裂叶牵牛突变体的研究(英文)

[目的]了解裂叶牵牛花色、叶色等变化机理。[方法]通过田间调查,利用PCR技术从裂叶牵牛蓝白相间突变株幼叶组织中扩增出目的片段,构建重组质粒pMD18-T/Tpn。[结果]田间调查结果发现,变异株的F3代发生分离,叶色突变并不影响花色的变化;PCR扩增结果表明,以蓝白、纯蓝、大花基因组DNA在330bp处各有1条特异带,而春光、白雪、平安红、垂蔓都没有特异带出现。[结论]变异株重组质粒序列为裂叶牵牛的转座子序列片段。     

矮牵牛花特异表达启动子PchsA的克隆及蓝色基因F3′5′H表达载体的构建

[目的]克隆花特异表达启动子PchsA,将此启动子与蓝色基因“F3′5′H”构建新的表达载体,拟以该启动子驱动“F3′5′H”在其他花色中特异表达。[方法]根据GenBank报道的矮牵牛启动子的序列设计并合成一对特异引物,以蓝紫色矮牵牛总DNA为模板,用PCR仪扩增目的片段。[结果]PCR扩增出的启动子DNA片段长约550bp,回收后连接到PGM-T质粒载体上,经转化、筛选确定重组子,酶切鉴定后送上海生工生物工程公司测序,得到片段长度为553bp。经DNAMAN软件分析和GenBank上BLAST序列比对,显示序列与已报道序列同源性为98．55％。应用pcgene软件进行序列分析,结果表明试验克隆的启动子含有启动子所必须的所有调控元件,这与报道的序列基本一致。[结论]试验成功地克隆了CHSA启动子并将其与“F3′5′H”构建成能够在植物中进行道传转化的表达载体,为培育新型花色新品种奠定了基础。     

吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段的克隆及蛋白抗原性预测

[目的]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆与序列分析。[方法]从细胞培养的吉林株虫体中提取犬新孢子虫DNA,根据已发表的犬新孢子虫鲥G1基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,采用PCR技术,扩增大新孢子虫SAG1基因片段,并成功克隆到pMD18-T simple载体上,对经PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列分析。[结果]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆后,获得阳性重组质粒。克隆的SAG1基因片段长780bp,编码260个氨基酸,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列（AF132217）的同源性为99．0％,氨基酸序列同源性为98．8％。通过分子生物学软件对翻译水平进行预测,发现吉林株核苷酸序列并不影响氨基酸翻译与蛋白质的表达。[结论]该试验成功克隆重组质粒,为建立犬新孢子虫的高效表达系统奠定了基础。     

溶藻弧菌III型分泌系统vscC基因缺失株的构建(英文)

[目的]构建未引入任何遗传标记物的溶藻弧菌vscC基因框内缺失突变株。[方法]首先以溶藻弧菌ZJ51-O基因组DNA为模板,用重叠延伸PCR(gene splicing by overlapext ension PCR,SOE-PCR)扩增法构建体外vscC基因缺失片段;扩增产物经酶切后连接至自杀质粒pDM4,再转化入大肠杆菌SY327进行克隆,筛选阳性克隆子并进行PCR分析鉴定;提取阳性克隆子的自杀重组质粒pDM4-△vscC,用热休克法将其转入到大肠杆菌S17-1中,再经接合生殖的方式将自杀重组质粒导入溶藻弧菌ZJ51-O菌株中,利用抗生素筛选策略与蔗糖反向筛选系统,挑选疑似目的突变菌株,最后利用PCR鉴定与测序分析进行确证。[结果]溶藻弧菌ZJ51-O的vscC基因框内缺失突变株构建成功。[结论]该研究为进一步研究vscC基因的功能和T3SS在溶藻弧菌致病过程中所起的作用奠定基础,同时也为溶藻弧菌的其他基因突变株的构建和研究提供了参考和试验经验。     

