肉鸽铜绿假单胞菌分离与鉴定

从南京某肉鸽养殖场死亡病鸽肝脏中分离到1株细菌,经分离培养、形态染色镜检、生化试验、药敏试验、实验动物致病性试验和16S rDNA基因片段PCR检测及基因测序试验,结果表明,该菌可以在普通营养琼脂和SS琼脂平板上生长,革兰染色镜检为革兰阴性菌,生化试验检测结果鉴定值为1 655,符合铜绿假单胞菌生化特性;药敏试验表明,该菌对磷霉素、环丙沙星和阿米卡星高度敏感,接种小鼠能导致其死亡并分离出同一细菌,16S rDNA基因片段测序后与GenBank中登录的铜绿假单胞菌同源性为99%。综合以上结果鉴定该分离菌为铜绿假单胞菌。     

大肠杆菌分离鉴定及其耐药性试验

为了确定采集自内蒙古地区某牧场的病料内的病原菌,对其进行细菌的分离培养。将分离培养出的2株病原菌进行16S rDNA扩增、细菌生化鉴定、致病性试验以及细菌耐药性试验。结果表明,分离菌在伊红美蓝琼脂培养基上可生长出暗红色或黑色并且带有金属光泽的菌落;镜检可见,分离菌为革兰阴性杆菌;分离菌生化鉴定结果与大肠杆菌标准菌株ATCC 25922测定的结果相一致;分离菌的16S rDNA与大肠杆菌标准菌株16S rDNA PCR扩增结果相一致;分离到的2株大肠杆菌均具有致病性,对多种抗生素均有耐药性。结果提示,该次分离得到的病原菌主要为具有多重耐药性的致病性大肠杆菌。     

1株奶牛源松鼠葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为确定奶牛垫料中是否含有病原菌并深入了解垫料中优势生长菌的类型、耐药性及致病性等情况,本试验进行了细菌分离培养、革兰染色镜检、生化试验鉴定、16S rDNA序列分析及同源性比对、药敏试验、小鼠致病性试验。结果显示,分离菌在普通营养琼脂平板上形成圆形、表面光滑的白色菌落,血琼脂平板上形成黏稠、较大的白色菌落。革兰染色镜检结果显示,分离菌为革兰阳性,球型,呈葡萄串状排列,或单个散落。生化试验结果显示,分离菌对木糖、葡萄糖、麦芽糖、果糖、乳糖、硝酸盐还原等呈阳性反应,而蜜二糖、木糖醇、山梨醇、尿素、V-P反应等呈阴性反应。16S rDNA序列分析结果显示,扩增的16S rDNA序列长度为1 298 bp,与松鼠葡萄球菌的核苷酸同源性达99.85%~100%;系统进化树结果显示,分离菌与松鼠葡萄球菌处于同一分支。动物试验结果表明,分离菌株对试验小鼠有较强的致病性,以0.2 mL/只（7.9×10⁸ CFU/mL）菌液的剂量接种小鼠,在48 h内死亡率为60%（3/5）。药敏特性分析结果显示,分离菌株对复方新诺明、氨苄西林等7种药物敏感,对克林霉素、头孢噻肟和头孢呋辛中度敏感,对青霉素、红霉素和林可霉素耐药。本研究为奶牛源松鼠葡萄球菌的分离鉴定及防控提供了参考依据。     

羊源波氏希瓦氏菌的鉴定及其生物学特性

为了探究从川南黑山羊体内分离获得的1株细菌LZS-01的致病性和生物学特性，本试验采用革兰染色、细菌形态观察、生化鉴定、16S rDNA基因序列分析、小鼠致病性试验和药敏试验对其进行研究。结果显示：菌株LZS-01为短杆状革兰阴性菌，16S rDNA基因扩增后得到的DNA片段长度为1 446 bp,与GenBank中波氏希瓦氏菌(Shewanella baltica)的同源性为100%,在系统进化树中与波氏希瓦氏菌(NCTC10737)聚为一支，综上结果推测该菌株为波氏希瓦氏菌；该菌株对小鼠致病性较强，可导致其肺泡壁增厚、肺泡腔狭窄，纤维样物质充满肺泡，肾小管上皮细胞水肿严重、管腔狭窄等；该菌株对环丙沙星、四环素等抗菌药物敏感，对氟苯尼考、青霉素和氧氟沙星等抗菌药物耐药。结果表明，波氏希瓦氏菌对动物具有一定致病性和耐药性。本试验结果为波氏希瓦氏菌感染性疾病的研究和临床防治积累了科学资料。     

