奶牛体内性控胚胎生产的研究

为探讨奶牛合理的超排方法,采用分离的X冻精对17头超数排卵的荷斯坦奶牛进行人工授精,生产体内性控胚胎。结果表明,处理Ⅰ组在头均获卵数、可用胚及退化胚几个方面都低于处理Ⅱ组,但差异不显著(P>0.05);头均黄体数和未受精数,Ⅰ组高于Ⅱ组(P>0.05);青年牛头均获卵数、可用胚和退化胚方面都高于经产牛组,但差异不显著(P>0.05);青年牛头均未受精卵数显著高于经产牛(P<0.05),头均黄体数低于经产牛,但差异不显著(P>0.05)。     

郏县红牛超数排卵研究

应用促卵泡素(FSH)连续4 d递减法肌肉注射郏县红牛进行超数排卵处理,重点探讨药物剂量、药物产地、季节以及重复超排等因素对郏县红牛超排的影响。结果表明,用加拿大FSH在300 mg剂量时的头均获胚总数和头均可用胚数(8.86和5.98枚)显著高于280 mg剂量组(6.32和3.05枚)和320 mg剂量组(6.56和4.12枚)(P0.05);用宁波产FSH在320 I U剂量条件下的头均获胚总数和头均可用胚数(8.12和5.46枚)显著高于280 I U组(5.55和2.76枚)和300 I U剂量组(6.32和3.77枚)(P0.05)。综合3个剂量的处理结果,进口FSH和国产FSH对郏县红牛的超排处理效果无显著差异,头均黄体数分别为13.89个和13.41个,头均获胚总数分别为6.94和6.74枚,头均可用胚数为4.42和3.95枚;在夏秋季(5-10月)超数排卵郏县红牛23头次,冬春季(11-次年4月)超数排卵郏县红牛21头次,发现超排季节对头均黄体数无显著影响(P0.05),但冬春季头均获胚总数(7.23枚)和头均可用胚数(6.51枚)显著高于夏秋季(4.57和2.90枚)(P0.05);对郏县红牛供体牛间隔70 d重复超排处理后发现,1次、2次和3次重复超排头均黄体数分别为14.30、13.12和12.23个,头均获胚总数分别为7.31、6.52和6.45枚,头均可用胚数分别为4.56、4.15和3.96枚,重复超排对上述3个指标均无显著影响(P0.05)。     

安哥拉山羊超数排卵研究

在生产条件下,研究安哥拉山羊的超数排卵。用FSH进行超排,结果表明,用武汉生物化学制药厂和宁波激素制品厂生产的FSH,同一剂量处理,每只供体平均可用胚数分别为11.88±6.83和12.00±6.77枚(P>0.05);用宁波厂的910616和920509两个批号FSH处理时,平均可用胚数分别为4.14±4.22和5.88±3.52枚(P>0.05);用400、360和340IuFSH处理时,平均可用胚数分别为5.00±3.67、8.72±4.35和10.35±5.09枚;初产和经产羊平均可用胚数分别为5.20±4.09和5.27±3.60枚。用同一方法处理21～52kg体重的供体时,体重每增加1kg,平均可用胚增加0.17枚(Y=0.17x+3.890,P<0.05).结论认为,武汉厂和宁波厂生产的FSH及宁波厂不同批号的FSH超排效果相似,超排适宜剂量为340～360Iu,初产与经产安哥拉山羊超排效果相似,供体羊体重较大的超排效果也较好。     

3种超排方案生产奶牛体内性控胚胎效果比较

采用3种不同方案对16头经产奶牛实施超数排卵,然后用X性控冻精进行人工授精。结果显示,3种方案超排头均排卵数分别为10.75、6.00、7.00枚,头均回收胚胎数分别为8.38、4.25、7.00枚,3组均无显著差异(P>0.05);方案Ⅰ超排供体头均获可用胚7.88枚,可用枚率为95.5%,显著高于方案Ⅱ(2.20枚,55.7%)和方案Ⅲ(0.33枚,15.7%)(P<0.05)。方案Ⅱ和方案Ⅲ在头均可用胚数方面无显著差异(P>0.05),但在可用胚率方面,方案Ⅱ显著高于方案Ⅲ(P<0.05)。     

