马MxA基因第13外显子的多态性研究

[目的]研究4个品种马MxA基因第13外显子的多态性。[方法]根据GenBank中已公布的MxA基因序列设计引物,利用PCR技术从三河马、锡尼河马、乌审马和巴尔虎马血液基因组DNA中扩增MxA第13外显子基因片段,利用PCR-SSCP方法检测该基因片段多态性并进行测序。[结果]只有乌审马MxA基因第13外显子存在多态性,第2 018位点发生了突变,鸟嘌呤（G）→腺嘌呤（A）,由此导致氨基酸发生改变,由谷氨酸（G lu）→丙氨酸（A la）。[结论]该研究为探讨马MxA蛋白基因抗病毒作用奠定了基础。     

蒙古族传统相马术理论及其改进性研究

[目的]将内蒙古传统相马术和现代分子生物学技术相结合,找出一种更为科学简便的相马方法。[方法]对试验马COMT基因位点单个基因的多态性与性格性状关联性进行研究,并从分子生物学角度探讨马的性格遗传特点。[结果]电泳检测表明:COMT基因第2外显子的PCR产物与Marker DL2000相比,其位点在250 bp下方。PCR-SSCP分析结果表明:马基因组DNACOMT基因第2外显子存在单核苷酸多态性,所检测的30个个体中,发现2种基因型,即AA和AB型。测序结果表明:COMT基因的第2外显子161位置存在一个多态位点。COMT基因第2外显子多态性与马的竞争性有显著相关性,与其它性格没有显著相关性,AB型马的竞争性比AA型强。[结论]该研究为马的鉴定提供了新的技术支持。     

汉族人群聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1遗传多态性的检测

目的:通过检测人聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(hPARP-1)7个外显子核苷酸多态性,了解在广东的汉族人群中hPARP-1基因多态性分布,为建立民族特色的DNA修复基因多态性数据提供基础资料。方法:选取在广东地区的汉族健康人群320名的基础资料及血液样本,抽提血液DNA,用PCR法扩增hPARP-1基因7个外显子,采用聚合酶链式反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)和银染技术检测hPARP-1基因多态性,并进行DNA序列测定。结果:在广东的汉族正常人320名血标本的7个外显子扩增产物SSCP电泳条带中,4个样本hPARP-1基因外显子17的SSCP电泳条带检出1条多态性条带,3个样本第12内含子检出1条多态性条带,其余6个外显子扩增产物SSCP电泳未见多态性条带。正常带型DNA测序结果与genebank中已知序列完全一致,第17外显子上有1种基因突变类型(T→C)。结论:在广东地区的汉族人群的hPARP-1基因第17外显子和第12内含子上可能存在多态性。     

马MxA基因第12外显子多态性检测(英文)

[Objective] The study aimed to establish a fast and accurate method to detect the polymorphism of the 12th exon of equine MxA gene. [Method] The 12th exon of MxA gene was amplified by mismatch PCR and the products were analyzed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) to determine the point mutation at the 1 790 nt of MxA cDNA. The sequence of the PCR products was also analyzed. [Result] There were three genotypes (AA, AB and BB) in the 12th exon of equine MxA gene; the 2 081 nt of MxA cDNA mutated from G to C, correspondingly changing the 562th amino acid of the coding region of MxA protein from tryptophan to cysteine; the specific sequence of the PCR products amplified by mismatch PCR-RFLP was consistent with the analysis results of RFLP. [Conclusion] The mismatch PCR-RFLP was an easy method with accurate results to detect the polymorphism of the 12th exon of equine MxA gene.     

马Mu阿片受体基因第一外显子的PCRSSCP分析

[目的]采用PCR．SSCP方法对马Mu阿片受体基因第一外显子压域进行分析,以求发现SNP位点。[方法]以纯血马、三河马、乌珠穆沁马、锡尼河马、巴尔虎马和乌审马6个类型马共计297个个体的血样为研究材料,对马Mu阿片受体基因的第一外显子进行PCR扩增和PCR—SSCP分析,并比较不同品种的基因型频率。[结果]通过PCR-SSCP分析确定不同品种马MOR基因第一外显子区域存在多态性,共发现了AA、AB和BB3种基因型,且AA型为优势基因型,等位基因A较B为优势等位基因.除纯血马外,其他各群体中3种基因型均有分布。对AA和BB2种基因型个体PCR产物进行的竞隆测序发现,AA型在第167位发生了A—G的转换。[结论]该研究为丰富马品种的种质特性资料库和分子育种提供理论依据。     

马MxA基因真核载体表达重组质粒的构建与鉴定

从马外周血单核细胞中提取RNA后,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,获得了MxAcDNA.扩增的目的基因片段经琼脂糖凝胶电泳回收,与pGEMR-T Easy栽体连接,转入大肠杆菌中筛选鉴定重组子.将质粒经酶切鉴定后.把酶切下的目的基因MxA cDNA进一步克隆到真核表达载体pCI-neo中,经PCR及序列鉴定,证实插入栽体pCI中的片段为含有目的基因的核苷酸序列.真核表达重组质粒DCI-neo MxA cDNA的构建成功,为进一步研究马MxA蛋白的抗病毒作用奠定了基础.     

