组氨酸及组胺对翘嘴鳜摄食调控的影响

以翘嘴鳜（Siniperca chuatsi）为研究对象，将其分为3组，经脑室分别注射（ICV）磷酸盐缓冲液（对照组）、组氨酸和组胺（试验组），通过检测翘嘴鳜24 h内的摄食量、食欲基因和氨基酸感知信号通路的变化来揭示组氨酸及组胺对鱼类摄食调控的影响。结果显示，脑室注射组氨酸和组胺后翘嘴鳜的摄食量在12 h相比于对照组显著性下降，同时npy 、gcn2和atf4 mRNA的表达均显著降低（P<0.05），而agrp和mtor mRNA的表达却无显著性变化（P>0.05）。离体水平，通过用不同浓度（1.0、2.0和3.0 mmol/L）的组氨酸和组胺处理鳜脑原代细胞后检测促食欲基因的表达情况，结果显示，与对照相比，1.0、2.0和3.0 mmol/L的组氨酸处理显著抑制了鳜原代脑细胞npy mRNA 的表达（P<0.05），且随着浓度的升高，这种抑制作用会增强；同时，1.0和3.0 mmol/L的组氨酸处理也显著抑制了鳜原代脑细胞agrp mRNA 的表达（P<0.05），但不同浓度的组胺刺激并没有引起鳜原代脑细胞npy和agrp mRNA 的表达变化。此外， 2.0 mmol/L的组氨酸刺激并不会引起鳜脑原代细胞mTOR信号通路下游关键蛋白p-S6的表达变化。以上结果提示：组氨酸和组胺会抑制翘嘴鳜的食物摄入，组氨酸可能是通过激活鳜脑组胺神经元来发挥作用，而这种抑制作用可能是通过下调促食欲因子的表达来抑制翘嘴鳜的食物摄入量。     

急性氨氮胁迫对翘嘴鳜幼鱼抗氧化酶活性及炎症反应相关基因表达的影响

[目的]从抗氧化酶活性和炎症反应相关基因表达水平揭示氨氮胁迫对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)幼鱼机体的毒性效应机制,为其健康养殖与水质调控管理提供科学依据.[方法]挑选规格整齐、体表无损伤的翘嘴鳜幼鱼进行96 h急性氨氮胁迫试验,在获得半致死浓度(LC50)的基础上,将翘嘴鳜幼鱼暴露于48.65 mg/L的水体氨氮下,以完全曝气的自来水(氨氮实测值为0.05 mg/L)为对照组,分别于胁迫0、6、12、24、48和96 h后测定抗氧化酶活性及炎症反应相关基因的相对表达量.[结果]翘嘴鳜幼鱼的96 h-LC50为48.65 mg/L(非离子氨0.47 mg/L).翘嘴鳜幼鱼在96 h的急性氨氮胁迫过程中,其肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽(GSH)含量均呈先升高后降低的变化趋势;脂质过氧化物(LPO)在肝脏中的累积量随胁迫时间的延长逐渐增加,至胁迫96 h时达最高值(0.50μmol/g),显著高于对照组(P<0.05,下同).与对照组翘嘴鳜幼鱼相比,经氨氮胁迫后翘嘴鳜幼鱼肝脏IL-1β和IL-8基因的相对表达量均呈升高—降低—升高的变化趋势,于胁迫6 h起显著上调,分别于胁迫12和96 h时达最高值;TNF-α基因的相对表达量整体上呈先降低后升高的变化趋势,在胁迫6 h时显著低于对照组,但至胁迫96 h时其相对表达量达最高值;IL-1β、IL-8和TNF-α基因的相对表达量在胁迫96 h时均显著高于对照组;HSP90α基因的相对表达量呈先升高后降低的变化趋势,至胁迫96 h时,其相对表达量显著低于对照组.[结论]氨氮胁迫初期,翘嘴鳜幼鱼抗氧化系统被诱导激活,炎症反应相关基因表达上调;至胁迫后期,翘嘴鳜幼鱼抗氧化功能受抑制,而炎症反应相关基因表达持续上调.说明持续炎症反应及抗氧化系统功能受抑制是翘嘴鳜氨氮中毒死亡的主要原因.     

