组氨酸及组胺对翘嘴鳜摄食调控的影响

以翘嘴鳜（Siniperca chuatsi）为研究对象,将其分为3组,经脑室分别注射（ICV）磷酸盐缓冲液（对照组）、组氨酸和组胺（试验组）,通过检测翘嘴鳜24 h内的摄食量、食欲基因和氨基酸感知信号通路的变化来揭示组氨酸及组胺对鱼类摄食调控的影响。结果显示,脑室注射组氨酸和组胺后翘嘴鳜的摄食量在12 h相比于对照组显著性下降,同时npy 、gcn2和atf4 mRNA的表达均显著降低（P<0.05）,而agrp和mtor mRNA的表达却无显著性变化（P>0.05）。离体水平,通过用不同浓度（1.0、2.0和3.0 mmol/L）的组氨酸和组胺处理鳜脑原代细胞后检测促食欲基因的表达情况,结果显示,与对照相比,1.0、2.0和3.0 mmol/L的组氨酸处理显著抑制了鳜原代脑细胞npy mRNA 的表达（P<0.05）,且随着浓度的升高,这种抑制作用会增强;同时,1.0和3.0 mmol/L的组氨酸处理也显著抑制了鳜原代脑细胞agrp mRNA 的表达（P<0.05）,但不同浓度的组胺刺激并没有引起鳜原代脑细胞npy和agrp mRNA 的表达变化。此外, 2.0 mmol/L的组氨酸刺激并不会引起鳜脑原代细胞mTOR信号通路下游关键蛋白p-S6的表达变化。以上结果提示：组氨酸和组胺会抑制翘嘴鳜的食物摄入,组氨酸可能是通过激活鳜脑组胺神经元来发挥作用,而这种抑制作用可能是通过下调促食欲因子的表达来抑制翘嘴鳜的食物摄入量。     

脑室注射和饲料缺乏组氨酸或缬氨酸对翘嘴鳜摄食的调控作用

为研究中枢神经对营养物的直接感知及外周组织的间接感知,以翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)为试验对象,通过脑室注射和饲料缺乏方式探索组氨酸或缬氨酸对翘嘴鳜摄食的影响.脑室注射试验中,对照组注射磷酸盐缓冲液(PBS),试验组注射组氨酸或缬氨酸或同时注射一般性调控阻遏蛋白激酶2(general control n...     

翘嘴鳜人工繁殖技术研究

本文报告翘嘴鳜人工繁殖技术试验,包括亲鱼选择、雌雄鉴别、培育、催产、发情与人工授精以及孵化全过程     

翘嘴鳜和斑鳜肌肉营养成分及氨基酸组成比较

对斑鳜和翘嘴鳜肌肉进行营养成分分析,然后对2种鱼的营养价值进行比较评价,结果表明,斑鳜肌肉鲜样的蛋白质含量为18．77％,高于翘嘴鳜的16．77％;但斑鳜脂肪含量为0.37％,低于翘嘴鳜的1．50％。从氨基酸组成来看,每g翘嘴鳜肌肉干样的氨基酸总量为776．4mg,必需氨基酸总量为302．4mg,4种呈味氨基酸的总量为311．7mg：而每g斑鳜肌肉千重的3者含量分别为812.9,317.9,324．9mg。因此,2种鳜鱼营养价值高,都是优良的养殖品种：相比较之下,斑鳜的粗蛋白含量高、脂肪和灰分较低,营养价值高于翘嘴鳜。     

γ-氨基丁酸-A型受体拮抗剂对翘嘴鳜摄食及糖代谢的影响

以肉食性鱼类翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象,分别脑室注射二甲基亚砜(DMSO)+生理盐水(简称D)、DMSO+125μgγ-氨基丁酸GABA(简称DG)、DMSO+125μg GABA+20μg Bicuculline(GABA_A受体拮抗剂荷包牡丹碱)(简称DGB),研究GABA对翘嘴鳜摄食及糖代谢的影响。结果显示,DGB组的摄食量在0.5h、2h相比于D组(对照组)显著性下降,同时促食欲相关基因npy、agrp分别在0.5h和2h下调引起的抑制食欲与翘嘴鳜的低摄食保持一致。DG组的血糖含量相对于对照组显著下降,胰高血糖素显著上升,但cs、pc、pfk1基因的mRNA水平却并无显著性差异。试验结果表明,GABA_A受体拮抗剂能够抑制GABA与其受体结合从而抑制翘嘴鳜摄食,但GABA与糖代谢的偶联关系并不显著。     

