诱导处理后．处理叶片（T-SA）与其上部未处理叶片（N-SA）比较，枯斑数基本一致。均比对照处理明显减少。     

烟草对烟草花叶病毒耐受性的早期防御反应

为深入研究植物对烟草花叶病毒(TMV)产生耐受性的机制,以烤烟栽培种NC89和其自然变异株系培育的品种豫烟8号(具有TMV耐受性)为材料,人工接种TMV后,检测其生理生化指标变化及抗性基因表达水平,并进行组织切片比较分析。结果显示,豫烟8号接种TMV 24 h叶片中的超氧阴离子含量、过氧化物酶(POD)活性、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性、过氧化氢酶(CAT)活性都明显高于NC89,而丙二醛(MDA)含量低于NC89,N基因表达水平高于NC89。接种TMV 9 d的烟草组织切片显示:相对豫烟8号,NC89叶片表皮细胞破裂,栅栏组织细胞间排列疏松,海绵组织细胞间隙较大。表明豫烟8号对TMV的耐受性体现在早期的快速应答反应。     

烟草花叶病田间接种技术初步研究

研究结果表明:单独用烟草花叶病毒(TMV)或用黄瓜花叶病毒(CMV)接种时,病毒浓度分别以0.5微克/毫升以下和干病叶稀释250～500倍为宜。TMV和CMV联合接种时,两种病毒混合接种的发病重,分开先后单独接种的发病轻。但二者均可对不同抗性的品种(系)进行有效的选择。接种时期以移栽期为宜。     

草酸青霉菌果胶酶诱导烟草抗TMV的研究

本试验就草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)的固态发酵提取产物——果胶酶粗酶液诱导烟草对烟草花叶病毒(TMV)的抗性进行了研究。以不同浓度果胶酶粗酶液喷雾处理2个烟草品种,超过100 U/mL的各浓度处理,病斑抑制率均达到50%以上。通过果胶酶诱导烟草抗病的时效性、加强诱导的效果、系统诱导抗病性、处理方法不同对烟草抗TMV效果以及果胶酶液对TMV病毒毒性的研究,结果表明:诱导处理2、4d后接种TMV病毒,果胶酶的诱导抗病效果最明显,病斑抑制率在50%左右;二次加强诱导处理可以提高烟草抗TMV的效果;果胶酶可诱导烟草产生对TMV的系统获得抗性;叶面喷雾果胶酶处理方法,对烟草抗TMV的效果最显著;果胶酶液中不含有影响TMV致病力的因子。由此表明,果胶酶对TMV的防治是通过激发烟草植株体内一系列抗病防御反应而增强自身抗病能力的。     

漂盘培养液中TMV含量对烟草花叶病发病情况的影响

[目的]为提高烟叶产量和品质提供参考。[方法]以普通烟K326和心叶烟为材料,用12．7、1．27、0．127、0．0127μg/ml烟草花叶病毒（TMV）液对K326进行漂盘培养,培养5、10、15、20、25d后随机取各处理K326叶片得叶片提取液,用各处理提取液接种8叶期心叶烟叶片,调查K326的发病情况及心叶烟的枯斑数。[结果]12．7ug／mlTMV处理K326表现出发病症状,其他处理未表现明显发病症状;随着培养液中TMV浓度的升高,各处理烟叶提取液接种心叶烟产生的枯斑数逐渐增多,且枯斑数随病毒接种时间的延长迅速增加;12．7、1．27μg/mlTMV处理K326叶片提取液接种20d后心叶烟枯斑数最多,0．127、0．0127μg／mlTMV处理K326叶片提取液接种25d后心叶烟枯斑数最多。[结论]烟草花叶病的发病率和病情指数与培养液中TMV的浓度有关。     

β-氨基丁酸诱导烟草抗烟草花叶病毒系统侵染的研究

[目的]研究阻氨基丁酸（BABA）对烟草抗烟草花叶病毒（TMV）系统侵染的影响。[方法]以烟草普通栽培种为研究对象,用BABA进行处理．处理后所有的烟苗均放入保湿袋中保湿24h。然后用组织化学法鉴定BABA诱导烟草产生的过敏反应,并进行产生H2O2,原位检测以及活性氧和丙二醛测定。（结果]BABA处理后叶片中的,β-1,3-葡聚糖酶活性升高,1MV接种后叶片中该酶活性也进一步升高。10mmol／LBABA喷洒处理能显著诱导氧进发,引起过敏性反应,叶面局部细胞坏死。处理叶片中的过氧阴离子自由基、丙二醛含量增加。10mmol／LBABA有效激发植株的系统抗性,限制TMV的侵染,增强了烟草对TMV的抗性。[结论]BABA可增强普通烟草栽培品种抗TMV系统侵染的能力。但其诱抗能力要受其浓度的影响。     

引进烤烟新品种抗病性鉴定

[目的]鉴定引种的烤烟新品种的抗病性。[方法]采用苗期温室病圃和大田病圃的自然诱发和人工接种诱发方法,对引进的10个烤烟新品种进行烟草赤星病、烟草黑胫病、烟草普通花叶病(TMV)的抗性鉴定。[结果]各烤烟新品种对烟草普通花叶病、烟草赤星病的抗病性在0.01和0.05水平上均有显著差异,对烟草黑胫病的抗病性在0.05水平上有显著差异。8902-42对烟草赤星病表现出较好的抗病性,其他品种表现都较差。[结论]综合抗性较好即兼抗或中抗3种病害的品种有3个,分别是YH02、8902-42和39511。     

