一株产油酵母菌高产培养基的碳源和氮源选择

[目的]为大规模发酵生产微生物油脂奠定基础。[方法]以产油酵母菌Y1为试验菌株,分别以蔗糖、葡萄糖和麦芽糖为碳源,蛋白胨、牛肉膏、氯化铵、硝酸铵和硝酸钾为氮源,研究不同碳源和氮源对菌株细胞生长的影响。[结果]Y1菌株的最适碳源为葡萄糖,最适氮源为牛肉膏,葡萄糖的最适浓度为85 g/L,100 ml摇瓶装液量为25 ml,液体种子接种量为10%,摇床转速为160 r/min,温度为28℃,培养21.5 h菌体生物量达到最大。[结论]该研究对产油酵母菌Y1的液体摇瓶产脂发酵培养基进行了优化。     

用OD值监测产油酵母培养过程中的菌体生物量变化

对不同生长时间、不同稀释度的菌体培养液测定OD600值和菌体干重,并分别确定两者间的回归方程。结果表明,两者在菌体对数生长期和稳定期存在很好的相关性,可以利用该方法在后期菌种发酵产脂及发酵条件优化后及时、准确检测产油酵母菌生物量的变化。     

两种绘制枯草芽孢杆菌和大肠杆菌生长曲线方法的比较

利用分光光度法和活菌计数法对大肠杆菌O78和枯草芽孢杆菌CGMCC 1.504的生长曲线进行测定,并根据两种方法在细菌对数生长期的线性关系,筛选相关系数最大的吸光度。结果表明:大肠杆菌O78培养中0~2 h为迟缓期,2~12 h为对数生长期,12~20 h为稳定期,20 h以后进入衰亡期。枯草芽孢杆菌CGM培养中0~2 h为迟缓期,2~12 h为对数生长期,12~18 h为稳定期,18 h以后进入衰亡期。在两种细菌的对数生长期,分光光度计测出不同吸光度下的OD值和活菌计数法测得的细菌数都表现出一定的线性关系,且在吸光度为630 nm时,O78和CGM的OD值和活菌数相关系数最大(R~2_(O78)=0.991 2,R~2_(CGM)=0.990 4),相关程度最高。     

枯草芽孢杆菌B47高产拮抗物质菌株的紫外诱变选育

[目的]为选育对西瓜枯萎病病菌具更强抑制作用的新菌株。[方法]对从番茄茎内分离获得的内生枯草芽孢杆菌B47菌株进行连续2次紫外线诱变,并对诱变菌株的遗传稳定性和生理生化特性进行测定。[结果]筛选获得3株抑菌活性高于B47菌株的诱变菌株F303、F304、F305,经10代传代培养后,3株诱变菌株对西瓜枯萎病病菌的抑菌活性都有所下降,但F305的抑菌活性下降最小,遗传稳定性最好,在同等条件下其抑菌圈直径仍比野生菌株B47大5 mm。诱变菌株F305在36 h内处于对数生长期,在36~96 h内处于稳定期;最适宜生长温度为35℃;在浓度为1%~10%的钠盐中皆能生长,但以浓度为1%时生长最好,该菌株的生理生化反应与野生菌株B47的反应一致。[结论]该研究为利用B47菌株进行工厂化生产拮抗性物质产品和探讨防治西瓜枯萎病的新方法奠定了基础。     

秸秆发酵饲料高产蛋白酵母菌株分离和筛选

为筛选出高产蛋白酵母菌株,推进秸秆发酵饲料在畜牧业中的应用。利用培养基平板划线法从牛瘤胃食糜样本中分离筛选出高产蛋白酵母菌株,通过正交试验优化其培养条件,并依据生长曲线筛选出可作为秸秆发酵饲料用高产蛋白酵母菌。从牛瘤胃食糜样本中共分离获得10株菌落形态和细胞特征较明显的疑似酵母菌株,分别编号为x1~x10。经正交试验L16(44)优化其培养条件,发现在温度32℃、初始p H5.5、接种量12.0%、装液量100ml的条件下,各分离酵母菌的生物产量最高。在10株分离酵母菌株中,生物产量最高的4株分别是x9号、x1号、x10号和x5号。其中,x9号和x1号菌株适的应期较短,在2h后即进入对数生长期,8h后达稳定期;x10号和x5号菌株的适应期较长,4h后进入对数生长期,1 h后进入稳定期。综合酵母菌株的培养条件及生长曲线测定结果,确定假丝酵母属菌株最适宜作为秸秆发酵饲料高产蛋白酵母菌。     

石油降粘菌生长特性及降粘影响因素研究

[目的]研究一株石油降粘菌株BT-003的生长特性及对石油的降粘效果.[方法]采用比色法、东秀珠细菌鉴定方法和单因素试验,研究菌株BT-003生长特性,考察菌液不同接种量、不同反应时间对石油降粘效果的影响.[结果]菌株BT-003培养4h开始进入对数生长期,10 h后即为稳定期,可以利用石油为唯一碳源进行生长,35℃下具有最大菌体密度;5;菌液接种量与石油作用8～14 h即可达到很好的降粘效果,石油黏度由30 000 mPa·s降低到150 mPa·s.[结论]菌株BT-003在石油中生长繁殖快,用量少,耗时短,适用于黏度较大油井的三次开采.     