配合饲料和活饵饲喂对翘嘴鳜肌肉代谢基因表达的影响研究

本研究旨在探究配合饲料和鲫鱼活饵饲喂对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)肌肉代谢基因表达的影响。结果显示,配合饲料组翘嘴鳜肌肉粗蛋白含量19.32%,显著低于活饵组的20.42%(P<0.05);粗脂肪含量为1.44%,显著高于活饵组的1.33%。转录组学分析显示,配合饲料显著提高翘嘴鳜肌肉中myh1和myh4等酵解型肌纤维标志基因以及糖酵解相关基因pkg-1和fba的表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析证明配合饲料影响糖酵解过程但不影响三羧酸循环。综上所述,配合饲料饲喂会改变翘嘴鳜肌肉糖代谢模式,促进酵解型肌纤维的生成。     

汉江上游翘嘴鳜年龄鉴定及其生长性能和血液生理生化指标的分析

为了预测翘嘴鳜(Siniperca chuasti)的生长趋势并选育出生长性能和体质状况良好的翘嘴鳜亲本,对汉江上游不同体型规格的野生和人工养殖翘嘴鳜的年龄、体长(L)、鳃盖骨长(R)、体质量(W)、相对生长率和血液生理生化指标进行测定和对比分析。结果表明:汉江上游野生翘嘴鳜的年龄主要为1～3龄,人工养殖翘嘴鳜为1～2龄。野生翘嘴鳜体长与鳃盖骨长的回归方程为L=12.953R+3.314 2(R~2=0.820 5),其体长与体质量的回归方程为W=3.96×10~(-2)L~(2.757 7)(R~2=0.951 2),呈幂函数关系,为等速生长型。汉江上游野生翘嘴鳜1～2龄生长较快,其相对生长率和生长指标达到0.259和4.972,2～3龄为0.158和3.984,生长趋于缓慢;人工养殖翘嘴鳜1～2龄的相对生长率和生长指标为0.152和3.678,均低于野生翘嘴鳜。汉江上游野生翘嘴鳜的尿酸和总胆固醇含量分别为324.67μmol/L和4.90 mmol/L,极显著低于人工养殖翘嘴鳜,而肌酐含量为13.50μmol/L,显著低于人工养殖翘嘴鳜。因此,汉江上游野生翘嘴鳜的生长性能和血液生理生化指标均比当地人工养殖的翘嘴鳜更优良,能够被选作亲本进行培育和人工繁殖,为汉江上游翘嘴鳜的规模化养殖奠定基础。     

翘嘴鳜、斑鳜及其杂交种形态差异分析

运用传统形态学方法和框架分析法分析了斑鳜、翘嘴鳜及其杂种(翘嘴鳜×斑鳜)的形态差异.可数性状中,腹鳍棘数、腹鳍条数、臀鳍棘数在3种鳜中都一致,对其他可数性状进行卡方检验,结果表明:斑鳜与杂交鳜只有在臀鳍条数目上存在显著性差异,其他可数性状差异不显著,斑鳜与翘嘴鳜、翘嘴鳜与杂交鳜之问差异显著或极显著.对可数性状和框架数据进行聚类分析、判别分析和主成分分析,并计算欧氏距离,结果显示:杂交鳜在形态上较接近于其父本斑鳜,在头部和尾部继承了更多翘嘴鳜的特征.     

