干旱胁迫下耐旱稻中旱3号全长cDNA文库的构建

干旱胁迫导致很多基因的表达发生变化.以干旱胁迫下的耐旱稻品种中旱3号为材料,我们用SMART技术(RNA转录5'末端模板转换技术)成功构建一个高质量的干旱胁迫诱导的节水抗旱稻中旱3号全长cDNA文库.体外包装后感染大肠杆菌XL1-Blue宿主菌,未扩展文库的滴度为1.94×10pfu/mL,重组率为85.15%.扩展后文库的滴度为1.45×1011 pfu/mL.将九噬菌体臂转入pTriplEx2质粒,从中随机挑选100个克隆,PCR扩增检测插入片段长度,结果显示文库插入片段在500～2 000 bp之间.     

甘薯高类胡萝卜素突变体农大辐14块根cDNA文库的构建及鉴定

为分析和克隆甘薯块根中类胡萝卜素生物合成的相关基因,以甘薯品种高系14号经60Coγ射线慢照射结合茎尖培养获得的高类胡萝卜素含量突变体农大辐14的块根mRNA为材料,利用Clontech SMART cD-NA LibraryConstruction Kit构建了其cDNA文库.初始文库的独立克隆为0.57×106 pfu,滴度为4.9×106 pfu/mL,重组率为88%,插入片段大小为0.3～2.5 kb,大于0.4 kb的克隆比例为70%,独立克隆数为理论值的3倍.扩增文库的滴度为5×109 pfu/mL.鉴定结果表明该文库可用于基因克隆与分析.     

紫杆柽柳cDNA文库构建与硫氧还蛋白基因的克隆

以NaHCO3胁迫的紫杆柽柳(Tamarixandrossowii)为材料建立了cDNA文库。经检测,文库的初始滴度为5.7×105pfu,重组率为96%,插入片段的长度在0.3~3.0kb之间,平均长度为1.2kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu/ml。对文库克隆进行随机测序,获得了紫杆柽柳的硫氧还蛋白(Thioredoxin)基因序列。生物信息学分析表明获得的硫氧还蛋白基因全长683bp,其中5'非翻译区长56bp,3'非翻译区长204bp,开放读码框长423bp,编码140个氨基酸,蛋白的分子量为15.1kD,理论等电点为5.59,其氨基酸序列中具有硫氧还蛋白的保守活性位点“WCGPC”序列,Clustal分析表明该硫氧还蛋白与蓖麻(Ricinuscommunis)的硫氧还蛋白氨基酸序列同源性高,达65%。本研究构建的cDNA文库为柽柳基因克隆和系统研究柽柳抗逆分子机理奠定了基础。     

葡萄果实cDNA文库的构建及鉴定

构建葡萄果实cDNA文库是研究果实发育相关基因表达调控的基础工作.本实验从巨峰葡萄果实中提取了高质量的RNA,利用MMLV反转录酶把总RNA中的mRNA反转录成cDNA第一链,用特异引物进行LD-PCR扩增合成双链cDNA.将分级纯化的带有粘性末端双链cDNA与λTrip Ⅰ Ex2载体连接,重组载体体外包埋成为cDNA原始文库.初步鉴定原始文库的滴度为1.32×106 pfu/mL,文库扩增后滴度达1.45×1010 pfu/mL.从扩增文库中随机挑取250个克隆进行PCR鉴定,结果表明重组率为98.7%,插入片段大小在0.5～2.0 kb之间,因此,本研究成功构建了葡萄果实cDNA文库.     

夏黑葡萄花及果实全长cDNA文库的构建及鉴定

构建葡萄花果全长cDNA文库是开展葡萄花及果实发育的分子机理研究的重要工作基础,有助于重要相关基因的克隆、功能分析、调控及其利用.以生产上广泛栽培、性状优良且极具代表性的夏黑葡萄为试材,应用优化的Creator SMART cDNA Construction Kit技术,构建了夏黑葡萄花和果实的全长cDNA文库.文库的滴度为1.2×106 pfu/mL,库容为6.0×106 pfu/mL.从文库中随机挑取30个克隆进行菌落PCR鉴定的结果显示:插入片段大小为1.0~3.0 kb,重组率为99%.研究结果表明,该葡萄全长cDNA文库具备较高的质量.     

黄麻幼苗cDNA文库的构建和质量鉴定

黄麻全长cDNA文库的构建对开展黄麻遗传和功能研究具有重要的应用价值.以生产上的优良品种闽引一号为材料,利用Creator SMART cDNA Construction Kit技术,成功构建了黄麻苗期的全长cDNA文库.文库的滴度为1.9× 106 pfu/mL.随机挑取86个克隆进行菌落PCR鉴定,结果显示:插入片段的大小在0.5～2.0 kb之间.研究结果表明,黄麻全长cDNA文库的质量较高.     

