昆虫病原线虫JLSY 003的鉴定及其生物学特性测定

经28S rDNA和ITS序列分析,从吉林省松原市土样中分离到的昆虫病原线虫JLSY 003为Oscheius myriophila品系。本研究以大蜡螟末龄幼虫为寄主,测定该线虫的生物学特性。结果表明,JLSY 003浓度为80 IJs/larva时具有较高的侵染力,致死中时间LT₅₀为15.409 h,侵染24、48 h时,致死中浓度LC₅₀分别为46.067、25.297 IJs/larva。JLSY 003高温耐受性强且繁殖力高,36 ℃、8 h时线虫死亡率为19.27%,产量为1.873×10⁵ IJs/larva,4.695×10⁵ IJs/g。结果表明该线虫具有较高的致病力、耐热性和繁殖力。     

嗜菌异小杆线虫的分离鉴定及生物学特性分析

为了发掘具有耐高温特性的昆虫病原线虫,本实验室对在山东地区采集的122份土样进行了线虫分离,得到异小杆线虫JNR,扩增其ITS基因和D2-D3基因,并构建系统进化树,分析可得:线虫JNR与嗜菌异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora在同一分支,同源性达到98%以上,为嗜菌异小杆线虫品系。为进一步了解该线虫品系的生物学特性,本试验研究了其侵染力、高温耐受力及水平运动能力。结果表明,线虫JNR有较好的耐热性,38℃条件下处理16 h,存活率最高54%,24 h时为32%;40℃水浴处理2 h,低浓度500 IJs/mL下存活率28%,3 h后全部死亡。对大蜡螟和小菜蛾的生测结果显示,在10、15、20、25、30、35、40、60、120、240 IJs/头剂量下处理24 h,蔬菜害虫小菜蛾先出现死亡,大蜡螟则在48 h后出现死亡;大于20 IJs/头剂量下,处理48 h后线虫对大蜡螟的校正死亡率达到59.5%,高于对小菜蛾的侵染效果。在剂量120 IJs/头以上,72 h后寄主的校正死亡率均能达到100%。异小杆线虫JNR在30℃条件下水平运动能力比在18、25℃时强,48 h时有31%的个体运动到3.6 cm处。以上研究表明,该线虫有较强的侵染力,特别是在温度相对较高时具有较好的耐热力和水平运动能力,对防治蔬菜田小菜蛾具有应用开发潜力。     

海南槟榔园昆虫病原线虫对红脉穗螟的致病力

红脉穗螟Tirathaba rufivena Walker是槟榔上的重要害虫。本研究采用大蜡螟诱捕法,对海南省主要槟榔产区槟榔园中采集到的土样进行昆虫病原线虫的诱捕,并评估了目标线虫对红脉穗螟的致病力。在采集的150份土样中共有12个土样经检测发现含有昆虫病原线虫,检出率为8%。其中,屯昌、定安和万宁三个市县采集的土样中检出的带线虫比率相对较高,分别为12.90%、11.76%和10.00%,而海口和保亭土样中未检出昆虫病原线虫。在室内以大蜡螟为试虫测试线虫的致病力,结果表明诱捕的12个线虫种群均对大蜡螟幼虫具有一定的致病力,但致病力的大小存在较大差异（120 h校正死亡率21.11%～72.22%）。选取致病力较高的Tc05、Wn01和Wn09样本测试对红脉穗螟3龄幼虫的致病作用,结果显示在600 IJs/mL线虫液处理后24 h,Wn01种群对寄主的校正死亡率达到86.67%,半致死浓度LC₅₀为283.70 IJs/mL;Tc05和Wn09对红脉穗螟的致病力相近,校正死亡率分别为61.67%和65.00%,LC₅₀分别为504.75 IJs/mL和502.70 IJs/mL。研究表明,Wn01,Tc05和Wn09线虫种群对红脉穗螟幼虫具有一定的控制潜力。     