PYY组织表达及对翘嘴鳜的摄食调控

以肉食性鱼类翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象,对其肽YY(peptide YY,PYY)基因进行鉴定和分析,并通过中枢注射人工合成的鳜PYY多肽,研究PYY对翘嘴鳜摄食量的影响。氨基酸序列多重比对结果发现,sc-PYY与各个物种的氨基酸序列高度保守,鱼类中与狼鲈(Dicentrarchus labrax)、红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)一致性较高;实时荧光定量PCR检测sc-PYY mRNA表达的组织分布,结果显示,sc-PYY mRNA在脑中表达量最高,在肠道、肌肉、眼睛中亦有较高的表达;翘嘴鳜中枢注射PYY后,摄食量在4 h相比于对照组(PBS)显著性下降。这表明PYY可能在减少鳜的食物摄入量中发挥着重要的作用。     

翘嘴鳜、斑鳜杂交子代F1及其自交子代F2胚胎发育的研究及鉴定

利用人工催产、人工授精的方法获得翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)(♀)×斑鳜(Siniperca scherzeri)(♂)杂交子代F1及F1的自交子代F2,并对翘嘴鳜、斑鳜及其杂交后代F1和F1自交后代F2的胚胎和胚后发育进行了初步观察与比较,并采用SSR分子标记方法对翘嘴鳜、斑鳜及其正交子代F1进行了分子鉴定。结果表明,翘嘴鳜卵径为(1.09±0.05)mm,正交F1雌鱼卵径为(1.26±0.05)mm、F2卵径(1.19±0.04)mm,显著小于斑鳜的卵径(1.83±0.09)mm(P<0.05)。翘嘴鳜受精卵在水温23.4~25.1℃经过46 h孵化破膜,F1受精卵在水温23.1~24.8℃经过49 h孵化破膜,F2受精卵在22.6~24.5℃经过51 h孵化破膜,斑鳜受精卵在水温23.5~25.7℃经过107 h孵化破膜。翘嘴鳜、斑鳜、F1和F2初孵仔鱼大小分别为(4.06±0.50)mm、(4.58±0.30)mm、(4.21±0.30)mm和(4.14±0.20)mm。采用SSR分子标记方法,根据DNA带型的不同可以成功鉴别出翘嘴鳜、斑鳜及其杂交子F1。     

急性低氧胁迫对翘嘴鳜抗氧化酶、呼吸相关酶活性及相关基因表达的影响

[目的]从酶活性和基因表达水平分析低氧胁迫对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)应激的生理响应过程,为其健康养殖及耐低氧品种选育提供科学依据.[方法]选取体表无损伤、体重450±20 g/尾、体长24.0±0.7 cm的健康翘嘴鳜进行低氧(溶解氧含量2.8±0.2 mg/L)胁迫,设常氧(溶解氧含量6.5±0.2 mg/L)为对照组,分别在低氧胁迫0、6、12、24、48和96 h时采集翘嘴鳜的肝脏和鳃组织样品,进行抗氧化酶、呼吸相关酶活性及低氧诱导反应相关基因表达测定.[结果]在整个急性低氧胁迫过程中,翘嘴鳜肝脏过氧化氢酶(CAT)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及谷丙转氨酶(GPT)活性均呈先升高后降低的变化趋势,GSH含量从低氧胁迫6 h起显著高于对照组(P<0.05,下同),CAT和GPT活性从低氧胁迫12 h起显著高于对照组.鳃组织乳酸脱氢酶(LDH)活性先升高后降低再升高,在胁迫6 h时达最高值(849.67 U/mg),显著高于对照组;超微量总ATP酶(ATPase)活性呈降低—升高—降低的变化趋势,且显著低于对照组.低氧胁迫组翘嘴鳜肝脏HIF-1α基因的相对表达量在胁迫48 h后显著上调;EPO基因的相对表达量先升高后降低,在胁迫12 h时显著上调;HSP90α基因的相对表达量在胁迫6和48 h分别出现峰值,其他时间点与对照组持平.[结论]急性低氧胁迫对翘嘴鳜肝脏抗氧化酶、鳃组织呼吸相关酶及低氧诱导反应相关基因表达均产生显著影响.虽然翘嘴鳜能通过自我调节抗氧化酶和呼吸相关酶活性及上调低氧诱导反应相关基因表达,促使机体适应低氧环境,但溶解氧降至2.8 mg/L以下即对其产生不利影响,因此在实际养殖过程中须密切关注养殖水体溶解氧变化.     

