绿色木霉·烯酰吗啉水分散片防治番茄灰霉病及大鼠急性毒性研究

[目的]为了确切评价绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂对番茄灰霉病的防治效果。[方法]通过对峙培养,菌间交互作用机制观察及拮抗菌培养液对病菌生长影响的测定,探讨绿色木霉菌对番茄灰霉病菌的拮抗作用及其作用机制。[结果]试验表明,绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂300～600倍液,对番茄灰霉病的防效为83%～95%,且对作物安全;其对病原菌的抑制作用是通过代谢产物（酶或有毒物质）的作用表现出来的。以昆明种大鼠为试验动物,观察1次灌胃不同剂量的生物农药绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂大鼠所产生的毒性反应和死亡情况,结果显示LD50〉2150 mg/kg。[结论]生物农药绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂在农业生产中具有广阔的发展前景。     

绿色木霉·烯酰吗啉水分散片防治番茄灰霉病及大鼠急性毒性研究

[目的]为了确切评价绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂对番茄灰霉病的防治效果。[方法]通过对峙培养,菌间交互作用机制观察及拮抗菌培养液对病菌生长影响的测定,探讨绿色木霉菌对番茄灰霉病菌的拮抗作用及其作用机制。[结果]试验表明,绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂300~600倍液,对番茄灰霉病的防效为83%~95%,且对作物安全;其对病原菌的抑制作用是通过代谢产物(酶或有毒物质)的作用表现出来的。以昆明种大鼠为试验动物,观察1次灌胃不同剂量的生物农药绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂大鼠所产生的毒性反应和死亡情况,结果显示LD50>2150 mg/kg。[结论]生物农药绿色木霉.烯酰吗啉水分散片剂在农业生产中具有广阔的发展前景。     

6种杀菌剂对设施番茄灰霉病的防治效果

采用温室试验方法,研究咯菌腈、啶酰菌胺、嘧霉胺、乙霉威.多菌灵、腐霉利和甲基硫菌灵6种杀菌剂对设施番茄灰霉病的防效,以筛选防治番茄灰霉病的理想药剂。结果表明,6种杀菌剂对番茄灰霉病均有一定的防治效果。其中50%啶酰菌胺(用量750g/hm2)、50%咯菌腈(用量750g/hm2)2个处理对番茄灰霉病防治效果显著,对病叶和病果的平均防效分别达79.16%、87.95%和77.20%、85.84%;40%嘧霉胺(用量1 550g/hm2)、60%乙霉威.多菌灵(用量1 800g/hm2)2个处理对番茄灰霉病也有一定的防治效果,对病叶和病果的平均防效分别为63.15%、66.71%和70.48%、62.65%;50%腐霉利(用量1 500g/hm2)、70%甲基硫菌灵(用量2 580g/hm2)对番茄灰霉病的防效相对较差。     

微生物发酵液对保护地番茄灰霉菌的抑制作用效果评价

[目的]明确微生物发酵液对灰霉病菌的防治作用。[方法]通过室内毒力测定和田间药效试验研究了微生物发酵液对灰霉病菌的抑制作用和田间防效。[结果]毒力测定结果表明,微生物发酵液能明显抑制灰霉病菌菌丝的生长,发酵液原液的抑制率最高为66.18%。田间试验结果表明,对番茄间隔7 d、连续施药3次,第3次施药7 d后,微生物发酵液原液对灰霉病的防效最高达60.47%,与35%的腐霉利600倍液的防治效果无显著差异。[结论]微生物发酵液对番茄灰霉病有较好的防治效果,其作为一种生物新型杀菌剂值得进一步研究、开发和利用。     

黄瓜茎基腐病菌拮抗真菌的分离和筛选

[目的]分离和筛选黄瓜茎基腐病菌的拮抗真菌。[方法]从病田土壤采集21个土壤标本,分离得到5种对瓜果腐霉、瓜类腐皮镰孢菌和立枯丝核菌有拮抗作用的拮抗菌,并进行温室盆栽防病试验。[结果]经鉴定,5种拮抗菌分属于长枝木霉、橘绿木霉、康氏木霉、哈慈木霉和绿色木霉,对瓜果腐霉、瓜类腐皮镰孢菌和立枯丝核菌的生长都有强烈的抑制作用。在人工接种条件下,5种拮抗菌对立枯丝核菌引起的茎基腐病的防效在60%以上,对瓜果腐霉引起的茎基腐病的防治效果差些。[结论]该研究筛选出的5种拮抗菌对瓜果腐霉、瓜类腐皮镰孢菌和立枯丝核菌引起的黄瓜茎基腐病均有一定的防效。     