有效防治蛴螬的昆虫病原线虫鉴定及其生物学特性

为筛选出对华北地区蛴螬具有较强致病力的昆虫病原线虫，从河北省采集的30份土样中分离线虫，通过形态学和分子生物学方法进行鉴定，分析其生物学特性，并测定线虫对该地区3种蛴螬的致病力。结果表明，经鉴定所分离的昆虫病原线虫为樱桃异小杆线虫Heterorhabditis beicherriana的1个品系，将其命名为LF品系；该线虫具有较强的耐高温能力，38℃水浴12 h后存活率达28.4%；具有较好的耐干燥能力，相对湿度50.5%处理9 h后存活率可达80.0%，在此条件下仍然具有较强的侵染能力，可使大蜡螟Galleria mellonella在72 h内全部死亡；具有较强的水平运动能力，30℃处理24 h后有42.2%的个体迁移到3.6 cm外培养皿圆孔处。该线虫对蛴螬具有较强的致病力，室内试验中，在200 IJs/头剂量下对华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita、暗黑鳃金龟Holotrichia parallela和铜绿丽金龟Anomala corpulenta幼虫处理7 d后，3种幼虫1龄末期幼虫死亡率均可达70.0%以上；室外盆栽试验中，5 000 IJs/盆剂量下处理7 d后，3种幼虫2龄中期幼虫死亡率均达到了80.0%以上。表明樱桃异小杆线虫LF品系对华北地区蛴螬类地下害虫生防潜能巨大。     

哈尔滨两种斯氏线虫及其共生菌的分离鉴定和低温侵染力分析

从哈尔滨当地土壤中分离出2个斯氏线虫品系。并通过分子生物学技术对这2种斯氏线虫的内转录间隔区(ITS)进行PCR扩增和序列分析,明确这2种哈尔滨斯氏线虫分别是海滨斯氏线虫Steinernema litorale和拟双角斯氏线虫Steinernema ceratophorum,其扩增的DNA片段长度分别为913和1000 bp。关于海滨斯氏线虫的共生菌研究目前尚未见报道,进而对其共生菌进行了分离鉴定,通过扩增核糖体16S rDNA片段,确定海滨斯氏线虫携带的共生菌为伯氏杆菌Xenorhabdus bovienii,其扩增片段大小为1388 bp;拟双角斯氏线虫携带的共生菌为Xenorhabdus budapestensis,其扩增片段大小为1517 bp。为了验证海滨斯氏线虫及拟双角斯氏线虫在高寒地区的活力,在低温条件下对大蜡螟的侵染力进行了测定。结果表明,5℃条件下侵染144 h,4种线虫处理的大蜡螟幼虫均未死亡;10℃条件下,海滨斯氏线虫表现出明显较高的侵染力,在处理96 h大蜡螟幼虫的校正死亡率为85.83%,其他3个处理校正死亡率都为0;15℃条件下,拟双角斯氏线虫表现出明显较高的侵染力,在处理72 h大蜡螟的校正死亡率为89.17%,海滨斯氏线虫在处理72 h大蜡螟未出现死亡,处理96 h开始出现死亡,且校正死亡率为87.5%,而拟双角斯氏线虫在处理96 h后校正死亡率为96.67%,拟双角斯氏线虫表现出较高的侵染力显著高于其他2种处理,但与海滨斯氏线虫相比,二者无显著差异。     

小卷蛾斯氏线虫对辣椒烟粉虱的控制作用

本文研究了小卷蛾斯氏线虫Steinernema carpocapsae对烟粉虱Bemisia tabaci的侵染能力以及对田间辣椒烟粉虱的控制作用。结果表明，室温（28±2）℃，空气湿度（60±5）%，辣椒叶背面湿润的条件下，线虫约在4 h侵入烟粉虱若虫体内，2～3 d内致其死亡。不同浓度线虫对烟粉虱若虫的控制效果不同，小卷蛾斯氏线虫All品系22、16和13 IJs/mL对烟粉虱高龄（3龄和4龄）若虫的致死率分别为42.79%，34.74%，29.31%，对低龄（1龄和2龄）若虫的致死率分别为44.58%、41.66%、39.61%。助剂5% d-柠檬烯可溶液剂与线虫联合使用具有促进效果，线虫稀释22 IJs/mL，配合1000倍液5% d-柠檬烯可溶液剂时效果最佳，高龄若虫和低龄若虫的致死率分别达到60.61%和61.55%。田间辣椒叶片表面施水量对烟粉虱的防治效果存在明显的影响，在田间施水1.5、1、0.5 L/m²的条件下，高龄若虫校正死亡率分别为66.49%、66.50%、47.78%，低龄若虫校正防治效果分别为69.30%、58.52%、51.83%。综上，喷施小卷蛾斯氏线虫对烟粉虱有一定的控制效果，配合助剂5% d-柠檬烯可溶液剂有促进作用，保持辣椒叶片表面湿润可以提高对烟粉虱的防治效果。     