菜粕替代鱼粉对翘嘴鳜肠道吸收和氨基酸代谢的影响

为研究翘嘴鳜对基础饲料中植物蛋白的吸收和利用,选取初始体质量为(13.83±0.93)g的翘嘴鳜81尾,共设计9组等氮等能的流体饲料:FM为全鱼粉对照组;R12为菜粕替代水平12.5%;R37为菜粕替代水平37.5%;R12+L、R12+M分别为低菜粕组补加赖氨酸、蛋氨酸;R37+L、R37+M分别为高菜粕组补加赖氨酸、蛋氨酸;R37+LM、R12+LM分别为高低菜粕组同时补加赖氨酸和蛋氨酸,进行为期1周的灌胃试验。试验结果发现,高菜粕替代会对翘嘴鳜肠道粘膜结构造成破坏,同时降低肠道Na+-K+-ATP酶活力,影响肠道吸收和转运。但是补充赖氨酸可以有效缓解肠道损伤,改善肠道吸收;补加赖氨酸还可以降低肌肉中腺苷单磷酸脱氨酶ampd1基因表达,减少肌肉中游离氨基酸分解代谢,促进氨基酸保留,用于蛋白质合成。低菜粕替代不会对肠道粘膜结构和Na+-K+-ATP酶活力造成影响,补加赖氨酸可以加速肠道转运效率,同时补加赖氨酸和蛋氨酸还可以减少肝脏中谷氨酸脱氢酶gdh基因表达,进一步减少肝脏中游离氨基酸脱氨分解作用,极大促进蛋白质合成,有利于鱼体生长。本试验结果证实了翘嘴鳜对于12.5%的菜粕水平替代是可以接受的,并且补加赖氨酸可进一步加速肠道转运效率和减缓游离氨基酸脱氨分解。     

急性高温胁迫对翘嘴鳜幼鱼抗氧化酶和消化酶活性及热休克蛋白基因表达的影响

【目的】从抗氧化酶和消化酶活性及热休克蛋白基因表达层面明确高温胁迫对翘嘴鳜（Siniperca chuatsi）幼鱼生长及应激生理响应的影响,为实际生产中翘嘴鳜幼鱼培育提供可靠的参考依据。【方法】对2月龄翘嘴鳜幼鱼进行96 h的急性高温胁迫,通过预试验测试高起始致死温度（96 h-UILT₅₀）,采用突变升温方法设常温对照组（26.0℃）和急性高温胁迫组（36.0℃）,分别于胁迫0、6、12、24、48和96 h后取样,使用生化试剂盒测定抗氧化酶和消化酶活性,并以实时荧光定量PCR检测热休克蛋白基因（HSP70α和HSP90α）的表达情况。【结果】翘嘴鳜幼鱼死亡率随水温的升高不断上升,其96 h-UILT₅₀为36.22℃。在96 h的急性高温胁迫过程中,翘嘴鳜幼鱼肝脏超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性呈降低-升高-降低的变化趋势,谷丙转氨酶（GPT）活性及丙二醛（MDA）含量则表现出升高-降低-升高的变化趋势;在消化酶方面,翘嘴鳜幼鱼胃蛋白酶和肠道淀粉酶（AMS）活性呈降低-升高-降低的变化趋势,而肠道脂肪酶（LPS）活性呈升高-降低-升高的变化趋势。在急性高温胁迫过程中,翘嘴鳜幼鱼HSP70α基因相对表达量呈升高-下降的波动式变化趋势,于胁迫12 h时达最高值,在胁迫48 h时出现第2个峰值;HSP90α基因表达呈先升高后降低的变化趋势,于胁迫24 h时上调至最高值;但至胁迫96 h时HSP70α和HSP90α基因的相对表达量仍显著高于对照组翘嘴鳜幼鱼（P<0.05）。【结论】急性高温胁迫对翘嘴鳜幼鱼抗氧化酶和消化酶活性及热休克蛋白基因表达产生显著影响。其中,热休克蛋白基因HSP70α和HSP90α参与高温胁迫应答过程的生理调节,以应对高温胁迫对肝脏细胞的损伤,故可作为高温胁迫应答的标志物。