影响杜泊绵羊超数排卵效果的因素分析

对53只杜泊绵羊实施超排处理,系统分析了供体羊年龄、胎次、重复超排、两次超排间隔时间、胚胎回收部位和季节对超数排卵效果的影响。结果表明,24月龄以上羊平均回收胚胎数显著高于8~12月龄羊(8.71∶7.18)(P<0.05);8~12月龄羊可用胚胎所占比例显著高于13~24月龄羊(95.29%∶75.96%)(P<0.05)。经产二胎羊平均回收胚胎数显著高于初产羊(8.71∶7.00)(P<0.05);初产羊可用胚胎所占比例显著高于经产一胎羊(96.14%∶75.88%)(P<0.05)。第三次超排处理平均回收胚胎数显著少于首次和第二次处理(8.71∶8.10∶7.00)(P<0.05);首次超排处理平均可用胚胎数高于第二次和第三次超排处理(7.47∶5.90∶5.00)(P<0.05)。两次超排间隔10个月可用胚胎所占比例显著高于间隔1个月(92.14%∶77.09%)(P<0.05)。从输卵管平均回收胚胎数显著多于从子宫角平均回收胚胎数(10.14∶8.22)(P<0.05)。秋季超排处理平均可用胚胎数和可用胚胎所占比例均显著高于冬季(7.53∶5.97)(91.67%∶74.90%)(P<0.05)。     

供体细胞来源及预处理对牛体细胞核移植效率的影响

以牛外耳皮肤成纤维细胞为核供体细胞,比较了不同同步化诱导方式(血清饥饿法与接触抑制法)、供体细胞冷冻与否、供体动物性别与年龄等因素对体细胞核移植效率的影响。结果表明,接触抑制法处理的供体细胞核移植胚囊胚率显著高于饥饿法(P<0.05);未冷冻的供体细胞核移植胚囊胚率显著高于冷冻供体细胞(P<0.05);成年母牛供体的囊胚率显著高于成年公牛(P<0.05);不同年龄供体细胞的核移植胚囊胚率差异不显著(P>0.05)。试验表明,以接触抑制法诱导未冷冻成年母牛外耳皮肤成纤维细胞为核供体,有利于核移植胚囊胚的发育。     

繁殖季节不同月份对萨福克绵羊超排效果的影响

利用引进的萨福克绵羊为供体,当地绵羊为受体,对7月末至8月中旬(A)、8月中旬至9月初(B)以及9月末至10月中旬(C)的萨福克羊超排结果作了比较。结果表明,处理A、B和C的只均黄体数之间差异不显著(P>0.05);处理A、B和C只均获胚数和只均可用胚数,处理C高于处理B、A,但与处理B差异不显著(P>0.05),与处理A差异显著(P<0.05),处理B高于处理A,但与处理A差异不显著(P>0.05);处理A、B和C的可用胚率,处理B和C高于处理A,但都与处理A差异显著(P>0.05)。     

影响杜泊绵羊超数排卵效果的因素分析

对53只杜泊绵羊实施超排处理,系统地分析了供体羊年龄、胎次、重复超排、两次超排间隔时间、胚胎回收部位和季节对超数排卵效果的影响.结果表明:24月龄以上羊平均回收胚胎数(8.71)显著高于8～12月龄羊(7.18), 8～12月龄羊可用胚胎所占比例(95.29%)显著高于13～24月龄羊(75.96%);经产二胎羊平均回收胚胎数(8.71)显著高于初产羊(7.00),初产羊可用胚胎所占比例(96.14%)显著高于经产一胎羊(75.88%);第3次超排处理平均回收胚胎数(6.60)显著少于首次(8.71)和第2次处理(8.10),首次超排处理平均可用胚胎数(7.47)高于第2次(5.90)和第3次超排处理(5.00);2次超排间隔10个月可用胚胎所占比例(92.14%)显著高于间隔1个月(77.09%);从输卵管平均回收胚胎数(10.14)显著多于从子宫角平均回收胚胎数(8.22);秋季超排处理平均可用胚胎数和可用胚胎所占比例(7.53和91.67%)均显著高于冬季(5.97和74.90%).     

