山羊乳腺上皮细胞的培养及EGFP基因转化

用组织块培养法获得山羊乳腺细胞原代培养物，并根据山羊乳腺成纤维细胞与上皮细胞对胰蛋白酶的敏感性不同将二者分离纯化。对细胞形态进行光镜观察发现：纯化的山羊乳腺上皮细胞传代至第15代时其生长仍正常。纯化的乳腺上皮细胞增殖可形成圆顶型结构，呈乳头状，称之为乳球体；乳腺上皮细胞可产生并分泌乳汁。山羊乳腺上皮细胞含不同的细胞类型，大多数上皮细胞呈短梭形或多角形，呈蜂窝状；部分细胞呈圆饼状，体积较大；部分细胞呈长形。采用电穿孔法将绿色荧光蛋白（EGFP）基因转化体外培养的山羊乳腺上皮细胞，荧光显微镜下观察到EGFP基因的表达。     

鸡输卵管组织特异性分泌表达载体的构建和表达

摘要：为了实现外源基因在鸡(Gallus gallus )输卵管上皮细胞内的特异性分泌表达，采用RT-PCR的方法扩增了鸡溶菌酶基因的450 bp的cDNA片段，该片段保留了5ˊ端信号肽编码序列。将该片段插入到含有1.2 kb卵清蛋白5ˊ调控序列的特异性表达载体pOVA-GFP中，与绿色荧光蛋白基因形成融合基因，使融合蛋白具有分泌功能。新构建的分泌表达载体pOVALG转染鸡胚成纤维细胞和大鼠乳腺上皮细胞系SHZ-88后，成功地检测到了绿色荧光蛋白的表达。     

褐土碳酸钙结核的胶体特性研究

碳酸钙是黄土母质发育土壤的重要胶结物质，对土壤团粒结构的形成具有重要作用。本文采集了碳酸盐褐土中的碳酸钙结核，采用物理分散法和化学分散法分别提取得到褐土碳酸钙结核纳米颗粒和褐土碳酸钙结核胶体，并以工业纳米碳酸钙作为对照对其胶体特性进行研究。采用X射线衍射仪、zeta电位仪和动态光散射仪对褐土碳酸钙结核胶体和工业纳米碳酸钙的矿物组成、zeta电位和胶体稳定性进行了表征。结果表明：褐土碳酸钙结核胶体、褐土碳酸钙结核纳米颗粒和工业纳米碳酸钙的初始颗粒直径分别为224.24、88.01和98.50 nm，而褐土碳酸钙结核胶体和褐土碳酸钙结核纳米颗粒的多分散度高于工业纳米碳酸钙。褐土碳酸钙结核胶体中方解石含量为70.3%，其次含有石英、长石和伊利石等矿物；褐土碳酸钙结核纳米颗粒主要含有方解石和伊利石，含量分别为48%和45%。3种碳酸钙胶体表面均带负电荷，其zeta电位绝对值均随着溶液pH的增大而增大。褐土碳酸钙结核胶体在NaCl和CaCl₂溶液中的临界聚沉浓度分别为538.01 mmol/L和2.08 mmol/L，褐土碳酸钙结核纳米颗粒在NaCl和CaCl₂溶液中的临界聚沉浓度为82.18 mmol/L和1.11 mmol/L，而工业纳米碳酸钙的临界聚沉浓度为80.37 mmol/L和1.59 mmol/L。3种碳酸钙胶体的矿物组成差异是引发其凝聚行为差别的内在原因，化学分散剂的表面修饰作用、颗粒直径大小和溶液化学条件也是影响胶体稳定性的重要因素。本文研究结果表明，碳酸钙胶体的可变电荷特性可能是其具有胶结特性的本质原因，其对石灰性土壤团聚体结构的影响还需要进一步深入研究。     