3株猪源多动物链球菌的分离与鉴定

对3例不同时间送检的病猪的肝、肾脏、肺脏和皮下水肿液进行细菌分离,纯化后分别对其进行革兰染色、生化试验、16S rDNA基因序列分析进行鉴定,小鼠攻毒试验确定分离菌株毒性,药敏试验分析药物敏感性。结果表明:分离菌株为革兰阳性球菌;可以发酵蔗糖、乳糖、麦芽糖等,不能发酵阿拉伯糖、山梨醇、蜜二糖;16S rDNA鉴定结果为多动物链球菌(Streptococcus pluranimalium)。攻毒试验可致小鼠死亡,表明该菌具有强毒性。药敏结果表明,该分离菌株对诺氟沙星、复方新诺明、妥布霉素、庆大霉素等耐药,对阿莫西林、头孢曲松钠、美洛西林等敏感。     

鸭疫里默菌的分离鉴定与动物回归实验

为了解最近吉林地区某鸭场大量鸭病死的原因,对该鸭场送检的病料进行细菌分离培养并成功分离出一株革兰阴性菌。通过生化试验、16S r RNA鉴定及序列测序分析、玻片凝集试验和动物回归试验等对分离菌进行鉴定,16S r RNA基因测序结果显示,分离菌与鸭疫里默菌同源性达到99%;该菌能够使雏鸭死亡且致病性较强。结果表明,该鸭场鸭群死亡原因是1株血清2型鸭疫里默菌感染。     

竹鼠源棒状杆菌分离鉴定及致病性分析

从病死竹鼠体内分离到1株细菌,通过形态学观察、生化试验鉴定、16S rDNA基因测序分析及系统进化树构建等方法对分离菌种属进行确定,并采用纸片扩散法进行药敏试验,PCR方法检测耐药基因和毒力基因,人工感染小鼠试验确定分离菌的致病力。病原鉴定显示,分离菌为革兰阳性杆菌,16S rDNA基因测序及BLAST比对显示其与棒状杆菌序列相似度达92.1%～99.2%,结合生理生化鉴定结果确定分离菌为棒状杆菌;药敏试验显示,该分离菌对氟苯尼考、头孢氨苄和青霉素等药物敏感,对复方新诺明、四环素和红霉素等药物表现耐药,耐药基因检测结果显示为oqxB、tetX、sul1和ermF阳性,与药敏试验表型一致;该菌对小鼠有致病性,毒力基因检测发现,分离菌携带fyuA和papA。本研究为竹鼠棒状杆菌病预防及合理用药提供依据。     

盐碱水体副溶血弧菌的分离和鉴定

为了明确副溶血弧菌在内陆淡水水体中的分布情况，本试验从查干湖水体中分离得到1株革兰阴性杆菌，命名为A201805S2,对其进行形态观察、生理生化鉴定，并利用PCR方法对其16S rDNA基因序列进行扩增和测序，将测得结果于NCBI上进行BLAST同源性比较。结果显示，该菌株在硫化硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基(TCBS)上为绿色菌落，革兰染色呈红色，两端钝圆，为革兰阴性杆菌；生理生化鉴定结果与副溶血弧菌特性相一致；分离菌与副溶血弧菌16S rDNA基因序列同源性达99%。结果表明，本试验首次从内陆苏打盐碱型淡水水体中分离出副溶血弧菌，为淡水水体副溶血弧菌防控提供数据支持。     

杂交鲟维氏气单胞菌的分离鉴定及其耐药性分析

试验旨在对贵州省某养鱼场发病杂交鲟体内分离的优势菌株进行鉴定、致病力探究及耐药性分析。本试验通过革兰染色、生化鉴定、细菌16S rDNA基因分析、动物回归试验、药敏试验、部分毒力基因检测与耐药基因检测。结果显示:分离菌为革兰阴性短杆菌,细菌16S rDNA扩增测序与比对,得大小为1 477 bp的片段,其片段基因序列与GenBank中的维氏气单胞菌序列相似度达99.00%,药敏试验显示:分离菌对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感,对四环素、磺胺异唑、苯唑西林药物出现耐药,耐药基因检测显示:分离菌含有耐磺胺基因(Sul1,sul2)、Ⅰ类整合子(Intl1)3种耐药基因,毒力基因检测显示:分离菌含有气溶素(Aer)和粘附素(Aha)两种毒力基因。综合本试验结果,分离菌为维氏气单胞菌(A.veronii),含有毒力基因,并对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感。本试验对贵州地区鲟发病流行的病因做出准确诊断,为该地区细菌性鱼病预防与合理用药提供依据。     