植物诱导抗病剂组合应用对烟草花叶病的防控效果

[目的]探讨植物诱导抗病剂组合对烟草花叶病的防控效果。[方法]在模拟病圃环境下,研究了6种植物诱导抗病剂的不同组合对烤烟栽培品种红花大金元的烟草花叶病的防控效果。[结果]多肽保与AHO 2种诱导剂的组合应用对控制TMV有良好效果,能明显推迟带毒隐症烟株TMV的发病时间,移栽后70 d对以清水和东旺毒消为对照的大田期烟株TMV的平均防效分别达到69.64%和43.25%,且在株高、叶数方面表现出明显优势,叶片生长发育状况良好。烟苗携带TMV病毒与症状能否表现无直接相关性,带毒隐症烟苗只有在发病条件适宜时才会表现症状。带毒隐症烟苗栽后19 d内是TMV发病的高峰期,在育苗阶段与大田期施用有效药剂,以及移栽后促进烟苗早生快发是控制其发病的关键措施。[结论]为制定烟草花叶病的防控措施提供了理论依据。     

利用近红外光谱技术快速检测烤烟苗期病毒病

[目的]筛选苗期病毒快速检测的化学成分指标。[方法]采用摩擦接种方法对烟苗接种TMV病毒诱发病毒病,利用近红外光谱对健株和病株内在化学成分(还原糖、钾、氯、总氮、总糖和总烟碱)进行了定性和定量分析。[结果]接种TMV 10 d后,健株与病株在化学成分上差异较大,特别是在有机物含量上,各调查时期的处理均高于对照。[结论]可将有机物如还原糖、总糖和总烟碱等含量作为病毒检测的主要指标,并辅以无机成分含量作参考。     

广西百色烟草主要病毒病种类鉴定

[目的]分析鉴定广西百色烟草主要病毒病种类。[方法]2006～2010年连续5年对百色市烤烟主产区697个烟草病毒样品和132份土壤样品及126份蚜虫（Myzus persicae）样品进行多重RT-PCR检测。[结果]在所有采集的烟草样品中多数能检测到烟草病毒的存在,检出率为99.0%;检出烟草花叶病毒（TMV）病样521个,检出率为74.8%;黄瓜花叶病毒（CMV）病样149个,检出率为21.4%;马铃薯Y病毒（PVN）检出率为37.7%,共263个。其中,TMV与CMV混合侵染的有56个,检出率为8.0%;TMV与PVY混合侵染的166个,检出率为23.8%;CMV与PVY混合侵染的有131个,检出率为18.8%;TMV、CMV和PVY共同侵染的有55个,检出率为7.9%。132份植烟土壤中均含有TMV病毒,检出率为100.0%,而PVY和CMV均未测出。126份蚜虫样品中,12份蚜虫中检测出只有PVY存在7,份蚜虫中只有CMV存在7,7份蚜虫中同时存在PVY和CMV。[结论]危害百色烟草病毒主要为TMV、PVY和CMV,其中TMV初侵染源为土壤中存在的TMV病毒,而PVY和CMV的初侵染源主要为迁入的带毒蚜虫。     

烟草花叶病毒运动蛋白的表达及特异性抗体制备

从烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)感染的发病烟草叶片中提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到其运动蛋白基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上.DNA序列分析表明,所得运动蛋白基因全长为807 bp,与已报道的TMV-U1株系核苷酸和氨基酸同源性均为100%.将目的基因亚克隆到原核表达载体pET-29a上,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导4 h后蛋白表达量达到最大,超声波显示所得融合蛋白以不可溶形式存在.SDS-PAGA检测蛋白表达情况,表达产物与目的蛋白大小一致,割胶免疫注射家兔得到抗体,ELISA测定效价为25600,Western-blot检测证明在烟草叶片被侵染早期MP得到表达,且抗体特异性良好.     

水杨酸对感染TMV烟草叶片PAL活性的影响

用水杨酸(SA)和普通烟草花叶病毒(TMV)诱导且接种抗病烟草品种CV85和感病烟草品种G80,研究其对烟草叶片苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响。结果表明,抗、感病烟草品种对照接种处理的PAL活性均较对照增加;抗病烟草品种CV85诱导和诱导接种处理的PAL活性也较对照增加,且较对照接种增加得更为明显,8d时可达活性高峰;而感病烟草品种G80诱导接种后,其PAL活性先增加后降低,而对照接种后PAL活性升高,17d时达到活性高峰;诱导接种并没有增加感病烟草品种的PAL活性,而增加了抗病烟草品种的PAL活性。可见,外源应用SA控制烟草花叶病毒病在抗病品种上表现更好。     

烟草花叶病毒弱毒株的筛选及其交互保护作用

采用高温、亚硝酸及两者的复合处理对烟草花叶病毒 (TMV)强毒株进行诱变 ,均可有效提高突变频率 ,而且复合处理还有较好的协同效应 .经生物学接种鉴定及血清学方法筛选 ,从中获得了 TMV- 0 17和TMV- 15 2 2个弱毒株 .用正交设计法考察病毒接种浓度、接种间隔时间、接种部位以及普通烟生育期等因素对弱毒株交互保护作用的影响 ,发现以烟株生育期和接种间隔时间两因素影响最大 .本试验结果表明 ,在烟草团棵期 ,弱毒株和强毒株接种间隔时间为 17d时 ,交互保护作用效果最好