棘孢木霉F_2菌株对三七灰霉病的生物防治作用

为考察生防菌棘孢木霉F_2菌株对三七灰霉病的防治效果,采用平板对峙法测定棘孢木霉F_2菌株对三七灰霉病病菌等6种药用植物病原菌的抑制作用;研究棘孢木霉F_2菌株无菌发酵液对三七灰霉病病菌菌丝生长及孢子萌发的影响;并通过盆栽试验测定棘孢木霉F_2菌株发酵液对三七灰霉病的防治效果。结果表明,棘孢木霉F_2菌株菌丝体可以通过空间竞争对病原菌进行抑制,对供试病原菌的抑制率均 90%,对三七灰霉病病菌的抑制率达100%;棘孢木霉F_2菌株发酵液稀释5倍对菌丝的生长抑制率为92. 6%、对孢子萌发的抑制率为82. 6%、对离体感病叶片的防治效果为74. 0%;病害发生前使用棘孢木霉F_2菌株发酵液进行预防,接种病原菌7、15 d后的相对防效分别为83. 4%、81. 7%;病害发生后使用F_2菌株发酵液进行防治,相对防效为52. 6%。试验结果表明,棘孢木霉F_2菌株及其发酵液对三七灰霉病病菌均有较强的抑制作用,具有开发为生物农药的潜力。     

黄瓜霜霉病生防菌株的筛选及防病促生研究

[目的]筛选黄瓜霜霉病的生防菌株,为黄瓜霜霉病的生物防治和生防菌制剂开发奠定基础。[方法]通过温室试验和大田试验研究生防菌株对黄瓜霜霉病的防效以及对黄瓜的促生作用。[结果]温室试验结果表明,人工接种霜霉病病原菌20 d后,34株细菌中有7株对黄瓜霜霉病的防治效果在50%以上,其中TDGN2的防治效果最好,防效达到64.65%;有7个菌株对黄瓜苗生物量的增加量超过20%。大田试验结果表明,温室条件下防效和促生效果较好的DS22、TDJN4和THGB4 3个菌株中TDJN4对黄瓜霜霉病的防效均超过50%;生防菌株处理的黄瓜叶绿素总含量均显著高于清水对照。[结论]生防菌株TDJN4对黄瓜霜霉病表现出一定的防病促生效果,具有广阔的应用前景。     

绿色木霉HT-01的生物学特性和抑菌特性

从淮安市城南栽培番茄的菜园土中分离出绿色木霉HT-01,研究不同培养条件对该木霉菌丝生长和孢子产生的影响,以及该木霉对番茄灰霉病的抑制效果.结果显示,25℃、pH为5时最有利于菌丝生长和产孢;葡萄糖和蔗糖为菌丝生长和产孢的最佳碳源;光照处理对菌丝生长影响不明显,但明显促进孢子产生;菌株在玉米粉培养基上生长最快,但在纯糠培养基上产孢量最大.木霉HT-01对番茄灰霉病(Botrytis cinerea Pers)的抑制率为0.452±0.020,用木霉HT-01孢子悬浮液喷布番茄叶面和灌根处理接种灰霉病菌的番茄幼苗,使叶片感病率分别降低38.1%和42.1%,植株感病率分别降低15%和20%.     

木霉菌可湿性粉剂药效的提高技术

为提高木霉菌可湿性粉剂防效和药效速度,对影响木霉分生孢子萌发的不同因子进行研究。结果表明,蛋白胨、酵母粉和乳糖、蔗糖等对木霉孢子萌发均有显著的促进作用,温度25~30℃、pH值4~6和饱和湿度环境是孢子萌发的适宜条件。木霉孢子在水中萌发率很低,光照对孢子萌发无显著影响;孢子萌发率和萌发速率是影响木霉可湿性粉剂生防效果和药效速度的主要原因。室内离体防效试验结果也证明,添加0.4%蛋白胨和乳糖,调节pH值至5,3 d时对黄瓜灰霉病防效可达85.6%,而未作处理的药液7 d防效才达84.2%。本研究结果也对该产品的生产和田间应用提出了改进建议。     

