锦鲤人工雌核发育早期胚胎观察

以团头鲂灭活精子为诱导,采用热休克染色体加倍处理方法进行锦鲤雌核发育。锦鲤卵为黏性卵,置于(20±1)℃室内平皿孵化,50 min后开始卵裂,6 h后出现囊胚期,18.67 h后出现原肠胚期,30 h后出现神经胚期,39 h后器官开始形成,约3 d后可以脱膜孵化,孵化率达68.5%。     

牙鲆单倍体、三倍体、雌核发育二倍体和普通二倍体胚胎发育的比较

在水温为(16.0±0.5)℃、pH为8.0～8.3、盐度为30.2的条件下,对牙鲆Paralichthys olivaceus单倍体、三倍体和雌核发育二倍体胚胎发育的过程与普通二倍体牙鲆的发育进行了比较.结果表明:单倍体胚胎脊柱弯曲,器官分化不全,受精率低,畸形率高,出膜率低;三倍体和雌核发育二倍体胚胎与普通二倍体牙鲆的发育时序基本相同,受精卵经过卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、卵黄栓胚、克氏囊胚、尾芽胚、心跳胚、出膜期等阶段孵化出膜,各阶段除发育时间不同外,发育特征与发育分期没有明显差别;普通二倍体胚胎约61 h孵化出膜,而三倍体和雌核发育二倍体分别经66 h 30 min和67 h 50 min孵化出膜,孵化时间比普通二倍体牙鲆长约10%.其中,卵裂期三倍体和雌核发育二倍体在细胞分裂阶段发育特别缓慢,发育时间比普通二倍体长约25%.单倍体出膜率为(16.5±2.2)%,畸形率为(97.2±1.6)%;雌核发育二倍体出膜率为(85.6±3.0)%,畸形率为(13.2±2.3)%;三倍体出膜率为(82.3±3.1)%,畸形率为(16.3±2.5)%.与普通二倍体牙鲆相比,三倍体和雌核发育二倍体胚胎出膜率低,仔鱼畸形率高.     

用团头鲂精子诱导红白锦鲤雌核发育研究

[目的]研究用团头鲂（Megalobrama amblycephala）精子诱导红白锦鲤（Cyprinus carpioL.）雌核发育。[方法]用紫外线灭活的团头鲂精子刺激性成熟的红白锦鲤卵子,进行雌核发育,并采用热休克方法诱导染色体加倍。[结果]成功获得了红白锦鲤雌核发育二倍体鱼苗28尾。诱导红白锦鲤雌核发育的最佳条件为：团头鲂精子采用紫外线照射20min后,在孵化水温20~22℃条件下,与红白锦鲤卵子授精后3min进行热休克处理,41℃水温下持续处理2min,此时雌核发育率最高（1.78%）。形态学比较表明,单倍体与雌核发育F1代二倍体和正常二倍体在发育过程中存在明显差异,从肌节开始沉积大量黑色素,胚体扭曲严重,呈＂C＂型;而雌核发育二倍体与正常二倍体对照组相比,在体长、体高、体色和卵黄囊长等方面都极为相似。[结论]该研究为进一步探讨红白锦鲤色素遗传机制及定向培育优良新品种奠定了基础。     

黄姑鱼正常二倍体和雌核发育体胚胎发育及早期生长的比较研究

对黄姑鱼正常二倍体（N）、雌核发育二倍体（G）和单倍体（H）的胚胎发育进行观察,并对其早期生长情况进行比较。结果显示：（1）受精率N>H>G,孵化率N>G>H,畸形率H>G>N,72 h成活率N>G>H;（2）正常二倍体胚胎经21 h 10 min孵化出膜,雌核发育二倍体和单倍体孵化出膜分别用时23 h 10 min和23 h 30 min;雌核发育二倍体发育滞后主要出现于原肠早期和孵出期,单倍体滞后出现于原肠晚期。从形态上看,单倍体胚胎呈现典型的单倍体综合症,雌核发育二倍体和正常二倍体胚胎发育形态正常且两者无明显差异。各组死亡高峰均出现在原肠晚期,单倍体组开口前全部死亡;（3）60日龄之前雌核发育二倍体生长速度明显慢于正常二倍体且个体间差异较大。     