古巴斯氏线虫生物学特性的研究

对采自热带地区的古巴斯氏线虫的生物学特性进行了研究,结果表明： 该线虫侵染大蜡螟幼虫的温度范围为１５～３５℃;在２５℃下,线虫在大蜡螟幼虫体内完成一个侵染周期需２００～２１２小时;对大蜡螟幼虫的侵入率为４２．８％ 。在常温（２０～３３℃）下贮存６个月后其存活率为９３．５％ ;侵入率为３１．３％ 。古巴斯氏线虫的耐高温能力和运动能力均优于小卷蛾线虫Ａ２４品系,但耐干燥能力较差。古巴斯氏线虫的耐高温及常温下耐贮存的特性显示了其在防治害虫上的应用潜力     

影响昆虫病原线虫共生菌发酵液杀虫活性相关因子研究

应用生物测定法,研究了甘肃省3种土著昆虫病原线虫的4个优良品系共生菌的杀虫活性,及日光和紫外照射、温度对杀虫活性的影响。结果表明,不同线虫及品系共生菌对大蜡螟的胃毒活性存在显著差异,异小杆线虫共生菌HMP0627对大蜡螟的胃毒活性最高,校正死亡率和体重抑制率分别为22.20%和36.02%,斯氏线虫共生菌SAX0664对大蜡螟也有较高的致死作用。4个线虫品系共生菌对日光和紫外光照射都有较强的适应性,1.999 mmol/(m2·s)日光下照射1 h和18 W紫外灯照射30 min仍具有胃毒毒力。不同共生菌对温度的适应性存在显著差异,随着温度的升高,共生菌的胃毒毒力显著下降。到50 ℃时,异小杆线虫共生菌HMP0627仍有较高的致死率和体重抑制率,斯氏线虫共生菌SKX0657仍有较高的体重抑制率。     

昆虫病原线虫异小杆属新种Heterorhabditis beicherriana共生菌的分离及致病性

昆虫病原线虫共生菌在农业及医药领域已成为一种重要的生物活性资源。本研究通过致死的昆虫血腔和侵染期线虫直接分离线虫Heterorhabditis beicherriana的共生细菌,根据形态学特征、生理生化特性及16S rDNA序列初步鉴定为Photorhabdus luminescens,系统发育分析显示为发光杆菌属新亚种菌株。采用共生菌细菌体稀释液注射接种进行致病性测定,结果显示,每头大蜡螟幼虫接种菌量为600 cfu/mL,72 h时死亡率达到100%;24 h时LC₅₀为213.13 cfu/mL,48 h时LC₅₀为46.87 cfu/mL。这为研究该线虫H.beicherriana的致病机制奠定基础,以期发掘新的具有重要价值的活性资源。     

昆虫病原线虫对腰果云翅斑螟的室内致病力

研究了小卷蛾斯氏线虫Steinernema carpocapsae All品系、Biosys品系,格氏斯氏线虫S.glaseri NC52品系,长尾斯氏线虫S.longicaudum X-7品系,嗜菌异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora H06品系和印度异小杆线虫H.indica LN2品系6个昆虫病原线虫品系在室内对腰果云翅斑螟Nephopteryxsp.幼虫的致病力。结果表明,除了嗜菌异小杆线虫,其他参试线虫对腰果云翅斑螟3龄幼虫均具有较高的致病力,致死率80.0%~95.0%,各处理差异不显著。嗜菌异小杆线虫对腰果云翅斑螟幼虫控制效果最差,显著低于其他参试线虫。选择小卷蛾斯氏线虫All品系进一步研究其对腰果云翅斑螟的致病效果,结果发现,其对腰果云翅斑螟3龄幼虫处理24h后的LC50为22.94IJs/头。处理24h,小卷蛾斯氏线虫All品系对1~3龄幼虫的致死率(72.5%~84.7%)显著高于4~5龄幼虫(15.0%~30.0%);处理120h,对蛹的致死率仅为20.0%。研究表明,小卷蛾斯氏线虫All品系对腰果云翅斑螟低龄幼虫在室内具有一定控制潜力。     