翘嘴鳜·斑鳜·杂交鳜不同组织3种同工酶特征研究

揭示翘嘴鳜、斑鳜和杂交鳜F₁[翘嘴鳜(♀)×斑鳜■的同工酶生化遗传特性。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)检测技术,分别进行了斑鳜、翘嘴鳜3个组织(肌肉、肝脏、肾脏)以及杂交鳜F₁代5个组织(肌肉、肝脏、心脏、肾脏、脑)的3种同工酶(LDH 1.1.1.27、MDH1.1.1.37、EST3.1.1.1)酶谱特征的研究。3种同工酶均存在较稳定的物种和组织特异性表达的特征;杂交鳜F₁代同工酶酶谱的组织表达与双亲(斑鳜、翘嘴鳜)之间存在明显的亲缘关系和特异性,除了斑鳜和翘嘴鳜肾脏中的MDH同工酶谱以外,3个不同鳜种间的酶谱特征均存在较明显的种属特异性,肝脏、肾脏中的LDH和EST同工酶谱以及肌肉中的EST同工酶谱均存在显著且稳定种属特异性差异表达,可作为鉴别3种鳜鱼种质特性的重要遗传生化参考指标。该研究结果为鳜鱼的种质鉴定和杂交育种提供了一定的理论依据,并具有较好的应用价值。     

翘嘴鳜细菌性败血症的免疫预防研究

从患细菌性败血症的翘嘴鳜分离嗜水气单胞菌ＢＳ－１菌株，制成福尔马林灭活疫苗（Ｆ－ＡＨ）、酚灭活疫苗（Ｐ－ＡＨ）和提取菌体脂多糖（ＬＰＳ）作为免疫原。注射接种体重为３５．５±５．６ｇ的翘嘴鳜后，通过检测血清中的凝集抗体效价、血液和头肾中吞噬细胞的吞噬活性以及应用活菌攻毒等方法，比较了３种不同免疫原的免疫效果。结果表明，ＬＰＳ的免疫效果最好，Ｐ－ＡＨ次之，Ｆ－ＡＨ较差。用活菌攻毒后，３种受免鱼体的免疫保护力分别为９２．２％，８４．７％和８０．７％。     

翘嘴鳜和翘嘴红鲌血细胞DNA含量测定

以翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)和翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)的血细胞为材料,以鸡血细胞为DNA标准(2.5 pg/2C),利用流式细胞仪(Beckman Coulter Quanta SC)分别采用内标法和外标法测定其细胞核DNA含量。结果表明,翘嘴鳜和翘嘴红鲌的血细胞DNA含量分别为鸡血细胞的0.69倍和0.87倍,换算成绝对含量分别为1.74 pg/2C和2.18 pg/2C。     

翘嘴鳜和斑鳜肌肉营养成分及氨基酸组成比较

对斑鳜和翘嘴鳜肌肉进行营养成分分析,然后对2种鱼的营养价值进行比较评价.结果表明,斑鳜肌肉鲜样的蛋白质含量为18.77%,高于翘嘴鳜的16.77%;但斑鳜脂肪含量为0.37%,低于翘嘴鳜的1.50%.从氨基酸组成来看,每g翘嘴鳜肌肉干样的氨基酸总量为776.4 mg,必需氨基酸总量为302.4 mg,4种呈味氨基酸的总量为311.7 mg;而每g斑鳜肌肉干重的3者含量分别为812.9,317.9,324.9 mg.因此,2种鳜鱼营养价值高,都是优良的养殖品种;相比较之下,斑鳜的粗蛋白含量高、脂肪和灰分较低,营养价值高于翘嘴鳜.     

