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相似文献
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1.
提取高质量的线粒体DNA,对植物细胞质雄性不育的研究起着关键性的作用。以胡萝卜叶片为材料,通过高盐差速离心和蔗糖沉淀差速离心2种方法提取线粒体DNA。通过改变分离和沉淀线粒体离心力大小、使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体。用SDS和蛋白酶K裂解线粒体经酚/氯仿/异戊醇抽提除去蛋白,并用RNaseA消化从而得到单纯线粒体DNA。还特别设计了叶绿体特,异性引物检测线粒体DNA纯度。结果表明:利用优化后的蔗糖沉淀差速离心法提取胡萝卜线粒体DNA,不仅操作简单,而且所得线粒体DNA纯度高、产量高,每克叶片能够得到34.46μg线粒体DNA。  相似文献   

2.
本研究以胡萝卜根为材料,通过高盐差速离心和蔗糖沉淀差速离心两种方法提取线粒体DNA。通过改变缓冲液、使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体。用SDS和蛋白酶K裂解线粒体,经酚:氯仿:异戊醇抽提除去蛋白,并用RNaseA消化从而得到单纯线粒体DNA。本实验还特别设计了叶绿体特异性引物检测线粒体DNA纯度。结果表明:利用优化后的蔗糖沉淀差速离心法提取胡萝卜线粒体DNA,所得线粒体DNA纯度高、产量高,每克肉质根能够得到27.60μg线粒体DNA。  相似文献   

3.
梭梭属2种植物线粒体基因组的提取   总被引:1,自引:1,他引:0  
为了分离提取高质量梭梭(Haloxylon ammodendron)、白梭梭(Haloxylon persicum)线粒体DNA,以藜科梭梭属植物梭梭、白梭梭黄化苗为材料,通过采用蔗糖密度梯度离心和差速离心相结合的方法,使用DNaseⅠ处理得到了无核DNA污染的线粒体,用3% CTAB裂解线粒体,经氯仿/异戊醇抽提除去蛋白,从而得到单纯线粒体DNA。结果表明,所提取的线粒体DNA经电泳检测条带清晰,无拖尾现象,且A260/A280≈1.8,说明纯度较高、质量好,可满足后续有关线粒体DNA的相关实验。梭梭、白梭梭高纯度线粒体DNA提取技术的建立,为开展梭梭、白梭梭线粒体基因组研究奠定了基础。  相似文献   

4.
高效快速地分离提取高质量的线粒体DNA(mtDNA)是研究植物线粒体基因及其起源进化的重要前提。为获得高质量的mtDNA进行割手密资源的线粒体基因序列扩增及测序分析,本研究以割手密黄化苗为材料,通过简单差速离心分离得到线粒体,经DNaseⅠ消化处理,去除核DNA杂质得到较纯的线粒体,然后经过5%SDS和蛋白酶K充分裂解线粒体,利用饱和的苯酚/氯仿(1:1)和氯仿两次抽提除去蛋白质,并经过RNase A的消化处理除去RNA,无水乙醇沉淀等一系列操作得到mtDNA。所提取的mtDNA样品经紫外吸收光度测定,琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增分析其浓度和纯度,结果表明利用该方法提取的mtDNA纯度高,完全能满足后续PCR分析及分子克隆测序的要求。该方法不仅DNA提取纯度高,操作简单、快速经济,可为今后开展甘蔗及其各野生种的研究提供技术支持。  相似文献   

5.
为了获得高质量的枸杞花药线粒体,本文介绍了一种差速离心分离纯化枸杞花药线粒体的方法。通过Jannus Green B显色反应、线粒体跳动特性以及电镜观察鉴定,结果表明采用本差速离心法提取的线粒体纯度高、活性强、结构完整。进一步通过琼脂糖电泳、光密度值及核特异引物PCR检测表明,由该线粒体裂解的mtDNA不仅纯度高、质量好,而且得率高。本差速离心法具有简捷、高效和经济等优点。用该方法获得的线粒体完全能够满足线粒体基因组、蛋白质组等相关分子生物学研究要求。  相似文献   