用热休克法诱导虹鳟雌核发育二倍体的研究

采用经紫外线照射后遗传上失活的精子激活卵子,用热休克法诱导虹鳟Oncorhynchus mykiss减数分裂雌核发育二倍体。对影响诱导效果的紫外线照射精子的剂量及28℃热休克处理的持续时间和处理起始时刻进行了研究。结果表明:紫外线照射精子的最佳条件为照射距离8 cm、照度6 670μW/cm2、照射时间15 min;获得虹鳟减数分裂雌核发育二倍体的最佳参数为受精后20 min,28℃热休克处理10、15 min,雌核发育率为14.28%~37.75%。     

人工雌核发育红草金鱼体色的定向发育研究

[目的]探讨人工雌核发育红草金鱼F1代的体色发育方向及其与母本的差异性,为观赏鱼类优质体色的定向培育奠定基础.[方法]采集兴国红鲤和黄锦鲤的精子,经紫外光照射失活后,分别刺激红草金鱼成熟卵细胞,受精卵经冷冻休克、染色体加倍处理后进行人工孵化,即获得雌核发育的二倍体,并以兴国红鲤(♂)、黄锦鲤(♂)与红草金鱼(♀)杂交的二倍体为对照,分别计算其孵化时长和孵化率,统计F1代体色和体形的表型及比例.[结果]以兴国红鲤和黄锦鲤的失活精子诱导红草金鱼雌核发育产生F1代个体,其孵化率分别为8.1％和1.7％,孵化时长分别为92和97 h;且均以红色个体(含桔红色和淡红色)为主,分别占98.6％和99.3％,夹杂有少量青灰色和黄灰色个体.雌核发育F1代红色个体均显母本形态,呈鲫鱼型;青灰色和黄灰色个体则略带父本形态,形体介于鲫鲤之间.根据生长发育过程中鱼体体色发生生理的转变进程,可将红草金鱼雌核发育F1代鱼苗的体色转变进程划分成5个阶段.[结论]异源失活精子诱导红草金鱼雌核发育的F1代个体可定向发育成母本体色,因此应用人工雌核发育技术结合体色选育技术,可定向培育高档观赏鱼类的优质花色.     

温度对黄鲷胚胎发育的影响

研究了孵化水温对黄鲷胚胎发育的影响。结果表明:在16~26℃范围内,黄鲷胚胎都能孵出仔鱼,孵化速度随水温上升而加快。其中18~22℃是黄鲷胚胎孵化的最适温度,孵化率最高,20℃时达89%,畸形率最低;受精卵42 min细胞开始分裂,3 h 30 min为多细胞期,7 h为囊胚期,22 h胚孔关闭,37 h仔鱼开始孵出,孵出仔鱼健壮活泼。当水温高于26℃或低于16℃时,黄鲷胚胎不能孵出仔鱼;水温低于14℃时胚胎发育停止于高囊胚,12 h后受精卵开始变浊死亡;水温高于28℃时,胚胎发育至多细胞期,胚盘聚合死亡。黄鲷胚胎发育的有效积温为422.2~483.6(h.℃)。黄鲷发育的阈温度为7.88℃     

温度对黄鲷胚胎发育的影响

研究了孵化水温对黄鲷胚胎发育的影响。结果表明:在16~26℃范围内,黄鲷胚胎都能孵出仔鱼,孵化速度随水温上升而加快。其中18~22℃是黄鲷胚胎孵化的最适温度,孵化率最高,20℃时达89%,畸形率最低;受精卵42 min细胞开始分裂,3 h 30 min为多细胞期,7 h为囊胚期,22 h胚孔关闭,37 h仔鱼开始孵出,孵出仔鱼健壮活泼。当水温高于26℃或低于16℃时,黄鲷胚胎不能孵出仔鱼;水温低于14℃时胚胎发育停止于高囊胚,12 h后受精卵开始变浊死亡;水温高于28℃时,胚胎发育至多细胞期,胚盘聚合死亡。黄鲷胚胎发育的有效积温为422.2~483.6(h.℃)。黄鲷发育的阈温度为7.88℃     