云南鸡源副禽嗜血杆菌的分离鉴定与耐药性分析

无菌棉签深入病死鸡鼻窦腔深部无菌采集病料进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、生理生化试验、革兰氏染色、血凝活性测定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果在富含V因子血琼脂平板上分离到一株灰白色、圆形、边缘整齐的光滑型小菌落,菌落在血琼脂平板、麦康凯等培养基上无明显菌落生长;镜检观察为革兰氏阴性菌,具有血凝活性,符合副禽嗜血杆菌生化培养特性;细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为副禽嗜血杆菌。分离菌株对妥布霉素、阿奇霉素、庆大霉素、阿米卡星具有敏感性。     

貂源停乳链球菌似马亚种的分离鉴定

为了研究引起水貂肺炎死亡的病因,对送检的病死水貂进行剖检。从病死水貂病料中分离出了一株革兰阳性球菌,对其进行菌落形态观察、生化鉴定以及16S rDNA序列分析,构建系统进化树并进行同源性分析,同时对该菌株进行药敏试验。结果表明：根据分离菌的形态特征、生物化学特性,结合16S rDNA序列测定与进化树分析,将其鉴定为链球菌属的停乳链球菌似马亚种。药敏试验结果显示,该菌株对青霉素、阿莫西林、莫西沙星等药物敏感,但对四环素有较强的耐药性。     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定、耐药性分析及毒力基因检测

为确定屠宰场发病猪死亡原因,本研究对从死亡猪内脏中分离到的细菌,进行革兰染色镜检、生化鉴定和16S rRNA基因测序鉴定,并进行药敏试验、毒力基因检测及小鼠攻毒试验。结果显示,革兰染色镜检为细小或中等短杆状或丝状革兰阴性杆菌;生化试验特性分析及16S rRNA基因测序鉴定为奇异变形杆菌,命名为GZ2-2株。药敏试验结果显示,分离菌对哌拉西林、头孢呋辛、头孢他啶等11种药物敏感,对卡那霉素和米诺环素2种药物为中敏,对氨苄西林、头孢唑林、四环素等6种药物耐药;毒力基因检测结果显示,该分离菌携带rsbA、atfA、pmfA、mrpA、zapA、ureC、atfC和ucaA 8种毒力基因;小鼠攻毒试验表明,该分离菌有较强致病力。本试验成功分离到一株具有多重耐药性并携带8种毒力基因的奇异变形杆菌,为该菌感染的防治及其分子流行病学研究奠定了基础。     

一株新饲用乳杆菌的分离鉴定及益生性研究

从猪粪便中分离得到一株新饲用乳杆菌,对其16S rDNA基因进行了测序,该段基因序列已提交GenBank,登录号为HQ641209。将该菌株16S rDNA基因序列进行在线BLAST比对并与其他乳杆菌属菌株的16S rDNA序列建立系统发育树,结果显示该菌16S rDNA序列与NCBI公布的约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii (AB295648)的同源性为99.7%,因此该菌鉴定为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii),将其命名为"Lactobacillus johnsonii Sun001"。经测试,该菌株对E.coli K88、K99菌株的生长有抑制作用,在pH为2.5的模拟胃液中处理3 h存活率为68.8%,在0.3%胆盐浓度的模拟肠液中处理3 h存活率为21.4%。     

狐狸流产奇异变形杆菌的分离鉴定及特征分析

为明确引起狐狸流产的主要原因,确定主要病原体并提出有效防控措施,试验收集了河北地区多个流产狐狸的脾脏和卵巢,利用细菌分离培养、形态观察、药敏试验、16S rRNA基因测序和序列分析及同源性比对等方法对引起狐狸流产的病原体进行分离鉴定,分析其耐药性,筛选有效治疗药物;同时对病原菌的致病力进行检测。结果显示,从流产狐狸病变的脾脏和卵巢中分离到了1株单一的革兰氏阴性菌,命名为FOX-abortion-Hebei。药敏试验结果显示,该菌对头孢哌酮等11类药物敏感,而对妥布霉素等5类抗菌药物中度敏感。动物试验结果显示,该菌株具有较强的致病性,攻毒小鼠和狐狸后均可引起动物死亡。16S rRNA测序和同源性分析结果显示,分离到的革兰氏阴性菌为奇异变形杆菌（Proteus mirabilis,PM）,与已公布序列的同源性为93.6%~99.9%;系统进化树结果显示,该菌与埃及分离到的菌株（AUMC B-199）亲缘关系最近。本研究明确了狐狸流产主要是由奇异变形杆菌感染所致,也是首次在流产狐狸中分离到该菌,且能引起严重的繁殖障碍,需在狐狸养殖中加以防控。     

