新城疫病毒Ulster株血凝素-神经氨酸酶基因的克隆与鉴定

新城疫病毒Ｕｌｓｔｅｒ株经ＳＰＦ鸡胚增殖和超速离心纯化后，以酚－ＳＤＳ法提取其基因组ＲＮＡ，作为反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的模板。根据其已发表的Ｆ和ＨＮ基因核苷酸序列，合成一个长为３０ｍｅｒ的寡核苷酸（位于Ｆ基因内）和一对分别长为２８、３０ｍｅｒ的寡核苷酸（位于ＨＮ基因两侧）分别作为反转录引物和ＰＣＲ引物。扩增反应产物经琼脂糖凝胶电泳分析，出现一条长为１．９３ｋｂ的特异性条带，与预期相符。并将此特异性条带克隆入质粒载体ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（＋）中，并经限制性核酸内切酶分析（ＲＥＡ）。ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＥＡ结果证实其为新城疫病毒Ｕｌｓｔｅｒ株的血凝素－神经氨酸酶基因。     

犬冠状病毒RT—PCR检测方法的建立和初步应用

根据Ｗｅｓｅｌｉｎｇ发表的犬冠状病毒（ＣＣＶ）Ｋ３７８株纤突蛋白（Ｓ）基因序列，设计合成了４条寡聚核苷酸引物Ｐ１（１８ｂｐ，１５２０～１５３７ｂｐ）、Ｐ２（１９ｂｐ，２０７２～２０９０ｂｐ）和Ｐ３（２０ｂｐ，２６２１～２６４０ｂｐ）、Ｐ４（２０ｂｐ，２９４４～２９６３ｂｐ）。以此为引物，以从美国引进的ＣＣＶＮＬ－１８参考株反转录产物为模板，在国内首先建立了ＣＣＶＲＴ－ＰＣＲ方法，并初步应用于国内ＣＣＶ分离株的鉴定。结果表明，以Ｐ１、Ｐ２和Ｐ３、Ｐ４为引物，只能从ＣＣＶＮＬ－１８株反转录产物中扩增出大小分别为５７１ｂｐ和３４３ｂｐ核苷酸片段，与理论设计值大小一致，而正常ＣＲＦＫ细胞和狂犬病等５种对照病毒扩增结果为阴性。ＲＴ－ＰＣＲ可检出１μＬ做１０５和１０３倍稀释的ＣＣＶＮＬ－１８株反转录产物，说明其具有很高的敏感性。初步应用试验结果，可从２株国内分离的ＣＣＶ反转录产物中扩增出５７１ｂｐ和３４３ｂｐ核苷酸片段。通过本研究不仅建立了敏感、特异的ＣＣＶＲＴ－ＰＣＲ检测方法，也为其Ｓ基因的克隆和序列测定奠定了基础。     

禽传染性支气管炎病毒免疫原基因的PCR获取及其酶切鉴定

分绍用ＲＴ－ＰＣＲ（反转录－聚合酶链反应）获取禽传染性支气管炎病毒Ｍ４１株和广东地方致弱株Ｄ４１免疫原（Ｓ１）基因的详细方法，所用引物为ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列，跨幅为１．７ｋｂ，结果表明，两株病毒所获的ＰＣＲ产物与预期的一致；用此对引物，以ＩＢＶ Ｄ４１株Ｓ１基因ＰＣＲ产物为模板，扩增出一样的ＤＮＡ片段，试验还显示，国内外几家公司有关ＲＴ和ＰＣＲ的分子生物学试剂可以兼用     

猪生殖和呼吸综合征中国分离株ORF5基因的克隆及序列分析

本研究利用对应于ＰＲＲＳＶＡＴＣＣＶＲ－２３３２株及ＬＶ株ＯＲＦ５基因保守序列的１对均为２５个碱基的引物１００５ＰＳ、１００６ＰＲ对ＰＲＲＳＶ中国分离株Ｂ１３进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增出了包括完整ＯＲＦ５基因的ＤＮＡ片段,片段长约７３０ｂｐ。将此片段定向克隆入ｐＵＣ１８载体的ＥｃｏＲＩ和ｓｔＩ位点之间,获得了Ｂ１３ＯＲＦ５基因与ｐＵＣ１８载体的重组质粒。通过ＥｃｏｒＩ／ＰｓｔＩ、ＥｃｏｒＩ／ＨｉｎｄⅢ     