绵羊超数排卵和胚胎移植效果影响因素分析

作者1987年和1988年秋季进行的绵羊超排及移植试验表明,两个批号FSH处理,供体羊平均得可用胚胎分别为9.15±7.49和4.25±5.05枚(P<0.05);供体羊随年龄增长,可用胚胎有减少趋势;供体羊超排处理及冲卵时孕酮含量高,获得的有效胚胎多;供体羊发情第二天注射低剂量FSH对提高超排效果较好;受体羊同供体羊发情周期差在±1天及3h内将胚胎移入受体,对胚胎成活率均无明显影响;增加移植胚胎数可提高受胎率,但以移双胚较为适宜.     

不同处理方法对波尔山羊胚胎移植效果的影响

为了提高波尔山羊繁殖力,应用两种处理方法对波尔山羊进行了同期发情及超数排卵研究。结果表明:两种处理方法(PG-FSH法与CIDR-FSH法)对波尔山羊的同期发情率无显著差异(P>0.05),波尔山羊同期发情率达到92.5%;CIDR-FSH法处理的供体卵巢上的平均黄体数及平均采卵数均显著高于(P<0.05)PG-FSH法,而两者的平均获胚数与平均可用胚数差异不显著(P>0.05),说明CIDR-FSH法对波尔山羊的超排处理效果要优于PG-FSH法。试验还表明,移胚数量对受体妊娠率无显著影响(P>0.05),而对受体产羔率有极显著(P<0.01)的影响。移植双胚可以提高受体的产羔率。     

河南大尾寒羊超数排卵研究

对30只河南大尾寒羊进行超数排卵处理,研究不同激素、不同季节、不同输精方式以及重复超数排卵对其超数排卵效果的影响。结果表明:采用加拿大产FSH处理,河南大尾寒羊的只均黄体数(15.76)和只均获胚数(12.76)显著高于采用新西兰产FSH组(11.78、8.78);冬季处理的河南大尾寒羊的只均黄体数(18.11)、只均获胚数(14.84)和只均可用胚数(5.21)显著高于春季(13.44、9.44、3.78)和秋季处理组(11.61、9.56、2.72);采用350 mg/只剂量FSH处理,河南大尾寒羊只均黄体数(18.27)和只均胚胎数(14.53)显著高于300 mg/只剂量组(12.23、10.23),且优于400mg/只剂量组;腹腔内子宫角输精,河南大尾寒羊只均可用胚数(4.68)显著高于阴道输精处理(1.89);重复超数排卵各次之间的只均黄体数、只均胚胎数和只均可用胚数差异不显著。     

小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究

为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响,分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。结果表明:子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P0.01),而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P0.05),两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P0.05),说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著,且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。小鼠早期胚胎发育观察结果表明:超排处理后,在公母鼠合笼后76~79.5 h采胚,胚胎大多处于桑椹胚期,而在公母鼠合笼后88~91.5 h采胚,胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期;采用TCM199+15%胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。     

影响山羊重复超排主要因素的研究

研究了间隔情期数、超排次数和前次超排的黄体数及卵泡数对关中奶山羊重复超排效果的影响。结果证明,间隔一个情期进行1～3次重复超排获得的头均可用胚数显著少于对照组(P<0.05);而间隔两个情期进行1～2次重复超排的效果均接近对照组(P>0.05);前次超排有较多黄体和卵泡对间隔一个情期的重复超排均有不利影响。故关中奶山羊的重复超排宜在间隔两个情期后进行。     

布尔山羊胚胎移植试验研究

2001年9-12月份，应用2种超排方案对35只布尔山羊（其中经产羊30只，处女羊5只）进行了超排处理，并对180只受体进行了胚胎移植。结果表明：35只供体共回收胚胎471枚，可用胚为349枚，可用胚胎率为74.10％（349/471），每只平均获胚胎11.91枚，只均可用胚9.97枚。其中经产羊30只，平均每只获胚胎12.43枚，只均可用胚胎10.37枚；处女羊5只，平均每只获胚胎8.8枚，只均可用胚胎7.6枚。鲜胚移植受体180只，每只1枚，妊娠率为63.89％（115/180），另外，试验表明，不同剂量的FSH对超排效果也有一定的影响。     