Comparative efficacy of indigenous heterorhabditid nematodes from north western Himalaya and Heterorhabditis indica (Poinar,Karunakar & David) against the larvae of Helicoverpa armigera (Hubner)

The efficacy of three Heterorhabditis spp of entomopathogenic nematodes (EPNs) from north western Himalaya, India was studied against the larvae of pod borer, Helicoverpa armigera (Hubner) (Lepidoptera: Noctuidae), under the laboratory conditions. The larvae were exposed to 10, 20, 30 and 40 infective juveniles (IJs) of each nematode species for different time periods and they were found to be susceptible to all the EPNs tested. However, the susceptibility of larvae to nematode infection varied according to the concentrations of IJs and their exposure periods. The efficacy of these indigenous entomopathogenic nematodes was also compared against commercially available entomopathogenic nematode, H. indica. Appreciably good performance was achieved by H. bacteriophora (HRJ), which showed 73.3% mortality of insect larvae in 96 h exposure time against third instar larvae, while H. indica produced 80.0% mortality. However it was noticed that with the advancement of larval stage its mortality rate reduced and vice versa with the exposure period. All tested EPNs were also found to reproduce within the host and maximum production of IJs was recorded in H. bacteriophora (26.0 ± 3.76 × 10³ IJs/larva) at the concentration of 40 IJs/larva.     

不同品系昆虫病原线虫抗逆性分析

昆虫病原线虫作为一种高效的生物防治因子,具有广泛的应用前景.但昆虫病原线虫的生物活性受自然环境影响较大,筛选抗逆优良品系对于更好地推广和应用昆虫病原线虫具有十分重要的意义.为了评价昆虫病原线虫的抗逆性差异及生防潜力,在室内条件下测试了17个采自不同地区的昆虫病原线虫品系对高温、低温及干燥环境的抗性.结果显示:Stein...     

昆虫病原线虫对甘薯蚁象的致病力测定

昆虫病原线虫是隐蔽性害虫的有效生物防治因子,对8种斯氏线虫和3种异小杆线虫进行筛选证实夜蛾斯氏线虫Steinernema feltiae对甘薯蚁象Cylas formicarius的致病力最强;在此基础上进一步研究了11个不同地理来源的S.feltiae品系对甘薯蚁象末龄幼虫的致病力,获得强致病力的品系S.feltiae JY-17并测定了不同因素对该线虫品系致病力的影响。研究结果表明：在25℃条件下,甘薯蚁象不同发育阶段对S.feltiae JY-17的敏感性依次为末龄幼虫〉低龄幼虫〉蛹〉预蛹期〉成虫;在不同测试温度条件下,sfeltiae JY-17致病力由高到低顺序为25℃〉20℃〉30℃〉15℃〉10℃〉35℃;在25℃条件下,当寄主密度为196．6头·m^-2时,线虫对蚁象末龄幼虫的LD50=5．532条·头^-1,LD90=28．049条·头^-1;当线虫与寄主比例为5：1时,LT50=44．306h。本研究为利用昆虫病原线虫防治甘薯蚁象提供了理论依据。     

Effect of rapid and gradual increase of osmotic stress on survival of entomopathogenic nematodes

The effect of rapid and gradual exposure of entomopathogenic nematodes to osmotic stresses on the induction of a dormant state was determined with the nematodeSteinernema feltiae IS-6 infective juveniles (IJs). Rapid exposure of nematodes to glycerol at concentrations of 24% and 28% (w/w) caused the nematodes to enter a dormant state which was characterized by shrinking and impeded motility of all nematodes within 8 h. However, pre-exposure to gradually increasing glycerol concentrations of 5%, 10% and 18% at 4-h intervals resulted in dormancy after 4 h exposure to 24% glycerol. The total time of exposure to glycerol solution was 16 h in gradual osmotic stress. For nematodes exposed to 24% glycerol solution either rapidly or gradually, recovery occurred after 40 min in distilled water. Infectivity of osmotically stressedS. feltiae IJs was evaluated by two criteria, insect mortality and invasion rate. The assays indicated that infectivity of nematodes desiccated by rapid and gradual osmotic stresses was similar to that of fresh nematodes. Rapid exposure ofS. carpocapsae ‘All’,S. riobravis ‘Texas’,S. glaseri ‘NI’ andHeterorhabditis bacteriophora HP88 IJs to the 24% glycerol solution resulted in dormancy within 8 h. These treatments caused mortality of 48.4% and 11.7% amongS. glaseri Nl andH. bacteriophora HP88 IJs, respectively. Similar effects were observed when these nematode species were exposed to increasing osmotic stress of 5%, 10% and 18% at 6-h intervals. Under these same conditions, mortality ofH. bacteriophora HP88 andS. glaseri Nl IJs was 27.5% and 61.8%, respectively. http://www.phytoparasitica.org posting Sept. 29, 2004.     