马立克氏病毒Z4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ４毒株第１０代（Ｚ４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代至第３０代（Ｚ４－３０），Ｚ４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化，分别以Ｚ４－１１，Ｚ４－２５和Ｚ４－３０细胞结合毒作单介疫苗，将Ｚ４－１１，Ｚ４－２０和Ｚ４－３０细胞结合毒分别与ＦＣ１２６细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒     

粒细胞系集落刺激因子对慢性肾功能衰竭患者影响的研究

为研究粒细胞系集落刺激因子对慢性肾功能衰竭的影响，方法；以酶标免疫测定法检测了３１例ＣＲＦ患者血清及尿－ＧＣＳＦ水平及４０例健康人血清及尿Ｇ－ＣＳＦ水平，并进行了相关分析。结果：ＣＲＦ患者血清及尿－ＧＣＳＦ水平分别是２４．１４±２．１ｐｇ／ｍｌ和３０．７２±１．８３ｐｇ／ｍｌ，高于健康对照组，Ｐ〈０．００１；ＣＲＦ血清Ｇ－ＣＳＦ与ＢＵＮ，Ｓｃｒ均无相关性，但血Ｇ－ＣＳＦ与尿Ｇ－ＣＳＦ水平呈正相关。     

马立克氏病毒Z_4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ＿４毒株第１０代（Ｚ＿４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代全第３０代（Ｚ＿４－３０），Ｚ＿４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化。分别以Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０，Ｚ＿４－２５和Ｚ＿４－３０细胞结合毒作单价疫苗，将Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０和Ｚ＿４－３０细胞结合毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒ＧＡ株攻击，进行免疫效力试验。结果表明，Ｚ＿４毒株４个代次单价苗之间以及３个代次毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）毒株组成的二价疫苗之间免疫效力无显著差异。表明Ｚ＿４毒株在ＣＥＦ单层上从第１０代连续传至第３０代，仍然保持其原有的培养特性和免疫原性。     

芜菁花叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果；从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍＬ蛋白酶Ｋ和０．５％ＳＤＳ处理，苯酚／氯仿和氯仿抽提两次，酒精沉淀，获得了纯化的病毒ＲＮＡ，该ＲＮＡ与ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）＿（１５）退火后，在ＡＭＶ反转录酶的作用下合成了单链ｃＤＮＡ，然后加入用以扩增ＴｕＭＶ－ＣＰ基因的上下游引物，３５个循环后，得到了一条长约０．８５ｋｂ的片段，将该片段克隆到ｐＵＣ１８质粒的ＳａｌⅠ限制性酶切位点，分析了限制性酶切图谱，分析表明该片段含有ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ以及引物设计时带人的ＭｃｏⅠ三个酶切位点，该片段克隆到大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）原核表达载体ｐＫＫ２３３－２质粒的ＮｃｏⅠ和ＨｉｎｄⅡ位点后，经ＩＰＴＧ诱导，以该病毒的抗血清为第一抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测该基因的表达产物，结果表明该基因的表达产物为ＴｕＭＶ－ＣＰ蛋白，因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。     

微量板杂交法和斑点杂交法检测菊花矮化类病毒的比较

利用狄高辛（ＤＩＧ）标记制备菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）特异性探针，由反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行ＣＳＶ ＲＮＡ的反转录和ｃＤＮＡ的扩增，然后比较２种核酸杂交方法－微量板杂交和斑点杂交检测ＣＳＶ的灵敏度。本研究结果表明，３０ｍｇ干燥样本抽提的ＣＳＶ ＲＮＡ被稀释４００倍，取４μＬ（约７５０ｐｇ样本抽提的ＲＮＡ）经ＲＴ－ＰＣＲ，其产物再用１０×ＳＳＣ稀释１００倍，采用微量板杂交仍可很容易得到     