6.
春兰基因组DNA提取方法的研究   总被引:20,自引:0,他引:20  
本文以春兰(Cymbidiumgoeringii(Rchb.f.)Rchb.f.)为研究试材,对植物基因组DNA提取方法中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析,试图找出春兰基因组DNA提取的最佳方法。结果表明:采用进口的CTAB提取效果比国产的CTAB要好,特别适用于花药的提取,蛋白质去除效果很好;SDS提取缓冲液配制方法很重要,不同的SDS缓冲液配制方法,其提取效果差异较大。春兰花苞的DNA提取得率较叶片高,但是叶片DNA的纯度则相反,叶片较花苞高。在提取花苞基因组DNA过程中,增加氯仿/异戊醇抽提次数,对去除DNA中蛋白质、多糖及其它杂质有一定的作用,但是对DNA的损失也是很明显的。从实验效果来看,氯仿/异戊醇抽提次数以2次为宜。提取基因组DNA在异丙醇沉淀时,采取挑取絮状沉淀的方法,也可减少蛋白质、多糖等其它杂质的影响,从而提高DNA纯度。无论是叶片还是花苞材料,采用异丙醇沉淀5min,一般析出的以核酸基因组DNA为主,蛋白质为次,核酸析出量在80%以上。继续沉淀(15min)的产物中DNA含量明显较低,而且沉淀的纯度相对不高,因此异丙醇沉淀时间可以缩短到10min之内以提高DNA的纯度。使用CTAB法提取DNA时,水浴时间至少需要30min,过短的水浴时间会造成DNA得率的下降,同时过长的水浴时间,如超过1h,则可能会引起DNA的降解,或者最后产物中增加其他杂质,因此,适宜的水浴时间当为40 ̄60min。  相似文献   

7.
采用改良的3×CTAB法提取荷花品种笛女、国庆红、红苔莲的叶片、叶柄和花不同部位的DNA,并对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测、纯度检测和ISSR分析.结果表明,除叶柄中提取的DNA效果不理想外,其余从叶片、花中提取的DNA纯度高、得率高,OD260/280比值在1.80左右,OD260/230比值在2.01左右.以红苔莲的花为试材,对改良的3×CTAB法提取基因组DNA的参数进行正交试验,选出提取DNA的最优组合.通过荷花基因组DNA的ISSR分析,完全满足实验要求.  相似文献   

8.
太行花DNA提取的优化和适用分子标记检测   总被引:1,自引:1,他引:0  
比较了常规CTAB法、改良CTAB法和SDS法对太行花叶片总DNA的提取效果,并对改良CTAB法提取的DNA在多种分子标记中的适用性进行了测试。结果表明:常规CTAB法提取的DNA难以完全溶解,且有褐化现象;SDS法提取的DNA产率及纯度都很低;改良CTAB法提取的DNA产率高且稳定,无明显降解,杂质少,OD260/OD280比值在1.8左右。以改良CTAB法提取的DNA为模板,应用叶绿体和线粒体通用引物扩增出了特异性的高效产物,ISSR和RAPD引物对总DNA的扩增也获得理想结果。因此,改良CTAB法适用于太行花总DNA提取,其产物能满足核、叶绿体和线粒体基因组分子实验的要求。  相似文献   

9.
为了提取高质量的割手密叶绿体DNA(chloroplast DNA,cp DNA),本研究立足于高效、省时、低耗的原则,以割手密幼叶为材料,采用改进的高盐-低p H法经差速离心分离叶绿体、DNaseⅠ处理、10%SDS和蛋白酶K裂解叶绿体、DNA萃取、乙醇沉淀等一系列操作。所提取的割手密cp DNA经显微观察、紫外吸收光度测定、琼脂糖凝胶电泳、叶绿体基因特异引物PCR扩增等进行检测,结果表明该提取方法简单高效,A260/A280的比值介于1.9~2.0,cp DNA纯度高,浓度为2.90μg/μL,适用于基因扩增等分子操作。研究结果为进一步开展割手密叶绿体基因功能、系统发育、遗传多样性等方面的研究奠定了基础。  相似文献   

10.
油茶叶片含有较多的多糖和多酚等次生代谢产物是提取DNA的重要障碍。本研究以油茶叶片为材料研究高质量的DNA提取方法。建立了一种改良的CTAB法,运用2×CTAB缓冲液来裂解细胞,在裂解细胞后的溶液中加入终浓度为2 mol/L Li Cl,用氯仿异戊醇抽提溶液,用等体积的异丙醇沉淀DNA,用预热的70%乙醇洗涤DNA沉淀。运用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳分析测定了DNA的产率和质量,并与经典SDS法、经典CTAB法、高盐低p H法进行了对比。结果表明,改良的CTAB法提取的DNA产率比经典SDS的少,与经典CTAB法和高盐低pH法的相似,达到39.0μg/g,且纯度高,无RNA的污染。改良的CTAB法提取的叶片DNA可用于油茶后续的PCR分析研究。  相似文献   

11.
小麦条锈菌DNA提取方法的比较研究   总被引:7,自引:1,他引:6  
以小麦条锈菌夏孢子为实验材料,分析比较了CTAB法、SDS法、尿素法和CTAB/SDS法4种方法对小麦条锈菌基因组DNA的提取效果。结果表明,利用4种方法提取的小麦条锈菌夏孢子DNA的纯度和得率存在一定差异,单位重量夏孢子分离的DNA量依次为:CTAB法>尿素法>CTAB/SDS法>SDS法,而所获得的DNA纯度依次为:CTAB/SDS法>CTAB法>SDS法>尿素法。以不同分离方法获得的小麦条锈菌DNA为模版,利用特异性微卫星引物RJ17进行PCR扩增和电泳分析,4种方法均能满足SSR反应,但CTAB法更适于SSR反应。  相似文献   