嗜水气单胞菌胞外产物对翘嘴鳜免疫防御机制的影响

用嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)制备的福尔马林灭活菌苗 (F AH)和胞外产物 (ECP)作为免疫原 ,接种翘嘴鳜 (SinipercachuatsiBasilewsky)后 ,通过测定供试鱼的体液及细胞免疫活性 ,探讨了A .hydrophila的ECP对翘嘴鳜免疫防御机制的影响。结果表明 ,与F AH免疫组相比 ,ECP能极显著地影响供试鱼的凝集抗体、补体等体液因子的活性 (t测验 ,P <0 .0 1) ,而对供试鱼血液中白细胞的自发吞噬活性和细胞内杀菌活性没有显著影响 (t测验 ,P >0 .0 5 )。推测A .hydrophila的ECP对翘嘴鳜免疫防御机制的抑制作用是导致翘嘴鳜容易重复感染由A .hydrophila引起的细菌性败血症的重要原因     

鳜不同亚型瘦素受体基因克隆与表达分析

以鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象,使用cDNA 3′末端快速克隆法扩增瘦素受体基因(lepr)cDNA序列,获得了由mRNA 3′端可变剪切产生的鳜lepr的4个不同亚型,包括编码序列(coding sequence, CDS)长度为3 474 bp、编码1 157个氨基酸的长型受体亚型lepr-L,以及3个短型受体亚型lepr-S1、lepr-S2和lepr-S3,CDS长度分别为1 512、945和915 bp,分别编码503、314、304个氨基酸。对氨基酸序列进行结构域分析和多重比对发现,鳜lepr长型受体亚型包含完整的功能域,短型受体亚型无跨膜区及胞内结构,鳜lepr及其leptin结合域(leptin binding domain, LBD)序列保守程度高。鳜lepr在鳃中表达最高,其次是肾和垂体,腹腔注射鳜leptin B而非leptin A的同源重组蛋白2 h后引起脑lepr表达量的升高(P<0.05)。以上结果表明,鳜leptins能引起组织中lepr表达的不同变化而发挥独特的生理功能。     

3种鳜鱼生长与摄食量、胃蛋白酶活性和胃蛋白酶原基因表达相关分析

为了解不同种类鳜鱼生长差异的生理基础与机制,比较研究了鳜(Siniperca chuatsi)、斑鳜(Siniperca.scherzeri)和杂交鳜(斑鳜♀×鳜♂)幼鱼30 d内的生长速率与日摄食量、胃蛋白酶活性和胃蛋白酶原(PGA1、PGA2、PGC)基因相对表达量间的关系。结果表明,鳜、杂交鳜和斑鳜日增重率分别为(1.171±0.180)g/d、(1.019±0.104)g/d和(0.433±0.078)g/d,生长速率快慢次序是鳜杂交鳜斑鳜。鳜、杂交鳜和斑鳜平均日摄食量分别为(6.1±0.31)g/d、(5.26±0.33)g/d、(4.24±0.23)g/d。胃蛋白酶比活力最高部位是胃,实验前期,3种鳜鱼胃蛋白酶比活力差异不显著;后期,鳜、杂交鳜和斑鳜胃蛋白酶比活力分别为(347.8±13.3)U/g、(303.4±12.1)U/g和(272.1±10.9)U/g。胃蛋白酶原基因表达量随生长阶段缓慢增加,PGC∶PGA1∶PGA2基因相对表达量比例是1.1∶1.0∶0.7;鳜胃蛋白酶原基因的相对表达量均为最高,杂交鳜相对表达量略高于斑鳜(P0.05)。结果表明,3种鳜鱼的生长速率快慢与它们的摄食量大小之间呈正相关,摄食量大小与其消化能力间也具有相对应的关系。     