花(♀)×唇(♂)杂交子一代胚胎发育研究

采用人工催产和干法授精技术,在ZOOM645S解剖镜下对花(Hemibarbus maculatus)(♀)×唇(H.labeo)(♂)杂交子一代(F1)胚胎发育过程中各发育时期的发育时序和形态特征进行了观察。结果表明,受精卵为强黏性卵,卵径为1.60～1.80 mm。在孵化水温为(20±1)℃条件下,受精后1 h胚盘隆起;1 h20 min进入卵裂期;6 h 20 min进入桑椹期;8 h 20 min进入囊胚期;13 h 10 min进入原肠期;16 h 20min进入神经胚期;受精后18 h进入胚孔封闭期;21 h 30 min进入肌节出现期;27 h 20 min进入眼基出现期;28 h 40 min进入眼囊期;30 h 40 min进入尾芽期;32 h 30 min进入晶体出现期;34 h 40 min进入肌肉效应期;36 h 40 min进入耳石出现期;44 h进入心跳期;53 h 40 min进入眼色素形成期;60 h 40min进入血液循环期;68 h 30 min后开始出膜。杂交F1胚胎发育时序及形态特征均偏向母本花。     

海南长臀(鱼危)人工繁殖与胚胎发育的研究

使用LHRH-A2+DOM+PG混合催产剂对从海南引进经池塘驯化养殖5冬龄的海南长臀(鱼危)进行催产,并用日产80i光学显微镜观察胚胎发育过程.取得平均催产率88.9%,平均受精率82.3%,平均孵化率68.7%的效果.成熟的卵子为圆球形、淡黄色、粘性卵.在水温24.8～27.0 ℃条件下,其受精卵经细胞期、囊胚期、原肠期、体节出现期、器官出现期和出膜前期等多个发育时期孵化出膜,所需时间为82 h 15 min.拍摄了胚胎发育照片25幅.     

人工诱导盘鲍异源雌核发育多倍体的初步研究

通过预实验,观察和了解在24．8℃下九孔鲍精子与盘鲍卵子授精,及其受精卵第一极体和第二极体出现的时间．采用不同浓度的乙烯脲失活九孔鲍精子的遗传物质,确定其最佳处理浓度和处理时间．遗传物质失活的九孔鲍精子和盘鲍卵子授精,用CB进行不同持续处理时间抑制受精卵第一极体和第二极体出现的方法诱导多倍体．实验结果表明,在水温24．8℃下,作为失活九孔鲍精子遗传物质的乙烯脲,当其质量分数为0．5‰和处理时间为10min是比较适宜的;用遗传物质失活的九孔鲍精子与盘鲍卵子授精,在授精后10min,用浓度为1．0mg·dm-13的cB持续处理受精卵24min,表观三倍体率达65％以上,表观四倍体率达5％左右．稚鲍的倍性检查中,雌核发育多倍体占总多倍体数的80％,杂交多倍体占20％．盘鲍异源雌核发育的三倍体率达到93％,四倍体率为3％左右．     

滇池高背鲫人工繁殖与胚胎发育观察研究

对体重200~300 g的三倍体全雌性滇池高背鲫进行人工催产试验,雄鱼选择体重180 g左右的云南光唇鱼和100 g左右的短须裂腹鱼,利用雄鱼精液刺激滇池高背鲫卵子,观察受精卵雌核发育情况。结果表明,雌鱼注射500 IU/kg鱼体重的HCG(水温14℃左右),15~18 h后可进行人工催产,平均催产率93%。受精卵胚体呈青绿色,比重大于水,黏性强,平均卵径1.8 mm;受精卵经历胚盘隆起期、细胞分裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、胚孔封闭期、肌节出现期、眼囊期、尾牙期、尾泡期等16个阶段、23个时序。水温12.5~14.2℃条件下历时10 493 min出膜,初孵仔鱼全长6.1 mm。滇池高背鲫受精率81%,孵化率77%。     