酿酒酵母抗氧化酶系统对NaCl和Na_2CO_3胁迫的生理响应

[目的]研究酿酒酵母SOD和CAT对NaCl和Na2CO3胁迫的生理响应。[方法]采用分光光度法,测定不同浓度NaCl和Na2CO3胁迫条件下酵母菌SOD和CAT的活性指标;采用比浊法,测定不同浓度NaCl和Na2CO3胁迫对酵母铜/锌超氧化物歧化酶缺失菌株（sod1Δ）和过氧化物酶缺失菌株（ctt1Δ）生长的影响。[结果]随着NaCl和Na2CO3胁迫浓度的升高,酵母细胞内SOD和CAT活性呈现上升趋势;与野生型菌株相比,NaCl和Na2CO3胁迫对sod1Δ和ctt1Δ基因缺失菌株产生更加明显的生长抑制作用。[结论]SOD和CAT在酿酒酵母抵抗NaCl和Na2CO3胁迫中发挥重要作用。     

多菌种混合发酵对菜籽饼脱毒的研究

[目的]选择对菜籽饼脱毒效果最佳的菌株。[方法]以酵母菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉和乳酸菌为供试菌株,分别对菜籽饼进行单菌株和混菌株发酵脱毒试验,测定脱毒效果。[结果]混菌株发酵的脱毒效果明显优于单菌株发酵,混菌株发酵中3菌株脱毒效果又优于双菌株发酵。乳酸菌、黑曲霉和酵母菌3种菌株的组合,对菜籽饼硫甙的脱除率达75．2％,对植酸、单宁的去除率分别达58．9％和66．7％。[结论]该研究为菜籽饼的综合利用奠定了基础。     

高产酒精的番茄酿酒酵母的选育研究

[目的]筛选出产酒能力高、发酵速度快的番茄酿酒酵母突变株。[方法]以从番茄表面分离筛选的产酒酵母HBF-2为出发菌株,分别利用紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)进行诱变,通过测定吸光度和致死率绘制出发菌株的生长曲线与致死曲线,根据诱变后菌落形态特征对菌种初筛,根据发酵酒的酒精度、残糖和总酸检测对菌种进行复筛,并对目的菌株进行遗传稳定性试验。[结果]研究表明,出发菌株HBF-2生长周期为24 h,培养10 h后进入对数生长期;利用20 W紫外灯,在照射距离为40 cm条件下,照射时间为90 s,筛选出产酒能力比HBF-2提高了18.2%的突变株UV-8;UV-8连续传代5次,番茄发酵试验结果显示该菌株有良好的遗传稳定性。[结论]研究可为番茄酒的酵母选育提供理论基础与参考。     

拮抗酵母菌对苹果采后青霉病的防治效果

[目的]为拮抗菌的商业化贮藏应用提供依据。[方法]通过室内培养筛选出2株具有拮抗效果的酵母菌,通过活体和离体试验,研究拮抗酵母菌对青霉引起的苹果采后病害的防治效果。[结果]活体条件下,含量为2×108CFU/ml的2株酵母菌对青霉菌具有较明显的抑制效果,其中菌株1的防效为89%,菌株2的防效为92%;离体条件下,含量为106CFU/ml的2株酵母菌可完全抑制青霉菌生长;用酵母菌菌悬液浸果后,贮藏20 d时苹果未出现腐烂现象,20 d后酵母菌菌株2在苹果上的数量为初始值的15.0倍,菌株1在苹果上的数量为初始值的10.2倍。[结论]2株酵母菌均可在苹果伤口上迅速繁殖,可有效防治苹果青霉病。     

水稻SGR酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

[目的]揭示SGR基因的作用机理。[方法]构建水稻SGR基因在酵母双杂交体系中的诱饵载体,并对其表达进行鉴定,将目的基因SGR与诱饵质粒载体pGBKT7通过双酶切定向重组构建诱饵质粒pGBKT7-SGR,将pGBKT7-SGR转入酵母菌株Y187中,利用Western印迹法检测其在酵母中的表达,通过缺陷性培养基培养进行自激活检测。[结果]将鉴定正确的重组质粒测序结果与SGR基因比较,序列完全一致,阅读框分析正确。载体pGBKT7-SGR在酵母菌株Y187中可以正确表达出融合蛋白。重组诱饵pGBKT7-SGR质粒对酵母无毒性,其表达产物不能激活酵母菌株Y187的营养缺陷型报告基因。[结论]该重组诱饵质粒可用于酵母双杂交体系,该研究为从cDNA文库筛选水稻诱饵蛋白SGR的互作蛋白奠定了基础。     