哈茨木霉菌株WY-1对番茄的促生防病效果

以哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株WY-1为研究对象,采用盆栽方法,测定不同浓度及施用方式对番茄幼苗的促生作用及常见病害的防控效果。结果表明,哈茨木霉菌剂浸种、灌根处理对番茄植株均有较好的促生作用,相对较为适宜的处理浓度为106CFU/m L;孢子浓度为106CFU/m L的哈茨木霉菌剂对番茄白粉病、灰霉病、叶霉病均有较好的防治效果,喷药后15 d对白粉病的相对防效为82.15%,对灰霉病、叶霉病喷药后接种、接种后喷药的相对防效分别为77.98%、56.82%和82.66%、72.37%。     

绿色木霉改良菌株在蔬菜生产中的应用研究

[目的]明确绿色木霉不同菌株间、绿色木霉与化学农药间的相互作用,探讨绿色木霉的使用方法和使用量。[方法]利用平板试验、盆栽试验、大棚试验对绿色木霉的应用技术进行研究。[结果]将经遗传改良的绿色木霉W512、R6、R31、R65、L2用于蔬菜生产。在20～30℃环境温度,10^7～10^8孢子浓度下,对蔬菜立枯病（灌根）、白粉病等可以取得90%的生防效果;当环境低于20℃,建议以化学防治为主。R65和L2在大棚蔬菜上的生防效果较好。[结论]经过遗传改良的绿色木霉菌株在适当的使用方法下可以取得较好的生防效果。     

3株茶藨生柱锈重寄生木霉菌的形态鉴定及ITS序列分析

[目的]探讨更为客观的木霉菌鉴定手段。[方法]在形态分类的基础上结合分子鉴定手段(rDNA-ITS序列分析),对3株茶藨生柱锈重寄生木霉菌进行分类鉴定。[结果]依据TR1的培养性状和显微特征描述,初步鉴定该菌株为深绿木霉(T.atroviride);TR2、TR3的培养性状和显微特征在一定程度上相似,依据其形态特征,初步鉴定这2个菌株为绿色木霉(T.viridePers.ex Fr.)。从Genbank中深绿木霉和绿色木霉的6个菌株与TR1、TR2T、R3所作的系统发育树可知,TR1应该归为深绿木霉,TR2和TR3属同种真菌,应该归为绿色木霉,这与形态学观察结果一致。[结论]形态特征结合ITS序列分析可作为木霉菌分类鉴定的依据。     

绿色木霉产纤维素酶的条件研究

[目的]优化绿色木霉产纤维素酶的条件,为其实际应用提供依据。[方法]采用液体发酵方法对绿色木霉产纤维素酶的条件进行研究,分别考察发酵时间、氮源、接种量和pH值对纤维素酶活力的影响。[结果]绿色木霉产不同酶组分的分泌高峰并不一致,FPA酶活在发酵2d后达到最高值,Cx酶活在发酵3d后达到最高值。发酵培养基以蛋白胨为唯一氮源时,纤维素酶活力最高。发酵培养的最佳接种量为5%,最适初始pH值为4.5。[结论]不同培养条件对绿色木霉产纤维素酶的活力影响各异。     

高产纤维素酶绿色木霉基因工程菌的构建

[目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CBHⅠ重组质粒与瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅱ（CBHⅡ）PcbhⅡ启动子片段连接,将潮霉素磷酸转移酶（hyg）基因片段插入PcbhⅡ启动子下游,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组表达质粒pCAMBIA1302-CBHⅡ。[结果]构建的重组表达质粒电转化后经SDS-PAGE电泳检测,绿色木霉纤维素酶CBHII基因在原宿主菌中成功过量表达,证实CBHⅡ基因在PcbhⅡ启动子控制下进行高效表达。[结论]为高产纤维素酶系的工业化菌株构建奠定基础。     

绿色木霉固态发酵产纤维素酶条件研究

[目的]为了优化绿色木霉固态发酵产纤维素酶的条件。[方法]采用固态发酵方法对绿色木霉产纤维素酶的条件进行了研究,分别考察培养时间、培养温度、接种量、含水量和麸皮含量对纤维素酶活力的影响。[结果]不同因素对固态发酵条件下纤维素酶活的影响有明显的变化趋势。通过正交试验,得出绿色木霉固态产酶发酵的最优条件是培养温度30℃,培养时间5 d,接种量5%,含水量250%。[结论]该研究为绿色木霉对秸秆的转化应用提供了理论依据。     