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscC基因缺失株的构建

[目的]构建未引入任何遗传标记物的溶藻弧菌vscC基因框内缺失突变株。[方法]首先以溶藻弧菌ZJ51-O基因组DNA为模板,用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)扩增法构建体外vscC基因缺失片段;扩增产物经酶切后连接至自杀质粒pDM4,再转化入大肠杆菌SY327进行克隆,筛选阳性克隆子并进行PCR分析鉴定;提取阳性克隆子的自杀重组质粒pDM4-△vscC,用热休克法将其转入到大肠杆菌S17-1中,再经接合生殖的方式将自杀重组质粒导入溶藻弧菌ZJ51-O菌株中,利用抗生素筛选策略与蔗糖反向筛选系统,挑选疑似目的突变菌株,最后利用PCR鉴定与测序分析进行确证。[结果]溶藻弧菌ZJ51-O的vscC基因框内缺失突变株构建成功。[结论]该研究为进一步研究vscC基因的功能和T3SS在溶藻弧菌致病过程中所起的作用奠定基础,同时也为溶藻弧菌的其他基因突变株的构建和研究提供了参考和试验经验。     

猪细小病毒(PPV)SD1株NS1基因的克隆与原核表达

[目的]为建立猪细小病毒的快速诊断方法提供理论依据。[方法]根据GenBank上猪细小病毒基因组序列和原核表达质粒pET30a(+)多克隆位点序列设计1对引物,应用PCR技术扩增出猪细小病毒SD1株NS1基因全序列,对阳性重组质粒进行测序和同源性比较。构建原核表达重组质粒pET 30a/NS1,并在大肠杆菌中进行诱导表达。[结果]通过PCR扩增获得2 208 bp目的片段。所克隆NS1基因与已报道的PPV相应基因的核苷酸同源性为97.3%~99.4%,表明NS1基因具有高度保守性,但在偏3′端连续缺失12个碱基。所克隆的PPVNS1基因在原核细胞中成功表达,其表达产物主要以包涵体形式存在。[结论]SDS-PAGE检测结果表明PPVNS1蛋白的分子量为86 kD。     

琥珀酸丝状杆菌RT-PCR方法的建立

[目的]了解牛瘤胃内微生物的变化。[方法]以琥珀酸丝状杆菌为对象,根据16S rRNA序列分别设计引物。从牛瘤胃液提取总DNA,扩增琥珀酸丝状杆菌的DNA片段,并连接在pDM-18T载体上,经PCR和测序鉴定后,以不同稀释度的重组质粒为模版进行RT-PCR。[结果]扩增的目的片段与已知的菌种相应片段的同源性为100%。以不同稀释度的重组pMD-18T为模板建立的RT-PCR扩增曲线有明显差异,绘制标准曲线的相关系数接近1,熔解曲线呈单一峰值。[结论]成功建立了琥珀酸丝状杆菌的实时荧光定量PCR方法,为进一步研究瘤胃内微生物变化奠定基础。     

利用pHDE-Cas9构建巨桉CTX基因家族CRISPR载体

[目的]利用高效基因编辑系统(pHDE-Cas9)构建巨桉细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(CTX)基因家族规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)载体,为开展巨桉CTX基因家族功能验证研究打下基础.[方法]设计巨桉CTX基因靶位点和引物,扩增pCBC质粒上的目的片段,BsaⅠ酶切pHDE载体并与目的片段连接形成重组质粒,转化DH5α感受态细胞.提取单克隆进行菌液PCR初步验证、重组质粒PCR验证,挑选阳性克隆质粒进行测序分析,构建CTX基因家族CRISPR载体.[结果]重组质粒PCR鉴定及测序结果表明,重组载体序列无突变,与预期序列高度一致.成功构建了巨桉CTX基因家族pHDE-CTXA、pHDE-CTXB和pHDE-CTXC同源表达载体.[结论]利用pHDE-Cas9成功构建了巨桉CTX基因家族CRISPR载体,构建过程快速、高效,为桉树基因组定点编辑打下了基础,也可为其他桉树CRISPR/Cas9表达载体的构建提供借鉴.     