四种检测猪的繁殖与呼吸综合征病毒血清抗体方法的比较

本试验利用猪的繁殖与呼吸综合征病毒美洲株和上海分离株ＳＨ１建立了ＩＦ，ＩＰＭＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ三种抗体检测方法，对１２０份随机抽样猪血清检测表明，美洲株原组ＩＦＡ的阳性率为３０．８％，ＩＰＭＡ的阳性率为３０％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为３２．５％，ＳＨ１分离株抗原组ＩＦＡ的阳性率为３７．５％，ＩＰＭ阳性率为３７．５％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性率为４０％，进口ＥＬＩＳＡ试剂盒的检测阳性率为２６     

鸡白介素-6(ChIL-6)基因的克隆与序列分析

分别用鸡传染性法氏囊病病毒感染和用ConA免疫刺激健康鸡，无菌取处理鸡的脾脏，匀浆后用Tr-izol抽提细胞总RAN，应用随机引物反转录获得cDNA，设计引物，经PCR扩增获得鸡白介素-6（ChIL-6)基因，应用pGEM-T载体克隆该基因，经测序，表明其与Gene Bank中公布的唯一的一个ChIL-6基因为同源基因。     

动脉粥样硬化患者血清TNF—α,IL—6和IL—8的变化及其关系探讨

目的：通过检测动脉粥样硬化（ＡＳ）患者血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）白细胞介素６（ＩＬ－６）和白细胞介素８（ＩＬ－８）的水平，以探讨ＡＳ与这些细胞因子的关系及临床意义，方法：采用双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ测定４５例ＡＳ患者及３０例健康者（对照组）血清ＴＮＦ－α，ＩＬ－６和ＩＬ－８水平均显著高于正常人（均Ｐ〈０．００１），且ＴＮＦ－α，水平与ＩＬ－６和ＩＬ－８，ＩＬ－６与ＩＬ－８之间构成正相关，（ｒ分别     

籼,粳型光（温）敏核不育系的不育基因等位性的研究

１９９０－１９９１年分析了农垦５８Ｓ及其转育的光（温）敏核不育系相互杂交的Ｆ１，Ｆ２，Ｆ３等植株在武汉自然长光照或遮光短日照条件下的育性表现，结果表明，粳型光敏核不育系７００１Ｓ，１５１４Ｓ，３１１１１Ｓ和３３００１Ｓ的光敏不育基因均来源于农垦５８Ｓ，相互间还存在着微效修饰基因的差异，但灿型核不良系Ｗ６１５４Ｓ和Ｗ７４１５Ｓ的不育基因座位可能不相同，Ｗ７４１５Ｓ的光敏不育基因来源于农垦５８Ｓ，Ｗ６     

鸡传染性贫血病毒ORF2基因的扩增及酶切分析

根据鸡传染性贫血病毒ＣＵＸ－１标准毒株ＤＮＡ序列中ＯＲＦ２基因片段设计一对引物，对ＣＵＸ－１进行扩增，得到参小为６８４ｂＰ的片段，符合设计目的。以疑似ＣＩＡＶ的分离物ＳＲ４３感染鸡马立克氏病淋巴瘤细胞，提取全细胞ＤＮＡ，用该引物进行扩增，也得到同样大小的片段。     

玉米C型胞质不育恢复主基因SSR标记

 通过对恢复系凤可 １、Ａ６１９与 Ｃｍｓ－Ｃ２３７、Ｃｍｓ－ＣＭｏ１７组配的 Ｆ２和 ＢＣ１分离群体的研究结果表明：凤可 １有两对重叠恢复基因 Ｒｆ４和Ｒｆ５。用微卫星标记（ＳＳＲ）将凤可１中的恢复主基因Ｒｆ５定位在第 ５染色体长臂上，与引物 ｂｎｌｇ１７１１、ｂｎｌｇ１３４６和 ｐｈｉ０５８紧密连锁，距 ３个引物的遗传距离分别为 ７．５１ｃＭ、１．６８ｃＭ、９．８７ｃＭ；恢复主基因 Ｒｆ４与第８染色体短臂上的引物ｂｎｌｇ２３０７连锁。     