内生细菌对黄瓜灰霉病的防治研究

［目的］为黄瓜灰霉病的生物防治提供参考依据。［方法］以黄瓜叶片内生细菌B12、B13为供试菌株,通过孢子萌发试验研究了菌株发酵液及发酵滤液对灰霉菌分生孢子萌发的影响。［结果］菌株B12、B13的发酵原液对孢子萌发的抑制率分别为94.4%和91.3%,对芽管生长的抑制率分别为84.2%和79.7%,稀释10倍后其孢子萌发抑制率分别为87.2%和78.2%。菌株B12、B13的发酵滤液对孢子萌发的抑制率分别为90.0%和84.4%,对芽管生长的抑制率分别为82.6%和76.7%。50℃下,菌株B12、B13的发酵滤液的抑制率分别为84.7%和83.1%,经100℃沸水浴处理后其抑制率分别为78.9%和73.9%,经121℃高温处理后其抑制率分别为35.7%和27.2%。pH值为3时,B12和B13的发酵滤液的抑制率分别为11.3%和9.3%;pH值为12时,其抑制率分别为31.4%和25.4%。［结论］内生细菌B12、B13可用于防治黄瓜灰霉病。     

丟糟复合微生物菌剂的菌种选择及液态培养条件研究

[目的]根据白酒丢糟原料的特点,选取优势菌种构建丢糟多菌发酵复合处理体系,探讨各菌种液态培养最优条件。[方法]基于前期白酒丟糟发酵试验结果,产朊假丝酵母、绿色木霉和黑曲霉为丟糟复合微生物菌剂的优选菌种。经单因素试验和正交试验确定了产朊假丝酵母、绿色木霉和黑曲霉菌的最佳液态培养条件。[结果]以7°Bx麦芽汁为基础培养基,各菌最佳培养条件为：对于产朊假丝酵母,添加1.5%的硫酸铵、接种量为5%、培养时间为16h;对于黑曲霉,添加0.3%的氨水、接种量为15%、培养时间为18h;对于绿色木霉,添加0.5%的氨水、接种量为15%、培养时间为22h。[结论]在该培养条件下各单菌发酵液的活菌数量可达到1010个/ml以上,经喷雾干燥制备的微生物菌剂的活菌数量可达到109个/g以上。     

复合诱变选育高产纤维素酶绿色木霉菌株

[目的]选育高纤维素酶活的绿色木霉菌株。[方法]以一株绿色木霉F1为出发菌株,以每一轮诱变处理筛选到的酶活最高的突变株作为下一轮诱变的出发菌株。经过紫外线、亚硝基胍（NTG）、硫酸二乙酯（DES）诱变处理。计录菌落数,计算致死率并测定CMCase的酶活。[结果]紫外线处理200 s时,孢子的致死率接近100%。U1突变株的相对酶活最高,为出发菌株F1的110.4%。NTG处理50 min时,孢子的致死率接近100%,N4诱变菌株的相对酶活最高,为出发菌株F1的128.9%。DES处理50 min时的诱变致死率接近100%,D8菌株的配对酶活最高,相对酶活为出发菌株F1的140.6%。[结论]得到了一株产酶量高且性状稳定的高产绿色木霉菌株D8,其CMCase相对酶活较出发菌株F1提高了40.6%。     

牛粪堆肥高效降解菌的筛选及复合微生物菌剂的制备

[目的]确定最佳菌种复配比例。[方法]从牦牛粪自然堆肥中筛选菌株。以新鲜牛粪和稻壳粉为堆肥原料,以不加复合菌剂的处理为对照,将不同复合微生物菌剂以3‰的总接种量接入到堆肥中,观察不同处理对堆肥腐熟过程的影响。[结果]牦牛粪自然堆肥中的绿色木霉和米曲霉的生长速率和活性较高。绿色木霉∶米曲霉∶枯草芽孢杆菌∶假单胞菌=2∶2∶1∶1的处理,发酵过程中升温最快、温度最高。温度升高到55℃仅用6 d,高温维持8 d,最高温度为65.5℃。堆肥腐熟后,植物种子发芽指数为92.3%。[结论]复合微生物菌剂的最佳比例为绿色木霉∶米曲霉∶枯草芽孢杆菌∶假单胞菌=2∶2∶1∶1。     

木霉生防菌对大豆幼苗的促生作用及对根腐病的防治效果

[目的]研究木霉菌对大豆幼苗的促生作用及对根腐病的防治效果。[方法]用6株木霉菌剂处理土壤进行盆栽试验,测定大豆植株的形态指标及根腐病的发生情况。[结果]供试木霉菌株均能促进大豆植株生长,其株高、茎粗、根长、干物质积累均比对照增加。木霉菌株制剂均可减轻根腐病的发生,当浓度为5×108个/g时,防效均在70%以上。不同菌株对大豆植株的促生和对根腐病的防治效果不同。[结论]木霉菌能促进大豆的生长和降低根腐病的发生。