3种食用菌漆酶活性比较及其基因的克隆与序列分析

[目的]研究食用菌漆酶基因的差异以及漆酶的活性。[方法]利用编码杏鲍菇漆酶基因序列（GenbankNo．AY686700）设计特异性引物,采用PCR方法获得3种典型木腐食用菌（杏鲍菇、平菇、白灵菇）漆酶的基因序列。[结果]扩增得到的片段长度均为2606bp,通过对基因序列的内含子／外显子分析,获得漆酶编码区的cDNA,该基因的开放阅读框由1596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽。3种食用茵漆酶基因的核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为99．81％,说明漆酶的一级结构序列具有很高的保守性。[结论]序列的差异性、氨基酸跨膜区的不同及蛋白质的构象不同可能导致漆酶活性的高低。     

信阳水牛PRL基因单核苷酸多态性与生长性状的相关性

以50头信阳水牛为材料,以GenBank公布的牛PRL基因序列(NC_007324)作为参照序列,设计PCR引物,对PRL基因的第2、4、5外显子进行变异检测,并将其多态性与部分生长性状进行相关分析.结果表明:试验牛群体中,每一外显子的PCR扩增产物经SSCP分析均出现不同带型；试验牛PRL基因第2、4、5外显子各存在...     

纯血马和百色马IGF1R基因蛋白编码区序列的多态性分析

[目的]研究纯血马和百色马IGF1R基因成熟蛋白编码区序列的多态性,为揭示马矮小性状的分子机理和马的分子育种提供理论参考。[方法]采集纯血马和百色马的血样各57份,按常规酚仿法抽提DNA。利用DNA混合池和PCR产物直接测序的方法检测IGF1R基因的多态位点,利用PCR-RFLP技术分析这些多态位点在纯血马和百色马中的基因型及其频率分布。[结果]在马IGF1R基因的第2、第5和第16外显子上存在4个多态位点,其中突变179627 T→C为纯血马和百色马共有,且两者在基因型频率上差异不显著;突变212077 G→A为纯血马所独有;突变406 T→C和212 110 G→A为百色马所独有。[结论]马IGF1R基因的多态位点可能与百色马的矮小和纯血马的高大有关。     

大口黑鲈IGF-I基因内含子1、3和4序列多态性研究

根据大口黑鲈IGF-I基因的cDNA序列设计引物,克隆IGFI基因内含子核苷酸序列,采用PCR产物直接测序方法,在中国养殖群体和美国野生群体中筛选IGF-I基因内含子上的多态位点。应用RFLP、CRS—RFLP和SSCP技术建立多态位点的检测方法,同时比较分析其中4个多态位点在两个群体中基因频率分布。结果表明：（1）IGF-I基因内含子1、3和4序列长分别为1317bp、712bp和1941bp;（2）在3个内含子上共发现7个多态位点,其中在内含子1的208和1070位为G—A突变;内含子3的第40个碱基为一个“A”的插入-缺失突变,第307位为C—T突变,683位是G—A突变;内含子4上的696碱基处有一个20bp的插入-缺失突变,在1563位为G—A突变,表明大口黑鲈IGF-I基因序列上存在较多的SNPs;（3）内含子1上SNPG1070A的A等位基因能为HindIII限制性内切酶识别,采用RFLP技术分型。根据内含子1上SNPG208A侧翼序列,设计错配引物,使错配碱基和A等位基因共同形成TaqI酶切位点,建立CRS—RFLP检测方法。内含子4上SNPG1563A采用SSCP检测方法,同时对内含子4上的插入-缺失突变进行PAGE电泳分型。试验结果显示,RFLP、CRS—RFLP和SSCP三种SNP检测方法简单易行,适于在水产动物SNP标记研究中推广应用;（4）在中国养殖群体中,只有内含子1上的SNPG1070A具有多态性,其它3个多态位点只在美国野生群体中存在多态,证实中国养殖群体的遗传多样性相对较低。     

马MxA基因第13外显子的多态性研究(英文)

[Objective] To investigate the polymorphism of the thirteenth exon of MxA gene in 4 species of horse. [Method] The thirteenth exon of MxA gene fragments were amplified from genomic DNA of Sanhe horse, Xinihe horse, Wushen horse and Baerhu horse with the primers designed according to the MxA sequence announced in GenBank; the polymorphism of MxA gene was detected by PCR-SSCP and the products were sequenced. [Result] The polymorphism of the thirteenth exon of MxA gene appeared only in Wushen horse, the 2 081 nt of which mutated from guanine (G) to adenine (A) and the corresponding amino acid of which changed from glutamate (Glu) to alanine (Ala). [Conclusion] The study provided a basis for exploring the antiviral effect of MxA protein.     