12.
以小麦根尖分生组织细胞核及染色体制备高分子量DNA   总被引:2,自引:0,他引:2  
为了克服以叶片为材提取HMW DNA的局限性,优化了一套简便、实用的提取方法。该法以细胞周期同步化处理的根尖分生组织为材,利用机械匀浆释放细胞核或中期染色体制备悬浮液,再以蔗糖密度梯度离心和流式分选技术分别分离细胞核和染色体,经去蛋白、酶切,透析获得HMW DNA。经检测,来自200条根尖(10个胶块)的HMW DNA的浓度约为4~20 ng/µL,而连接、转化后的BAC克隆平均插入片段超过100 kb。证明该法适用于提取HMW DNA以构建BAC文库。  相似文献   

13.
玉米单株幼芽DNA快速提取新方法   总被引:11,自引:0,他引:11  
为了攻克利用DNA指纹技术进行玉米种子纯度鉴定中存在的技术难关,对玉米单株幼芽DNA快速提取方法进行了研究,结果表明:利用新方法提取DNA,不用液氮、不用研磨、不用离心、不用沉淀,不用SDS、不用CTAB、不用氯仿,并且提取的DNA不降解、完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要。一个人提取100株幼芽(1个检测样品)DNA只需30min左右,1d可以提取2000株幼芽(20个检测样品)的。DNA,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。  相似文献   

14.
胡萝卜种质资源遗传多样性的RAPD分析   总被引:5,自引:0,他引:5  
利用RAPD技术对34份胡萝卜种质资源进行遗传多样性研究,以探明各材料间的亲缘关系、遗传多样性及其分类,为进一步利用和创新品种提供参考信息。结果表明,20条随机引物共扩增出139个DNA片段,其中99条带表现出多态性,占总带数的76.74%,对其进行数据化处理后聚类,34份胡萝卜材料可划分为5个类群。材料的归组与根形、根长有一定的相关性。  相似文献   

15.
Four inbred lines of carrot (cytoplasmic male‐steriles and corresponding maintainers) and eight of their F1 hybrids were studied with the amplified fragment length polymorphism (AFLP) technique to examine their genetic relationship and produce markers useful for testing hybrid seed purity. Eighty‐six polymorphic amplicons were identified in bulked DNA samples using eight primer pair combinations. Genetic distance was estimated on the basis of the presence or absence of polymorphic bands. The dendrogram plotted on the basis of the AFLP data closely represented the pedigree relationships of the lines and their hybrids. From one to six amplicons specific for a breeding line were identified. Most of them were also present in the DNA bulks of respective F1 hybrids. However, screening performed on individual plants of two parental lines and the corresponding hybrid indicated insufficient uniformity of parental lines, limiting the applicability of AFLP markers for testing hybrid seed purity.  相似文献   

16.
以胡萝卜及甘薯的原浆和牛奶为乳酸菌的发酵基质,经加工处理、调配后进行乳酸发酵,通过正交试验确定其最适工艺条件。实验表明,胡萝卜、甘薯经处理后与牛奶、蔗糖按一定比例配合(甘薯浆∶胡萝卜浆为1.5∶1;牛奶液的用量为75%,蔗糖用量为5%),接种量为4%,前发酵温度为41℃,前发酵时间为7h,可生产出营养丰富、口味独特的胡萝卜甘薯酸奶,同时增加了酸奶纤维素、维生素和多种微量元素的含量,减少了脂肪含量。该工艺可降低传统酸奶的生产成本,具有良好的应用前景。  相似文献   

17.
超声场强化胡萝卜渗透脱水质量传递的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
对超声场强化胡萝卜渗透脱水过程中的质量传递进行了研究,建立了渗透脱水传质模型。通过实验得出了胡萝卜脱水率及固形物得率,由此确定了超声场强化渗透及自然渗透下的胡萝卜脱水率及固形物得率常数。结果表明,超声场能够强化胡萝卜渗透脱水过程中的质量传递,超声场作用下的胡萝卜失水率常数及固形物得率常数均较自然状态的高;同时通过实验结果分析了超声场强化渗透脱水过程中质量传递的物理机制。  相似文献   

18.
胡萝卜—番茄混合汁乳酸菌发酵饮料的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
开发研制胡萝卜—番茄混合汁乳酸菌发酵饮料。以鲜榨胡萝卜、番茄原汁为原料,以保加利亚乳杆菌为菌种,综合研究了接种量、发酵温度、发酵时间等因素对混合汁品质的影响,从而确定出最佳工艺参数。实验结果表明,发酵液最佳工艺参数为:发酵温度41℃,发酵时间24h,接种量3%;发酵饮料最佳配方为:蔗糖10%,柠檬酸0.05%,稳定剂(CMC—Na)0.4%。  相似文献   

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