应用特异PCR方法诊断2例猪弓形虫病

[目的]应用特异PCR方法诊断猪弓形虫病。[方法]分别以弓形虫核糖体DNA第一内部转录间隔区(ITS1)序列和529 bp重复序列为目的片段,扩增2例疑似猪弓形虫病的病料肺门淋巴结DNA,对疑似猪弓形虫病的病料进行PCR诊断。[结果]2对引物均能分别扩增出2例肺门淋巴结中弓形虫DNA的特异条带。[结论]基于2种扩增片段的PCR方法均具有较高的特异性,是诊断猪弓形虫病的一种快速检测方法。     

从Raji细胞克隆IL-10基因

[目的]探索一种简便可行的白细胞介素-10(IL-10)基因的克隆方法。[方法]以人Burkitt’s淋巴瘤细胞系Raji细胞为材料,提取培养的Raji细胞中的总RNA。根据GenBank中人IL-10基因序列设计1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增人IL-10基因的编码cDNA。回收目的片段,将其与pMD18-T载体连接并转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α,构建该基因的重组质粒。重组质粒经PCR和双酶切鉴定后进行测序。[结果]以骨髓细胞组织总RNA为模板进行RT-PCR,可从Raji细胞中获得了预期的约550bp特异性条带。成功构建了IL-10基因的重组质粒,PCR扩增和双酶切的鉴定结果说明该插入片段可能为IL-10cDNA。从获得的阳性克隆中挑选1个菌落来分析重组质粒的插入DNA片段序列。序列分析结果证实其与报道的IL-10基因的序列一致。[结论]该研究为IL-10的重组表达及其生物学活性分析奠定了基础。     

拟南芥二氧化碳突变体生理特性的分析

[目的]对2个已获得的拟南芥突变体：二氧化碳敏感突变体（cds1）和二氧化碳不敏感突变体（cdi1）进行一些生理特性分析,寻找它们同野生型之间的差异表型。[方法]利用表皮条生物学试验方法对拟南芥野生型和突变体叶片进行气孔开度、气孔密度和叶片失水率测定,同时采用培养基中添加脱落酸（ABA）、甘露醇（Man）和NaC l作为胁迫处理测定种子萌发率。[结果]2个突变体气孔密度同野生型基本一致,而气孔开度和叶片失水率则有明显差异。此外,种子萌发试验也表明cdi1对外源ABA、甘露醇和NaC l不敏感,而cds1则刚好相反。[结论]2个突变体同野生型之间生理特性存在一定的差异。     

不同时期对广东双季晚稻秧苗素质的影响研究(英文)

[目的]研究不同播期对水稻秧苗素质的影响,为确定晚季的最佳播种期提供理论依据。[方法]通过对3个水稻品种6个不同播期情况下生长的秧苗的地上部和地下部性状调查,确定双季晚稻最佳播种时期。[结果]第1叶鞘高与第2叶长呈极显著的正相关,且他们的二次拟合方程具有很好的拟合性。3个水稻品种的不同播期对地上部和地下部的影响都有显著差异。[结论]初步确定广东地区双季晚稻品种天优428的最佳播种期在6月25 ~7月2日,天优998和玉香油占晚季的最佳的播种期在7月2 ~9日。     

小豆EMS诱变叶形突变体筛选及农艺性状分析(英文)

[目的]对EMS化学诱变小豆京农6号M3代材料进行筛选鉴定,以期获得有潜力、有价值的变异材料。[方法]利用浓度0.5%、0.9%、1.4%的EMS分别处理小豆京农6号12h和24h,对M3代叶形变异率、变异类型、农艺性状及产量构成因素进行分析。[结果]EMS诱变变异叶形突变体223份,占突变体群体总数的18.31%,类型丰富,产生了小密叶、肾形叶、剑叶、鸡爪叶、叶缺刻等叶形突变体。浓度0.9%EMS处理24h,其叶形变异类型最为丰富,且突变频率最高,其变异率分别为4.93%、10.31%、2.69%、8.07%、3.14%。当处理时间相同时,浓度0.9%EMS处理变异类型最丰富,同时表现出一定的高剂量抑制效应,总体表现为浓度0.9%浓度0.5%浓度1.4%;诱变时间不同时,处理时间越长,变异率越高,且变异类型也越丰富。综合叶形突变体农艺性状分析,各种突变类型总体表现为小叶肾叶叶缺刻小密叶剑叶鸡爪叶。这表明小叶、肾叶突变体具有株高降低、紧凑直立、多分枝、多荚、单株产量高、百粒重高等优良性状。[结论]该研究筛选的突变体可为小豆育种及遗传学研究提供有价值的材料。     

玉米EMS突变体库构建及突变体初步鉴定

[目的]构建玉米诱变变体库,创制玉米新种质资源.[方法]采用甲基磺酸乙酯（EMS）诱变玉米优良自交系B73和郑58,构建变体库;选取小叶夹角突变体rla1、rla2进行密植产量测定和遗传学分析.[结果]2个突变体库的M2代含有表型丰富的突变体,尤其是一些突变体表现出优良农艺性状,如叶夹角小、棕色叶中脉、矮化、抗性,具有重要的育种价值.rla1、rla2表型相似,较初始材料耐密植,在试验各种植密度下,单位面积产量均高于对照组;且产量随着密度增大而提高,其最大密植度在100000株/hm2.遗传学分析显示,rla1、rla2都是单基因隐性突变,而且是等位基因突变.[结论]B73和郑58的EMS突变体库为玉米育种提供了宝贵的材料资源.     