团头鲂雌核发育后代的微卫星标记分析

采用松浦镜鲤(Cyprinus carpio Songpu carp)的紫外线遗传灭活精子刺激团头鲂(Megalobrama amblycephala)卵子后冷休克抑制卵子第二极体释放方法,获得团头鲂雌核发育个体。流式细胞仪检测雌核发育个体的DNA含量与正常团头鲂二倍体的DNA含量并没有显著性差异,表明雌核发育个体为二倍体。通过引物优化,筛选父母本具有特异性的8对微卫星引物,对雌核发育后代进行检测,结果表明雌核发育个体的遗传物质均来自母本,没有父本的遗传物质渗入。筛选出母本为杂合的10对微卫星引物对子代的纯合性进行评价,结果显示雌核发育后代在TTF-EST46、TTF-EST61、TTF-EST851位点全部为纯合,而TTF-EST12座位上的重组率为86.4%,其他6个位点的重组率为100%,这10个位点的平均重组率为68.64%。试验结果表明,通过抑制第二极体并不能获得纯合性较高的团头鲂雌核发育个体,但具有与母本较高的遗传同质性,可以作为良好的育种材料使用。     

雌核发育翘嘴鲌胚胎发育和形态特征的研究

在成功获得翘嘴鲌减数分裂型雌核发育鱼的基础上,观察比较了雌核发育胚胎与单倍体胚胎和普通胚胎的发育特征及时序差异,探讨了冷休克处理对胚胎发育的影响及完善雌核发育胚胎孵化管理的措施,并对雌核发育翘嘴鲌成鱼进行了形态学特征分析。结果表明:(1)与普通胚胎相比,雌核发育胚胎受精率较低且仔鱼畸形率较高,单倍体孵化率极低。(2)雌核发育组胚胎出现不规则细胞分裂、卵膜破裂、卵黄囊凝集及单倍体综合征等现象,其中原肠期和出膜前期为胚胎死亡高峰期。(3)雌核发育二倍体与普通胚胎的发育特征相似,卵裂至原肠期阶段发育特别缓慢,原肠期以后,各期发育所用时间与普通胚胎基本相同;单倍体胚胎卵裂开始至囊胚阶段,发育速度与普通胚胎无明显差异,在原肠期阶段发育滞后,其他时期一直处于缓慢状态,仔鱼具有明显的单倍体综合症。(4)雌核发育系体型较普通翘嘴鲌已经发生了一定的变化。     

凡纳滨对虾胚胎发育进程及诱导染色体加倍时间确定

[目的]了解凡纳滨对虾胚胎发育的时序及特征,为其雌核发育诱导中染色体加倍最佳操作窗口的确定及人工苗种生产提供参考依据.[方法]以人工培育成熟凡纳滨对虾“桂海1号”的受精卵为研究对象,观察并描述不同水温下卵子从产出受精至幼体孵化出膜的整个胚胎发育过程.[结果]根据凡纳滨对虾胚胎发育的形态特征变化,可分为7个阶段：受精卵期、卵裂期、囊胚期、原肠期、肢芽期、膜内无节幼体期和出膜幼体期.凡纳滨对虾受精卵在水温30.5℃、盐度28.6‰的条件下,整个胚胎发育过程需11.5～11.8 h.水温变化对凡纳滨对虾受精卵极体的排出和孵化时间有明显影响,水温每下降1℃,孵化时间需增加0.6h;在28.0～30.5℃的水温范围内,受精卵第一极体释放时间为7～13 min,第二极体释放时间为8～14 min,整个胚胎发育过程需11.5～13.0 h.其中,在30.5℃的水温条件下,第一极体释放的时间为7～9 min,第二极体释放的时间为8～10 min,即在水温30.5℃、盐度28.6‰的条件下,凡纳滨对虾受精卵染色体加倍诱导的最佳时间在卵子受精后8～10 min.[结论]在确保凡纳滨对虾受精卵正常发育的前提下,适当调低培育水温能延迟胚胎发育速度,为人工诱导受精卵染色体加倍创造较充足的操作窗口期.此外,受精卵是否均等分裂是判断凡纳滨对虾卵子受精与否的重要标准.     