光色对中华绒螯蟹幼体诱集与仔蟹摄食的影响

为揭示不同发育阶段中华绒螯蟹Eriocheir sinensis对光照颜色的行为反应,探究蟹类颜色视觉的特征,采用自制的试验装置,研究了蓝光(波长446~493 nm)、绿光(波长502~579 nm)、黄光(波长586~600 nm)、红光(波长620~644 nm)、白光(波长440~637 nm)对中华绒螯蟹Ⅱ~Ⅴ期溞状幼体与大眼幼体的诱集效果,以及对仔蟹摄食的影响。结果表明:在室内试验装置中,Ⅱ~Ⅴ期溞状幼体和大眼幼体在蓝光下的分布率最高,极显著高于其他光照组(P0.01),各期幼体在绿光下的分布率也不同程度地高于其他光照组;在室外土池中,采用容积为1 L的捕苗器,在蓝光下捕获大眼幼体的数量最多,为1097尾,极显著高于白光组(253尾)、红光组(121尾)和黄光组(35尾)(P0.01),显著高于绿光组(629尾)(P0.05);24 h内各光色组中仔蟹的昼夜摄食量结果显示,各组仔蟹的日摄食量无显著性差异(P0.05),白天摄食量平均值高于夜晚,但差异并不显著(P0.05)。     

盐度对口虾蛄假溞状幼体存活和摄食的影响

在实验室条件下,观测了盐度对口虾蛄Oratosquilla oratoria Z9～Z11期假溞状幼体存活和摄食的影响.设置盐度骤变和渐变两组试验,骤变试验以27为基础盐度,将假溞状幼体直接放入盐度为51、48、45、42、39、36、33、30、24、21、18、15、12、9的海水中;渐变试验盐度分别从24和33开始,每隔12h降低(低盐渐变)和升高(高盐渐变)一次盐度值,变化幅度为1,直至口虾蛄假溞状幼体全部死亡.以体长为5.19～8.91 mm(平均体质量为0.058 g)的鲜活糠虾作为饵料.试验结果表明:当盐度骤变到18～36时,口虾蛄假溞状幼体比较适应,24h时成活率在77.8％以上;盐度骤变情况下,24h半致死盐度为15.94和41.13;假溞状幼体适应骤变盐度的低盐度和高盐度极限分别为12和48,适应渐变盐度的低盐度和高盐度极限分别为6和54;当盐度低于15或高于45时,口虾蛄假溞状幼体基本不摄食,盐度为27、30和33时,假溞状幼体的摄食量明显高于其它盐度组.综合考虑成活率和摄食两方面的因素,培育口虾蛄Z9～Z11期假溞状幼体的适宜盐度为27 ～33.     

鳜胸腺组织学结构及抗体分泌细胞的免疫组织化学

使用常规组织学和免疫组织化学方法对鳜胸腺进行研究。观察到鳜胸腺位于鳃盖与背的联合处,呈三角形,对称分布;胸腺实质随年龄增长分叶逐渐明显,大体可分三个区,外区、中区和内区,中区和内区分别相当于哺乳动物的皮质区和髓质区。外区主要由扁平上皮细胞和粘液细胞组成,中区可观察到大量网状纤维和淋巴细胞,内区主要由排列较疏松的淋巴细胞组成。此外,光镜下还观察到哈氏小体和髓质上皮囊的存在。免疫组织化学结果显示胸腺中抗体分泌细胞主要分布在外区和中区,胸腺分叶部位尤为明显。阳性细胞胞膜着色明显,呈清晰棕黄色。     

鳜胸腺组织学结构及抗体分泌细胞的免疫组织化学

使用常规组织学和免疫组织化学方法对鳜胸腺进行研究。观察到鳜胸腺位于鳃盖与背的联合处,呈三角形,对称分布;胸腺实质随年龄增长分叶逐渐明显,大体可分三个区,外区、中区和内区,中区和内区分别相当于哺乳动物的皮质区和髓质区。外区主要由扁平上皮细胞和粘液细胞组成,中区可观察到大量网状纤维和淋巴细胞,内区主要由排列较疏松的淋巴细胞组成。此外,光镜下还观察到哈氏小体和髓质上皮囊的存在。免疫组织化学结果显示胸腺中抗体分泌细胞主要分布在外区和中区,胸腺分叶部位尤为明显。阳性细胞胞膜着色明显,呈清晰棕黄色。     