外源碳酸钙和温度对黄壤活性有机碳组分及微生物群落组成的影响

为探究不同温度条件下添加碳酸钙对活性有机碳组分及微生物群落组成的影响，以贵州典型黄壤土为研究对象，采用同位素标记法，设置6个处理(培养温度分别为15,25,35℃下添加碳酸钙和不添加碳酸钙),通过分析不同温度下碳酸钙添加对土壤活性有机碳、微生物群落组成的影响，揭示外源碳在土壤活性碳库中的分配规律，以期为贵州典型黄壤有机碳固存和改良提供理论依据。结果表明：各温度下添加碳酸钙显著增加土壤DOC和MBC含量(p<0.01),添加碳酸钙各处理土壤DOC含量在培养第5天均达到最大值，相较于不添加碳酸钙处理，添加碳酸钙处理土壤DOC含量在15,25,35℃下分别显著提高83.41%,80.37%,90.41%;添加碳酸钙处理温度对土壤DOC、MBC具有显著影响(p<0.05),在培养的第15,60天，土壤DOC和MBC含量均在不同温度下达到显著性差异，土壤DOC含量大小依次为35,15,25℃,土壤MBC含量多少依次为15,25,35℃。同位素标记发现，在培养第1和第5天，¹³C-DOC,¹³C-MBC含量在15,25,35℃下达到峰值，且<...     

尼罗罗非鱼胰岛的显微和亚显微结构

应用光镜、电镜及特殊染色等技术对尼罗罗非鱼(Tilapia nilotica)的胰岛及其细胞类型和形态进行了详细的研究。尼罗罗非鱼的胰脏与肝脏混合存在，属于肝胰脏。胰岛散布在胰腺内，无固定的形态，胰岛细胞的数量与类型因胰岛的大小而异。用Gomori醛复红特殊染色法，见尼罗罗非鱼胰岛有三种细胞：A细胞胞质中有黄色颗粒；B细胞胞质中有紫红色的颗粒；D细胞胞质内有浅绿色或淡灰色的颗粒。电镜下，B细胞的分泌颗粒较大,芯的形态多样，电子密度差异大,芯与界膜之间常有较大的间隙；A细胞分泌颗粒形态不规则，芯的大小不等，界膜与芯之间无间隙；D细胞分泌颗粒较多，芯的电子密度较低，界膜与芯之间无间隙。此外，胞质内可见较大的线粒体。     

仔猪睾丸组织块生精细胞体外培养及鉴定初报

目的：建立仔猪睾丸组织块生精细胞爬片体外培养模型。方法：应用溴脱氧核苷尿嘧啶(5＇-Bromo-2＇-deoxyuridine, BrdU)免疫荧光技术检测生精细胞体外增殖分化情况；采用HE染色鉴定体外培养生精细胞分化程度。结果：结果表明体外培养第3天支持细胞开始游出睾丸组织块并贴壁；体外培养第4～8天睾丸组织块周围可见生精细胞，但未见明显增殖分化情况；体外培养第9～20天可明显观察到生精细胞增殖分化，间桥连接(gap junction)的生精细胞集落呈葡萄串或串珠状，并有精子细胞形成。结论：本培养体系能够提供睾丸组织块生精细胞增殖分化所需要的条件，在没有添加睾酮的情况下能够使非精子细胞分化为精子细胞。     

中国马氏珠母贝遗传育种的现状与展望

回顾了中国马氏珠母贝(Pinctada martensii)遗传育种的历史,介绍了最新的研究进展以及传统育种方法与现代生物技术结合的情况,展望了马氏珠母贝遗传改良的前景.提出马氏珠母贝育种应该分别选育育珠贝(母贝)和细胞小片贝,形成两类不同的系列;育珠贝应是以提高生长速度和抗多毛类寄生虫病作为主要选育目标,两个目标可以同时选择;细胞小片贝应以分泌银白色、白色或粉红色珍珠质作为主要选育目标.进一步强调传统育种方法与现代生物技术相结合,科研单位与生产企业相结合,研究与推广相结合,加快育种步伐,缩短育种周期,在"十五"末培育出优良品系在海水珍珠养殖生产上推广应用.     