孵育和激活剂作用时间对山羊核移植胚胎早期发育的影响

探讨了电融合前对重构卵继续孵育及激活剂6-DMAP不同作用时间对山羊核移植胚胎体外发育的影响。结果显示,重构卵在成熟液中继续培养后,9~10 h组的融合后卵子死亡率(27.42%)显著低于30 min和90 min组(49.26%和56.3%)(P0.05),胚胎卵裂率(68.15%)则显著高于30 min和90 min组(55.6%和54.24%)(P0.05);重构卵用离子霉素激活后,再用6-DMAP激活0 h、2 h、3 h、4 h、5 h及8~10 h,各组间的胚胎卵裂率均无显著差异(P0.05),但均显著高于未用6-DMAP组的卵裂率(P0.05)。本试验结果表明,电融合前,继续成熟培养重构卵有利于降低电融合时的卵子死亡率,提高卵子利用率;联合使用离子霉素和6-DMAP有利于提高激活效果,而6-DMAP的作用时间(2~10 h)不影响核移植胚胎的卵裂。     

盘丽鱼胚胎发育的研究

[目的]了解盘丽鱼的胚胎发育过程。[方法]对盘丽鱼胚胎发育过程进行观察,研究其胚胎发育的形态特征和发育特点。[结果]盘丽鱼的成熟卵子为粘性,呈椭球形,其纵轴和横轴分别为1.02~1.14 mm和0.75~0.79 mm。盘丽鱼的胚胎发育过程包括卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚形成期、器官形成期和孵化出膜期6个时期。在水温(30±1)℃的条件下,整个胚胎发育过程约需50 h。受精卵约50 min后进入卵裂期,3 h后进入囊胚期,9.50 h后进入原肠胚期,20 h后胚孔封闭,50 h后出膜。刚出膜的仔鱼全长为4.29 mm。盘丽鱼卵裂前期和原肠胚期发育较快,而器官形成期发育相对较慢。盘丽鱼孵化总积温为(1 500±50)℃.h。[结论]盘丽鱼与尼罗罗非鱼胚胎发育过程相似,说明它们具有较近的亲缘关系。     

日本黄姑鱼胚胎发育及温度对其过程的影响

用Nikon显微镜观察了日本黄姑鱼胚胎发育全过程,并比较了受精卵在13种温度下胚胎的发育状况。结果表明：在水温为20～22.5℃、盐度29.9和pH 8.2条件下,从受精卵至孵化出膜总历时34 h 55 min,胚胎发育过程可划分为21期;孵化水温对受精卵的孵化率、畸形率和孵化时间有显著影响,孵化时数（h）、孵化积温（A）与平均水温（θ）密切相关,h=4265.9θ-1.547 9,A=3.420 1θ2-168.99θ＋2 786.1;有效积温为480.04～553.96℃.h,阈温度为7.01℃,但实际孵化水温须高于12℃,14～28℃胚胎均能正常孵化。适宜孵化水温为17～22℃,孵化率高于89%,畸形率低于16%。     

海南长臀鮠人工繁殖与胚胎发育的研究

使用LHRH—A2＋DOM＋PG混合催产剂对从海南引进经池塘驯化养殖5冬龄的海南长臀鲍进行催产,并用日产80i光学显微镜观察胚胎发育过程。取得平均催产率88．9％,平均受精率82．3％,平均孵化率68．7％的效果。成熟的卵子为圆球形、淡黄色、粘性卵。在水温24．8～27．0℃条件下,其受精卵经细胞期、囊胚期、原肠期、体节出现期、器官出现期和出膜前期等多个发育时期孵化出膜,所需时间为82h 15min。拍摄了胚胎发育照片25幅。     

海南长臀鮠人工繁殖与胚胎发育的研究

使用LHRH—A2＋DOM＋PG混合催产剂对从海南引进经池塘驯化养殖5冬龄的海南长臀鲍进行催产,并用日产80i光学显微镜观察胚胎发育过程。取得平均催产率88．9％,平均受精率82．3％,平均孵化率68．7％的效果。成熟的卵子为圆球形、淡黄色、粘性卵。在水温24．8～27．0℃条件下,其受精卵经细胞期、囊胚期、原肠期、体节出现期、器官出现期和出膜前期等多个发育时期孵化出膜,所需时间为82h 15min。拍摄了胚胎发育照片25幅。