鳜鱼血清总胆固醇含量与性别关系研究

用硫磷铁法测定了不同性别的26尾鳜鱼血清总胆固醇含量,结果表明,13尾雌性鳜鱼总胆固醇的平均含量为754.7mg/100mL,13尾雄性鳜鱼总胆固醇的平均含量为988.2mg/100mL。t检验表明,雄性鳜鱼血清总胆固醇含量显著高于雌性鳜鱼。     

急性低氧胁迫对翘嘴鳜抗氧化酶、呼吸相关酶活性及相关基因表达的影响

[目的]从酶活性和基因表达水平分析低氧胁迫对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)应激的生理响应过程,为其健康养殖及耐低氧品种选育提供科学依据.[方法]选取体表无损伤、体重450±20 g/尾、体长24.0±0.7 cm的健康翘嘴鳜进行低氧(溶解氧含量2.8±0.2 mg/L)胁迫,设常氧(溶解氧含量6.5±0.2 mg/L)为对照组,分别在低氧胁迫0、6、12、24、48和96 h时采集翘嘴鳜的肝脏和鳃组织样品,进行抗氧化酶、呼吸相关酶活性及低氧诱导反应相关基因表达测定.[结果]在整个急性低氧胁迫过程中,翘嘴鳜肝脏过氧化氢酶(CAT)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及谷丙转氨酶(GPT)活性均呈先升高后降低的变化趋势,GSH含量从低氧胁迫6 h起显著高于对照组(P<0.05,下同),CAT和GPT活性从低氧胁迫12 h起显著高于对照组.鳃组织乳酸脱氢酶(LDH)活性先升高后降低再升高,在胁迫6 h时达最高值(849.67 U/mg),显著高于对照组;超微量总ATP酶(ATPase)活性呈降低—升高—降低的变化趋势,且显著低于对照组.低氧胁迫组翘嘴鳜肝脏HIF-1α基因的相对表达量在胁迫48 h后显著上调;EPO基因的相对表达量先升高后降低,在胁迫12 h时显著上调;HSP90α基因的相对表达量在胁迫6和48 h分别出现峰值,其他时间点与对照组持平.[结论]急性低氧胁迫对翘嘴鳜肝脏抗氧化酶、鳃组织呼吸相关酶及低氧诱导反应相关基因表达均产生显著影响.虽然翘嘴鳜能通过自我调节抗氧化酶和呼吸相关酶活性及上调低氧诱导反应相关基因表达,促使机体适应低氧环境,但溶解氧降至2.8 mg/L以下即对其产生不利影响,因此在实际养殖过程中须密切关注养殖水体溶解氧变化.     

中国美利奴超细型与哈萨克羊毛囊兴盛期皮肤组织消减cDNA文库的构建

【目的】筛选影响绵羊羊毛性状的重要候选基因,为研究羊毛性状形成的分子机制奠定基础。【方法】利用抑制性消减杂交技术构建中国美利奴超细型和哈萨克羊兴盛期皮肤组织间正、反向消减cDNA文库,并对差异基因进行测序和生物信息学分析;应用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR对部分差异基因进行鉴定。【结果】①从所构建绵羊皮肤组织的正、反向消减cDNA文库中分别获得153和143个ESTs,其中分别包括5和4个未知功能的ESTs,推测可能是新基因;对部分已知功能ESTs进行了GO聚类分析、通路分析和蛋白互作分析,结果显示粗、细毛羊之间存在一定差异;②文库中的3个差异基因KRTAP8-2、Trichohyalin和KRTAP3-2均能在皮肤中特异性地高表达,其中KRTAP8-2和Trichohyalin基因在中国美利奴超细型羊皮肤组织中的表达丰度分别是哈萨克羊的3.45和2.07倍,而KRTAP3-2基因在哈萨克羊皮肤组织表达丰度是中国美利奴超细型羊的1.87倍。【结论】成功构建了中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织间抑制性消减cDNA文库,初步筛选出一批可能影响羊毛性状的差异表达ESTs。