水稻完全显性早熟性的发现和基因定位

 研究发现早釉核不育系６４４２Ｓ－７具有完全显性早熟特性，它与１３个不同类型的中、迟熟品种杂交，Ｆ１抽稳期与６４４２Ｓ－７完全相同或十分相近。对Ｆ２和 Ｂ１Ｆ１遗传分析表明该早熟性主要受２对显性基因控制。利用Ｆ２群体和４种分子标记技术，将６４４２Ｓ－７携带的１个显性早熟基因定位于水稻第３染色体短臂靠近端部一侧，该基因与ＲＡＰＤ标记ＯＰ１１１．５５７、ＳＳＲ标记 ＲＭ２２、ＲＭ２３１、ＲＦＬＰ标记Ｃ５１５和 ＡＦＬＰ标记ＰＴ６７１的遗传距离分别为１．５、３．０、６．７、１０．９和１２．４ｃＭ。该基因系首次发现并定位，暂命名为Ｅｆ－ｃｄ（ｔ）６４４２Ｓ－７作为完全显性早熟性种质资源，对水稻遗传改良具有重要的应用价值。     

温度对籼型光敏不育性遗传表现的影响

以培矮６４Ｓ与早籼Ｖ２０,中籼南京１１和晚籼２３１－８,１１０３Ｓ与６０７８杂交Ｆ２为材料,研究了自然长日高温下育性分布特性和不育性的遗传表现。经Ｋｏｌｍｏｇｒｏｖ－Ｓｍｉｒｎｏｖ检验,长日高温下不育性完全表达,４个群体育性分布相同,χ＾２测验表明,除培矮６４Ｓ×Ｖ２０Ｆ２外,其它３个群体均符合２对基因分离。对不育峰而言,除培矮６４Ｓ×Ｖ２０Ｆ２和培矮６４Ｓ×２３１－８Ｆ２表现不明显外,培矮６４Ｓ     

长链寡核苷酸生物合成方法的研究

化学合成长链寡核苷酸面临许多困难,本研究通过对长链寡核苷酸生物合成方法的研究,成功合成并纯化了长链寡核苷酸,其长度达到146 nt,并且其序列没有错误。生物合成的基本方法是:首先用一对PCR引物扩增DNA模板,该引物分别带有双链DNA限制性内切酶的识别序列、双链DNA单链切刻酶的识别序列;然后,PCR产物被克隆到质粒中;质粒经过酶切、聚丙烯酰胺凝胶电泳、回收、纯化、冻干脱水等步骤,最后得到高质量的长链寡核苷酸。     

传染性支气管炎病毒T株核衣壳蛋白（N）基因的克隆及部分序列分析

人工合成一双对应于ＩＢＶ－Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｎ基因ＯＲＦ两侧序列的引物,应用ＲＴ－ＰＣＲ方法,获得肾型传染性支气管炎病毒Ａｕｓｔｒａｌｉａ－Ｔ株核衣壳蛋白基因,长度１．２３ｋｂ,利用引物设计中的ＥｃｏＲ Ｉ位点将其克隆至载体ｐＳＫ（＋）中,对该基因进行限制性酶切分析。结果与已报道的相一致。通过Ｎ基因的Ｃ端部分序列分析及与Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株、Ｍ４１标准株和日本分离株相比较,结果表明该部分的序列有     

铝阳极氧化膜的界面性能与常温封闭

采用电渗法研究了几种电解质溶液对铝阳极氧化多孔膜界面性能的影响．结果表明，含有Ｆ－，ＳｉＯ２－３，ＰＯ３－４，Ｓ２Ｏ２－３和酒石酸根等的电解质溶液，使多孔膜的等电点ｐＨＩＥＰ由原来的９．２０分别移至３．４０，３．３０，４．３０，３．９０和３．８０，膜的带电性能发生了相应的变化．多孔膜带电性能的变化有利于常温封闭液中的金属离子进入多孔膜内，同时Ｆ－，Ｓ２Ｏ２－３还可通过与膜内Ｈ＋，Ｈ２Ｏ等的相互作用，使膜孔内ｐＨ升高，从而加速金属离子在膜内的水解沉积，促进常温封闭的进行．