OPTIMUM TECHNOLOGICAL PARAMETERS FOR REGENERATION SYSTEM OF ENDOSPERM OF Actindia chinese CV. ＇ JINTAO＇

以猕猴桃（Actindiachinensis）金桃品种的胚乳为外植体，探讨了培养基、生长调节剂和蔗糖浓度以及暗培养等条件对胚乳培养器官形成的影响。结果表明：2，4-D对猕猴桃胚乳愈伤组织的诱导效果显著；在20g／L的蔗糖浓度条件下，胚乳愈伤组织的器官分化效果最好；暗培养可以促进胚乳愈伤组织的生长和器官形成，其中暗培养7d效果最好。     

水牛输卵管上皮细胞无血清培养的研究

以广西沼泽型水牛（Bubalus bubalis）输卵管为材料，比较研究不同取材方法、有无血清及生长因子对水牛输卵管上皮细胞培养的影响。试验采用了三种不同的取材方法。原代用含血清的培养液来培养，传代用添加生长因子的无血清复杂培养液和不添加生长因子的无血清基础培养液结合梯度减量无血清培养法和直接无血清培养法来培养并进行观察。结果表明，水牛输卵管上皮细胞可以在添加生长因子的无血清复杂培养液中生长、并且最长可维持56d优于基础无血清培养的15d；刮取法获得的细胞活率为95％优于消化法的70％和剪碎法的83％；细胞冷冻复苏率为83．6％；第5代的染色体数目为48条，这说明细胞依然保持正常的生物学特性和二倍体核型。     

水流近壁面水力剪切力对滴灌系统碳酸钙污垢的影响

针对目前水动力学条件对滴灌系统碳酸钙污垢形成的影响及适宜的污垢控制阈值尚不明确的问题,该研究对不同近壁面水力剪切力(0～0.70 Pa)下的滴灌系统附着碳酸钙污垢总量、晶相组成及表观形貌进行了分析。结果表明：不同剪切力显著(P<0.05)影响了碳酸钙污垢的形成,随着剪切力的增大碳酸钙污垢的总量呈现先增高后降低的趋势,最大碳酸钙污垢形成量的剪切力为(0.42±0.02)Pa。剪切力较低(0～0.42 Pa)时,随着剪切力的增大碳酸钙晶体的尺寸逐渐变大,Ca²⁺和CO₃^2-的碰撞几率增加且晶体成核效率提高,使得碳酸钙污垢总量呈现增加趋势;剪切力较高(0.42～0.70 Pa)时,随着剪切力的增大碳酸钙晶体大小逐渐减小,且晶体由于高剪切力的作用发生破碎和脱落,使得碳酸钙污垢总量呈现下降趋势。建议灌水器流道近壁面水力剪切力控制在0～0.24 Pa和0.65～0.70 Pa,以减少碳酸钙污垢的形成。该研究结果可为高抗堵塞灌水器的研发以及劣质水滴灌技术的应用和推广提供支撑。     

基于HIS颜色模型的珍珠颜色分选方法

为研究和实现珍珠的自动分选,提出了一种对珍珠的色调及饱和度进行分选的方法.将珍珠图像由RGB颜色模型转换到HIS模型中进行处理,根据,(亮度)分量直方图,通过全局分割提取珍珠光亮区,掩模后得到光亮区H(色调信息)、S(饱和度信息)均值.其中针对色调分选要求,运用了基于RPROP算法的人工神经网络学习方法;针对各色系内色彩的深浅差异,运用了K-均值聚类方法对S均值进行分类.从而实现了先按照珍珠表面色彩进行分类,再将同一色系内的珍珠按照饱和度进行再度分选,最终达到颜色分选要求.     