昆虫病原线虫与Bt联用对黏虫的防治效果

为明确昆虫病原线虫与Bt联用后对黏虫致病力的协同增效作用, 本研究分别测定了自主分离获得的一种新嗜菌异小杆属线虫Heterorhabditis sp.(LF)和实验室保存的Heterorhabditis bacteriophora(Hb)线虫对黏虫的致病力; 比较了两种Bt菌株(HD1和G03)对黏虫的毒力差异, 开展了G03对黏虫的毒力测定试验; 明确了室内和田间试验条件下两种线虫(LF和Hb)与G03联用对黏虫的交互作用。结果表明, 黏虫的死亡率随两种线虫剂量的增加而增加, 在100 IJs/mL剂量下黏虫死亡率均达到了90%以上; Bt菌株G03对黏虫的毒力显著高于HD1, G03对黏虫的LC50为3.55×10 10 cfu/mL; 室内条件下LF 25 IJs/mL+G03(LC50)联用处理6 d对黏虫的防治具有显著的协同增效作用, 较单独LF线虫和G03处理死亡率分别提高了50.72和50.0百分点, Hb 25 IJs/mL+G03(LC50)联用处理6 d对黏虫的防治也具有显著的协同增效作用, 较单独Hb线虫和G03处理死亡率分别提高了76.67和50.0百分点; 田间小区试验表明线虫与Bt联用对黏虫的防治具有协同的加成或增效作用, 其中LF线虫与G03联用具有显著的增效作用, 较单独LF线虫和Bt处理死亡率分别提高了47.96和46.80百分点。本研究为黏虫的防治提供了新的技术措施, 拓宽了黏虫生防研究的思路。     

芜菁夜蛾线虫与玉米螟接触时间对寄主死亡率及死亡速度的关系

在试验室条件下,研究了芜菁夜蛾线虫北京品系与亚洲玉米螟幼虫接触时间,对玉米螟死亡率和死亡速度的影响。结果表明,线虫与玉米螟接触时间在0.5、1、2小时内,玉米螟死亡率随时间的延长而增加,分别为35.3、50.7和61％。4小时以上各处理玉米螟死亡率均达92％以上,差异不明显。线虫与玉米螟接触0.5、8和12小时,其寄主体内进入的线虫数分别为1.2、7.9和23.8～28.3条/虫。玉米螟幼虫的死亡速度也随进人体内线虫数增多而加快,进入一条线虫的寄主在48～96小时内死亡,2～5条线虫的72小时内死亡,6～30条的48小时死亡,31条以上的24小时内死亡。     

4种杀虫剂对甘草胭珠蚧的防治效果

甘草胭珠蚧Porphyrophora sophorae(Arch.)是人工栽培甘草的主要害虫。采用灌根、土壤处理法研究了35%吡虫啉悬浮剂、70%噻虫嗪水分散粒剂、48%毒死蜱乳油和5%毒死蜱颗粒剂4种杀虫剂对甘草胭珠蚧的防治效果。结果表明,8月中旬施药各药剂的防治效果均低于50%,但可有效降低翌年春季田间的虫口密度;6月中旬采用35%吡虫啉悬浮剂和70%噻虫嗪水分散粒剂灌根的防效可达80%以上。建议生产中可在6月中旬或之前采用灌溉后进行35%吡虫啉悬浮剂1 500倍或70%噻虫嗪水分散粒剂7 500倍液300mL/株灌根的措施防治甘草胭珠蚧。