彩叶草叶片cDNA文库的构建与分析

用植物(叶)总RNA抽提试剂盒提取彩叶草红色品种顶部叶片总RNA,用SMART cDNA Library Construction Kit构建cDNA文库。经测定原始文库滴度为1.2×106 pfu/ml,扩增总文库滴度为6.7×109 pfu/ml,重组率达到98%,插入片段在0.5 kb到2 kb之间,1 kb以上的占60%。通过PCR检测,从总文库中检测到了彩叶草CHS、DFR 及ANS基因的特异片段。各项指标都表明,已获得较高质量的cDNA文库,为彩叶草叶色基因的分离克隆,彩叶草类黄酮类色素合成的分子调控的研究奠定了基础。     

小麦条锈菌诱导性小麦cDNA文库的构建及其质量评价

小麦条锈病是由小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)侵染引起的世界性气传叶部病害之一,在我国发生尤为普遍而严重,是小麦(Triticum aestivum L.)生产上最重要病害,克隆并研究小麦抗条锈病相关基因的生物学功能具有重要的应用价值和现实意义.在本研究中用中国当前毒性最强优势条锈菌小种CY32侵染诱导的小麦抗条锈病基因Yr5近等基因品系Taichung29*6/Yr5为试材,构建非亲和条锈菌小种侵染诱导的小麦cDNA文库.研究结果表明所获得的原始文库滴度0.9x106 pfu/mL,扩增文库滴度1.0x109pfu/mL,重组率98%,插入片段在0.5 kb到3.0 kb之间,多在1.0 kb左右.因此该文库可用于基因克隆与分析,为研究小麦抗条锈病相关基因提供条件.     

抗草甘膦真菌(Candida palmioleophila)分离鉴定及其cDNA文库构建

利用瓶培养富集技术从生产草甘膦工厂排污口的污泥中筛选抗草甘膦菌株,通过菌株形态学鉴定、生理生化特性测定及18S rRNA序列分析,确定其为假丝酵母菌(Candida palmioleophila)。以供试的抗草甘膦菌株总RNA为起始模板,利用Clontech公司的SMARTer技术构建cDNA文库。文库质量鉴定表明:原始文库滴度为2.58×106cfu/mL,扩增后文库滴度为3.42×109cfu/mL,文库库容为2.58×106cfu,重组率为97.6%,插入片段范围为500bp~3kb,主要集中在1kb附近。表明构建的TY-JM的cDNA文库质量符合要求。     

阔褶水蛙皮肤组织cDNA文库的构建及抗菌肽brevinin-2LTs的eDNA克隆和序列分析

运用SMART技术成功构建了阔褶水蛙(Hylarana latouchii)皮肤组织全长cDNA文库,用来筛选抗菌肽及其他功能性基因.经鉴定,原始文库滴度为9.7×106 cfu/mL,重组率达到91%,插入片段大小在0.3～1.5 kb)范围内,文库扩增后的滴度为1.9×109 cfu/mL,说明所构建文库质量较高.通过该文库成功筛选出2个抗菌肽cDNA序列,此序列属于brevinin-2家族,因此命名为brevinin-2LT1和brevinin-2LT2.     

U.S. Economic Growth vs. Environmental Conditions

A widely-held belief is that stricter environmental regulations stifle economic growth. To determine empirically the effect of environmental conditions and policies on state-level per capita income growth, a Barro-type economic growth model was estimated for the years 1982 to 1991, which correspond to two consecutive troughs in the business cycle. States with better environmental conditions had significantly higher income growth rates during this period. At the same time, stricter environmental policies did not significantly depress income growth. Data used include recently developed, consistent measures of environmental policy and quality for individual states, as well as data from the 1980 U.S. Census and Bureau of Economic Analysis.     

Cytology of Phleum sp. affin. P. montanum C. Koch

Diploid, tetraploid, and hexaploid plants occurred in foreign plant introductions of P. sp. affin. P. montanum from Turkey and Iran. Within-progeny variations in polyploid levels indicate that divergent races occurred as interspersed but natural populations. One to six B-chromosomes of varying sizes in addition to the normal chromosome complement were present in some plants. Their behaviours appeared essentially similar to those recorded for other species. Certain of the plants examined exhibited cytological features similar to those observed in known hybrids. These included prophase pycnosis, stickiness, split metaphase I plates, unoriented chromosomes at M-1, and low levels of pollen stainability. These features were absent in microsporocytes of other plants. Low open-pollination seed set characterized all plants examined. This may be due to hybridity or possibly to response to ecological conditions of the new environment.Results of co-operative work of the Crops Research Division, A.R.S., U.S. Department of Agriculture, and the Wisconsin Agricultural Experiment Station, Madison, Wisconsin.Former Graduate Student, Department of Agronomy, Wisconsin Agricultural Experiment Station, and Geneticist, Crops Research Division, Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture.     

金铁锁总皂苷提取工艺研究

采用正交设计,以齐墩果酸为对照品,采用5%香草醛冰醋酸-高氯酸显色剂,以总皂苷提取率为指标来确定金铁锁的最佳提取工艺。结果表明,最佳提取工艺如下：提取温度为70℃、乙醇浓度为80%、提取时间90 min、料液比1:8,该方法成本低、结果稳定、重复性好。     

秈粳稻杂交育种研究

作者研究了秈粳杂种的生育特性及结实性等经济性状的遗传变异,认为以出穗期为主要指标进行选择,结合其他性状的变异动态,逐步确立优良系统,有助于提高选择的效率,和建立较为合理的杂交育种程序与方法。