添加碳酸钙对土壤中镉形态转化与玉米叶片镉组分的影响

采用土壤培养、盆栽试验及连续提取测定等方法研究添加碳酸钙对外源镉在棕壤中的转化与玉米叶片镉组分的影响。与不加碳酸钙处理比较，添加碳酸钙处理土壤交换态镉含量显著下降，专性吸附态镉、铁锰氧化物结合态镉和残余态镉含量显著增加；添加碳酸钙处理可显著增加土壤ｐＨ、土壤饱和浸提液［Ｃａ２十］及［Ｃａ２十］／［Ｃｄ２十］，并显著降低饱和浸提液［Ｃｄ２＋］碳酸钙处理玉米根、茎、叶干重和全钙量显著增加，全镉含量及叶片Ｈ２Ｏ提取镉、２ｍｏｌ　Ｌ－１　ＮａＮＯ３提取镉、１０％ＨＯＡｃ提取镉、２ｍｏｌ　Ｌ－１　ＨＣＩ提取镉和残余镉含量均明显减少。上述结果显示，添加碳酸钙可降低土壤─植物体系的镉毒害。     

尼罗罗非鱼肾近曲小管嗜酸性颗粒的电镜组化研究

用电镜和酶组织化学技术探明了尼罗罗非鱼（Ｔｉｌａｐｉａｎｉｌｏｔｉｃａ）肾近曲小管细胞嗜酸性颗粒的结构实质、来源和存在意义。结果表明：光镜下鱼肾近曲小管细胞的嗜酸性颗粒是各种溶酶体，其中一些较大的颗粒，电镜下是体积较大的单界膜小体，属次级溶酶体，可能与蛋白质等大分子物质的重吸收有关     

小鼠颅骨成骨细胞的分离培养及生物学鉴定

对小鼠成骨细胞的体外分离培养方法进行了摸索,并对其生物学特性进行了鉴定。手术法分离新生小鼠颅骨骨片,用0．25％胰蛋白酶＋0．02％乙二胺四乙酸（EDTA）预消化20～30min,而后用0．08％胶原酶＋0．05％胰蛋白酶＋0．004％EDTA的复合酶多次消化（每次10min）收集细胞,然后接种于细胞培养瓶中进行培养,并通过苏木精-伊红（HE）染色、BCIP／NBT Kit碱性磷酸酶（ALP）染色、Von Kossa法钙结节染色和四甲基偶氮唑盐（MTT）微量酶反应比色法对培养细胞进行生物学鉴定。结果发现,分离得到的细胞92％为存活细胞,差速贴壁培养后可筛选得到高纯度的成骨细胞,原代培养8d后可形成单层细胞,传代培养6～7d后可形成单层细胞。这些细胞有ALP活性,并具有体外钙化能力。结果表明,本研究建立的小鼠成骨细胞分离培养与鉴定方法是可行的。     

一种改进的小鼠无透明带胚胎培养方法

摘要：为了探索一种高效的无透明带胚胎培养方法,为手工核移植提供技术支持,本研究以小鼠胚胎为材料,对比了现有的3 种无透明带胚胎培养方法,对其中效果较好的WOW法进行改进,以海藻酸钙凝胶包埋小凹并且尝试与共培养技术相结合。结果显示,海藻酸钙凝胶包埋小凹法（AEW法）的囊胚发育率（54.7 %）和囊胚细胞平均数（54.3）显著高于微滴单卵培养法（MDS法）和琼脂柱包埋培养法（AE法）（p＜0.05）,与WOW法相当（p>0.05）;使用AEW法进行培养时,最佳的海藻酸钠及钙离子浓度分别为0.7 %和 1.5 %;该法与颗粒细胞共培养相结合后,胚胎卵裂率（89.7 %）与囊胚发育率(67.9 %)显著高于对照组（p＜0.05）。实验结果表明,AEW法培养无透明带胚胎的效果优于其他几种方法;AEW法与颗粒细胞共培养相结合可以大大提高无透明带胚胎的胚胎卵裂率及囊胚发育率,便于无透明带重构胚的大批量培养。     

Peroxidase-antiperoxidase labeling of azospirillum brasilense in field-grown pearl millet