YDL080 c基因缺失的低异戊醇酿酒酵母菌构建

[目的]构建YDL080c基因缺失的低异戊醇生成的酿酒酵母菌。[方法]利用Cre-lox P重组系统与酵母电转化法敲除酿酒酵母中编码类丙酮酸脱羧酶的基因YDL080c,切断酿酒酵母代谢中的异戊醇生成,从而构建一株低异戊醇生成的酿酒酵母菌株。[结果]成功构建出YDL080c基因缺失的工程酵母菌Y1,Y1酿造酒中相对异戊醇含量为0.81 g/L,比初始菌降低28.3%。[结论]利用基因敲除YDL080c的工程酵母菌能够有效减少酿造酒中异戊醇的生成量。     

玉米胚芽鞘负向重力生长时期的酵母双杂交文库构建及评价

[目的]构建玉米胚芽鞘负向重力生长时期的酵母双杂交文库,并对其进行评价。[方法]以玉米骨干自交系B73为材料,利用Trizol试剂提取玉米胚芽鞘在负向生长时期所表达的总RNA,再利用SMART技术构建酵母双杂交文库,并转化进酵母Y187中。[结果]试验得到的原始文库库容量高达1×106个单克隆;文库中插入的片段集中在0.5～1.5 kb,平均插入长度为800 bp。[结论]试验构建得到了高质量的米胚芽鞘酵母双杂交文库,为研究胚芽鞘的负向重力反应机制奠定了基础。     

补脾强力膏微生物限度检查方法学检测研究

[目的]建立医院制剂补脾强力膏的微生物限度检查方法.[方法]按照《中华人民共和国药典》2010年版(一部)采用常规法、培养基稀释法对补脾强力膏的细菌、霉菌及酵母菌计数测定进行加样回收率试验.[结果]采用培养基稀释法(1∶10供试液,0.5 ml/皿)能使三个批号样品对金黄色葡萄球菌的加样回收率均大于70％;常规法能使3个批号样品对大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉的加样回收率均大于70％,控制菌中大肠埃希菌按照药典常规法可检出.经验证补脾强力膏的细菌计数方法为培养基稀释法(1∶10供试液,0.5ml/皿);霉菌及酵母菌的计数方法为常规法;控制菌大肠埃希菌的检查法为常规法.[结论]该复方制剂对金黄色葡萄球菌的抑菌作用较强,符合药理研究结果.     

一株产油酵母菌的微波诱变选育

以产油酵母菌Y1为试验菌株,通过对出发菌株Y1的最佳微波诱变时间确定、诱变后菌株初筛和复筛后得到一株突变菌株Y13,测得Y13的油脂产量4.39g/L、油脂含量22.09％,比出发菌株Y1油脂产量2.11 g/L、含油量9.6％明显提高.因此,菌株Y13可作为后续摇瓶发酵产脂研究的试验菌株.     

山楂-鸭梨复合果酒专用活性干酵母制作工艺研究

[目的]优化山楂-鸭梨复合果酒专用活性干酵母的制备工艺。[方法]以自行筛选出的1株野生酵母作为山楂-鸭梨混合果酒专用酵母,考察培养基、培养温度对酵母生长的影响,同时研究了离心条件、干燥方式、保护剂对酵母存活率的影响。[结果]酵母最佳培养条件为36℃、PD培养基中摇瓶培养48 h,最佳制备条件为4 500 r/min离心20 min,4%甘油、10%麦芽糊精、7%蔗糖、2%脱脂牛奶作为保护剂,预冻后进行低温真空升华干燥,在此条件下酵母菌的存活率可达79.2%。[结论]研究山楂-鸭梨复合果酒专用活性干酵母,对促进鸭梨和山楂的充分利用,以及复合梨酒品质的提高具有积极的意义。     

HPLC法测定大黄药材中5种游离蒽醌的含量

[目的]建立HPLC法同时测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量,并对不同产地的大黄样品进行测定。[方法]采用依利特ODS2 C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为无水甲醇-浓度0.1%磷酸(75∶25,V/V),流速为1 ml/min,检测波长为254 nm,柱温25℃。[结果]芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的线性回归方程分别为:Y=1.96X-0.25,相关系数R=0.999 94;Y=2.45 X+0.18,相关系数R=0.999 94;Y=1.91 X+0.05,相关系数R=0.999 90;Y=1.25 X-0.06,相关系数R=0.999 95;Y=0.96 X-0.20,相关系数R=0.999 98;平均回收率分别为99.39%、98.84%、98.94%、99.11%和98.37%。[结论]该方法简单、快速、重现性好、结果准确,可用于大黄药材品质评价与质量检测。     

MTT法在木醋杆菌活力检测中的应用

[目的]采用MTT法测定木醋杆菌静置培养时的活力,旨在探索一种快速检测木醋杆菌生长及繁殖的方法。[方法]以木醋杆菌为研究对象,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及测量细菌数量的范围,并研究反应时间、MTT的用量、离心力等试验条件对MTT法的测定效果的影响。[结果]木醋杆菌活菌数在3.90×105～1.25×107cfu/ml范围内测出的OD570值与细菌浓度呈良好的正相关,且MTT法最优的试验条件是离心力7 000 g、孵育时间4 h,MTT添加量30μl,测量前用DMSO溶解。[结论]MTT法可快速、方便的检测木醋杆菌活力。