长尖叶墙藓植物的生物学观察

[目的]通过对长尖叶墙藓植物生物学特性的研究,探讨耐旱及耐低温藓类植物的特征。[方法]取一部分新鲜的长尖叶墙藓,用超声波清洗仪进行清洗,扫描电镜观察并照相。[结果]叶干时紧紧贴于茎上,叶细胞多疣,中肋突出,叶尖呈毛刺状。[结论]长尖叶墙藓是适应干旱环境的苔藓植物类型。     

不同播期对广东双季晚稻秧苗素质的影响研究

[目的]研究不同播期对水稻秧苗素质的影响,为确定晚季的最佳播种期提供理论依据。[方法]通过对3个水稻品种6个不同播期情况下生长的秧苗的地上部和地下部性状调查,确定双季晚稻最佳播种时期。[结果]第1叶鞘高与第2叶长呈极显著的正相关,且他们的二次拟合方程具有很好的拟合性。3个水稻品种的不同播期对地上部和地下部的影响都有显著差异。[结论]初步确定广东地区双季晚稻品种天优428的最佳播种期在6月25～7月2日,天优998和玉香油占晚季的最佳播种期在7月2～9日。     

苗期冬小麦对紫外线B耐性的评价

[目的]研究UVB对作物的影响,评价作物对UVB辐射增强的耐性。[方法]通过株高、叶色、鲜重及干重4项指标,比较了12种冬小麦幼苗期对UVB辐射增强的反应。[结果]各品种(品系)、各指标对UVB辐射的反应不同,有的表现为抑制,有的表现为促进。UVB处理使7个供试材料的株高增加,5个供试材料的株高降低;UVB处理对叶色的作用效果均表现为抑制;UVB处理抑制了除济南17以外的11个供试材料的鲜重,抑制了除济南17和聊0401以外的10个供试材料的干重。[结论]以干重为评价指标,对12个供试材料进行比较,耐性强弱依次为济南17>聊0401>天y9220>阳980741>晋麦54>太633>B98131-14-5>北京841>遗4060>石511>百农93102>石新768。     

河南省中低产田现状及改造对策

[目的]探讨河南省改造中低产田的对策,挖掘现有耕地的生产潜力,提高粮食综合生产能力。[方法]通过对河南省中低产田的现状调查,分析改造中低产田的增产潜力,并提出改造的技术对策。[结果]针对河南省中低产田的限制因素,采取兴修水利、合理施肥,改、用、养相结合,综合治理等措施,提高中低产田改造的成效。[结论]合理地开发利用中低产田,将会对我国粮食安全、人们生活水平的提高起到积极的推动作用。     

几种水稻田除草剂对烟叶生长的影响

[目的]研究几种水稻田除草剂对烟叶生长的影响。[方法]于烟株团棵期,用4种水稻田除草剂对植烟垄土喷雾除草1次,选取有代表性的5株烟株作为定点株,分别于施药后5、15、30d调查叶宽抑制情况,并观察记载药害情况。[结果]50%二氯喹啉酸WP对烟叶生长抑制作用最为明显,施药后15、30d,该药3种浓度处理对倒数第2、5片叶叶宽抑制率超过40%,药害程度＂＋＋＋＋＂（严重）,后期药害基本未能缓解;30%苄.丁WP、5.8%苄嘧磺隆.6.2%乙草胺WP、56%2甲4氯钠SP3种药剂对烟叶生长有一定的抑制作用,但叶宽抑制率均低于20%,后期药害均有不同程度缓解。[结论]水稻田除草剂二氯喹啉酸对烟叶生长有明显的抑制作用,其药害症状与永州市烟田烟叶畸形生长症状基本相同。