马MxA基因第12外显子多态性检测

MxA蛋白是Ⅰ型干扰素（IFNα／β）所诱导产生的蛋白之一,属于大分子（70～80kD）GTP酶,能抵抗各种RNA病毒和部分DNA病毒。MxA蛋白结构与其抗病毒活性有直接的关系。有报道表明,MxA蛋白活性部位的一个氨基酸序列的变换,会导致其抗病毒活性的改变。MxA基因多态性分析是研究马MxA蛋白基因抗病毒作用和寻找马MxA蛋白抗性基因的基础。     

山羊抑制素α前体基因5'侧翼区及外显子的克隆与序列分析

[目的]弄清INHα前体基因与山羊繁殖季节性的关系,并研究INHα前体基因进化的保守性。[方法]对常年发情的山羊品种海门山羊和季节性发情的山羊品种安徽白山羊共20只母羊的抑制素0【前体基因（INHα）5’侧翼区和外显子进行了克隆和序列比较分析。[结果]与安徽白山羊相比,海门山羊INHα前体基因存在3个SNP,不存在氨基酸改变,核苷酸同源性为99．7％,氨基酸同源性为100％。在山羊、牛、猪、人、鸡、马、大鼠、狗之间INHα前体基因的核苷酸序列同源性为12．7％-96．5％。[结论]INHα前体基因在物种内趋于高度保守,任何核苷酸和氨基酸的改变都可能直接影响整个基因编码和基因调控能力的改变。     

猪CSTB基因的克隆及多态性分析

[目的]利用RT-PCR方法克隆猪CSTB基因exon2序列,对所得序列进行多态性分析。[方法]以大白猪cDNA为模板,采用RT-PCR克隆方法,首次获得猪exon2序列,提交GenBank收录(GenBank登录号:DQ534493)。[结果]通过RT-PCR方法,克隆测序得到的猪CSTB基因exon2序列与人、鼠的CSTB基因exon2序列同源性分别为80.39%与72.55%。对所得猪exon2序列进行多态性分析,发现第26和78个碱基位置发生突变,分别为A→T和C→T,其中第26个碱基为错意突变,导致氨基酸的改变。[结论]CSTB基因exon2序列在猪、人和鼠上相对保守。     

肺炎克雷伯菌药物外排泵mdtl的克隆及分析

[目的]探讨肺炎克雷伯菌ATCC 49790（KP）耐药的分子机制。[方法]以KP基因组DNA为模板来扩增mdtl基因,将mdtl基因扩增产物进行DNA测序及同源性分析;将扩增产物与载体连接后转化到大肠埃希菌KAM32感受态细胞中,对转化子进行药敏分析。[结果]KP的mdtl基因扩增产物与已报道的mdtl基因核苷酸序列同源性达到99%,这个转化子对红霉素、氯霉素和卡那霉素具有很高的耐药性,这种高耐药性能被外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙和维拉帕米逆转。[结论]克隆到了KP一多药外排基因。     

中国4个牛种MSTN基因外显子2多态性分析与其系统发生关系研究

[目的]解决牛亚科动物近缘物种的分类归属问题,了解牛亚科各种群遗传多样性。[方法]采用酚-氯仿抽提法从4个中国牛种中提取基因组DNA,对MSTN基因进行PCR扩增和测序,构建系统发育树,探讨4个牛种间MSTN基因外显子2的系统发生关系。[结果]MSTN基因外显子2编码区为372 bp。蒙古牛、牦牛和独龙牛的MSTN基因外显子2具有丰富的多态性。在所测66个样本中存在3个核苷酸多态位点,定义了6种单倍型。雷琼牛、蒙古牛、独龙牛与巴州牦牛享有共同的单倍型。巴州牦牛独自聚成一支,而雷琼牛与一部分独龙牛、大部分蒙古牛和引用瘤牛聚成一支。[结论]蒙古牛、雷琼牛、独龙牛种间存在着基因交流。牦牛与普通牛、瘤牛的分化较明显,比瘤牛与普通牛的亲缘关系要远。     

从不同材料中提取马DNA方法的比较研究

[目的]通过对5种从不同材料中提取马DNA的方法进行比较研究,寻找最适的提取方法。[方法]采用酚仿抽提法、蛋白酶K直接消化法、酸碱裂解法分别从血液、毛发材料中提取马DNA,并通过PCR扩增对提取产物进行检测。[结果]通过蛋白酶K直接消化法、酸碱裂解法可从微量血液和毛发中提取到马DNA,均可达到采用酚仿抽提法从血液中提取马DNA的效果,并能满足后续分子生物学试验的要求。[结论]通过比较分析,该研究中以酸碱裂解法最佳。