Bacterial cells of Azospirillum brasilense (Tarrand) from their natural habitat were labeled with peroxidase-antiperoxidase (PAP), identified, and observed using the transmission electron microscope. Pure cultures of A. brasilense, axenically inoculated pearl millet root samples, and field-grown inoculated pearl millet root samples were embedded in Luffs araldite. Thin sections were treated using the immunological PAP method. Identification was possible because of the heavy outlining of the cells with a dense deposit of osmium.Pleomorphic forms of A. brasilense were observed in axenic pearl millet root cultures. Encapsulated forms were larger than vibrioid forms, and both types reacted with antiserum against the bacterial strain.     

外源低分子量有机酸对碳酸钙预处理的酸性土壤中活性铝钙镁影响的研究

通过在所研究的第四纪红黏土发育的红壤中混入CaCO3,研究在pH缓冲体系中外加低分子量有机酸对土壤中Al、Ca和Mg的影响。结果表明:无论加CaCO3与否,在pH 4.5的条件下外源草酸、柠檬酸、苹果酸的加入均使土壤可溶性Al显著提高,交换性Al显著下降和交换性Ca显著升高;加入CaCO3的情况下,3种有机酸处理的交换性Mg均显著提高。3种有机酸促进Al溶解能力的大小顺序为:柠檬酸>草酸>苹果酸,这一结果与有机酸和Al形成络合物的稳定常数大小一致。另一方面,3种有机酸处理下,CaCO3预处理均引起可溶性Al的显著升高和交换性Al的下降。双因素方差分析表明,有机酸通过络合作用或沉淀作用对可溶性和交换性Al、Ca和Mg均具有绝对的影响优势,CaCO3仅对可溶性和交换性Al、交换性Ca有显著影响,由于实验中pH缓冲体系的控制,这种影响主要通过Al与Ca、Mg的竞争交换作用实现。总体来说,外源低分子量有机酸的加入使土壤活性Al显著升高,活性Ca、Mg略有升高,有机酸在酸性土壤中的作用需从有机酸溶解阳离子的角度进一步评价。     

Physical and Molecular Characterization of Millet Starches

This study investigated the physical and molecular starch characteristics of four Canadian‐grown millet species: pearl, foxtail, proso, and finger millet. The millet starch granules ranged from about 2.5 to 24 μm in size and were mainly polygonal with a few spherical ones. Their amylose contents ranged from 28.6 to 33.9%, with finger and pearl millets having much more of long amylose chains than short amylose chains compared with foxtail and proso millets. Starches also differed in the molecular structure of their branched amylose, with finger and pearl millets having longer glucan chains between branch points. The enthalpy of gelatinization of starch granules ranged from 11.8 to 13.2 J/g, and the enthalpy of melting of the retrograded starches ranged from 2.2 to 5.9 J/g. The onset temperature of gelatinization (T_o) of the starches ranged from 62.8 to 70.6°C. Addition of iodine vapor to the granular starches showed significant (P < 0.05) differences in the ratio of the absorbance to scattering coefficient (K/S) values, indicating differences in the rigidity of the glucan chains present in the granules. Starches with short amylose chains exhibited higher K/S values. Iodine vapor addition resulted in altered X‐ray diffractogram peak intensities. The study suggested differences in the structure and granular architecture of the millet starches.     

鸡胚原始生殖细胞体外分化的研究

本文从第19期（孵化68~72h）鸡（Gallus domesticus）生殖嵴分离到原始生殖细胞（PGC），通过PGC-体细胞共培养进行了原代和传代培养，并对PGC做了c-kit免疫组化鉴定。通过改变PGC的体外培养条件，诱导PGC分化成了神经样细胞、上皮样细胞和骨骼肌样细胞，并分别通过神经元特异性烯醇化酶（NSE）和角蛋白（keratin）免疫组化进行了分化细胞的鉴定，均呈阳性。结果表明培养的鸡胚PGC在体外可分化成神经样细胞、上皮样细胞和骨骼肌样细胞。