影响绵羊、山羊超数排卵及胚胎移植效果因素分析

在生产条件下，对3个优良品种的127只绵羊（道塞特47只、萨福克49只、杜泊31只）和111只波尔山羊供体使用不同国别生产的促卵泡素（FSH）实施超数排卵处理，然后对1231只小尾寒羊和奶山羊受体实施不同方法的胚胎移植，旨在筛选出切合于生产实际成本低、效率高的超数排卵和胚胎移植方案。实验结果表明，使用新西兰产FSH对波尔山羊超数排卵后平均获得可用胚胎14枚／只，显著高于澳大利亚产FSH效果（平均7．59枚／只）（P〈0．05）．而中国科学院产FSH的超排效果（平均10．38枚／只）与新西兰产无显著性差异（P〉0．05）；进一步采用中国科学院产和新西兰产FSH分别对道塞特、萨福克和杜泊3个品种绵羊实施超数排卵结果，获得平均可用胚胎数均无显著性差异（P〉0．05）；使用腹腔内窥镜法和常规手术法胚胎移植结果表明，移植妊娠率分别为57．44％和60．20％．2种方法间无显著性差异（P〉0．05）。由于中国科学院产FSH价格便宜，而腹腔内窥镜法胚胎移植可大大缩短操作时间，两者结合可降低成本、提高效率，适宜羊胚胎移植产业化应用。     

不同处理方法对家兔超数排卵效果的影响

采用两种处理方法对家兔进行了超数排卵研究。结果表明:PMSG-HCG法处理的母兔卵巢上的平均排卵点数极显著(P<0.01)高于PMSG法,而PMSG-HCG法的平均囊肿卵泡数与平均卵泡数则显著(P<0.05)低于PMSG法;两种方法间的平均卵泡发育数则差异不显著(P>0.05)。说明PMSG-HCG法的超排效果明显优于PMSG法。试验还表明,母兔交配后28h采胚所获取的胚胎大多处于二细胞期,到交配后32h,胚胎多处于四细胞期。采用PMSG-HCG法进行超排处理,对家兔的胚胎发育无影响。     

性控冻精在肉羊胚胎移植中应用效果的研究

为进一步研究肉羊性控精液在胚胎生产上的应用,以萨福克、无角陶赛特纯种肉用绵羊为供体,本地小尾寒羊杂交后代和湖羊为受体,利用子宫角深部输精及一般人工授精等辅助生殖技术使用性控冻精与普通鲜精对两品种肉羊进行人工授精,统计不同品种肉羊的受胎率和可用胚数,对获得的性控胚胎和普通胚胎进行移植,并对比其移植效果。结果表明:萨福克肉羊和无角陶赛特肉羊超排后黄体数差异不明显(P>0.05);普通精液输精所获得的胚胎数极显著高于性控冻精(P<0.01);在受胎率上也做了比较,但差异不显著,受胎率43.2%。由于精液在通过流式细胞仪时,对精子顶体造成一定损伤,因此,无论是子宫角输精或阴道子宫颈输精均影响受精率,但性控精液的推广应用确实可以加速家畜遗传育种速度,缩短育种周期。鉴于此,今后对性控精液的研究重点应该放在精液分离过程中对精子的保护,以减少对精子的损伤。     

影响兔胚胎细胞核移植效率的因素

 对兔胚胎细胞核移植（NT）的有关影响因素进行了系统研究。结果发现电场强度100 V·mm-1，脉冲时间15μs，电脉冲3～4次的融合率显著高于其它组（P<0.05）；融合前激活卵母细胞，分裂率和囊胚率显著高于融合后激活（P <0.05）；当用8～16-细胞胚胎的卵裂球作供核时，卵裂率和囊胚率显著高于致密桑椹胚卵裂球为供核组；当重组胚在含3%发情牛血清（OCS）的TCM199中培养48 h后，转入含10% FCS的TCM199中继续培养，卵裂率和囊胚率显著高于一直在3% OCS或10% 胎犊血清（FCS）中培养的重组胚（P < 0.05）。将22枚2～4-细胞期重组胚移入同期发情的受体母兔输卵管内，34 d后产下NT仔兔1只。结果表明，电融合参数和供体胚胎的发育阶段以及受体卵母细胞的状态对NT效果有显著影响，在NT胚胎的不同发育阶段采用不同的血清种类和浓度可提高其胚胎发育能力。