1株鹅源类志贺邻单胞菌的分离鉴定及致病性研究

【目的】 查明江苏某鹅场鹅发病及死亡原因。【方法】 剖检病死鹅，运用细菌分离纯化、染色观察、生化试验、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）鉴定、16S rDNA测定方法进行病原菌分离鉴定，通过药敏试验和小鼠致病性试验探究分离菌株的特性。【结果】 从患病鹅肝脏分离到1株革兰氏阴性短杆状细菌；生化试验结果显示，此菌株可发酵葡萄糖、麦芽糖、枸橼酸盐、尿素；MALDI-TOF MS鉴定结果显示，此菌株为类志贺邻单胞菌；16S rDNA序列对比分析发现，分离菌与类志贺邻单胞菌相似性最高，达98%以上；药敏试验结果显示，分离菌对左氧氟沙星、美罗培南、头孢西丁、庆大霉素等10种抗菌药敏感，对四环素、头孢吡肟、头孢他啶、头孢唑林表现为中介，对阿奇霉素、复方新诺明、氨苄西林等6种药物表现为耐药，是典型的多重耐药菌；小鼠致病性试验结果显示，分离菌对小鼠的半数致死量为5.0×10^6.5 CFU。【结论】 本试验首次报道了从鹅体内分离到致病性类志贺邻单胞菌，通过药敏试验筛选了左氧氟沙星、美罗培南、头孢西丁等有效的临床常用抗菌药，分离株对小鼠致病性较强，提示其带来的潜在风险不可忽视。     

羊源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及毒力基因检测

为了调查内蒙古通辽市某羊场发病羊死亡的原因,对疑似致病菌进行分离、鉴定及部分生物学特性研究。对病死羊进行剖检,无菌条件下采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏等组织脏器进行细菌分离培养;对分离菌进行小鼠致病性试验、细菌生化检测、16S rDNA基因扩增及同源性比对分析和药物纸片扩散法敏感性试验。结果显示,分离菌株符合肺炎克雷伯菌生化特性;16S rDNA序列与GenBank中已登录的肺炎克雷伯杆菌序列同源性为99.59%;小鼠致病性试验结果表明分离株有较强的致死性;分离株携带多种毒力基因致病性较强。药敏试验结果表明分离株对诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、多西环素等药物高度敏感,对复方新诺明、卡那霉素等中度敏感,对庆大霉素、头孢哌酮、头孢氨苄等耐药。结果表明,分离株为肺炎克雷伯菌,是该羊场发病羊死亡的致病菌。     

一株草鱼维氏气单胞菌的分离鉴定及毒力基因分析

为了鉴定贵州芩巩县某养殖场草鱼发病死亡的病原,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化鉴定、药敏试验、动物回归试验、16S rDNA与gyr B基因测序及系统分析进行鉴定。结果显示,本研究从发病草鱼体内分离到1株致病菌GZQG2019,分离菌在培养基中呈圆形、表面湿润光滑、边缘整齐半透明的灰白色菌落,菌落周围呈现β-溶血环;革兰氏镜检显示,分离菌呈两端钝圆短小阴性杆菌;16S rDNA、gyr B基因序列分析显示,分离菌与维氏气单胞菌聚为一支,同源性均在99%以上;药敏试验结果显示,在使用的20种抗菌药物中,该菌对四环素、丁胺卡那、多黏菌素B和头孢曲松等10种药物敏感,对苯唑西林、青霉素、阿莫西林和庆大霉素等8种药物中度敏感,对头孢氨苄、复方新诺明2种药物耐药;动物回归试验显示,该菌对健康草鱼具有强致病性;10种毒力基因扩增结果显示,分离菌携带气溶素、热不稳定性肠毒素、溶血素、核酶、丝氨酸蛋白酶、弹性蛋白酶和酯酶7种毒力基因。本试验成功分离到1株草鱼源维氏气单胞菌,具有较强毒力,且携带多种毒力因子;对四环素、丁胺卡那等药物敏感,对四环素、丁胺卡那等耐药,为维氏气单胞菌病临床用药提供参考依据。     

貂源肺炎克雷伯菌的分离与鉴定

本研究从疑似感染肺炎克雷伯菌(Kpn)的病死水貂病料中分离得到5株革兰氏阴性杆菌,通过对其进行细菌形态学、培养特征、生化特性和分子生物学鉴定,确认分离得到的菌株为Kpn。16S rRNA基因序列分析结果显示:该分离菌株与已知的Kpn相应序列的同源性为100%;药敏试验显示分离株对头孢曲松和舒巴坦高度敏感。动物致病性试验显示该分离株对小鼠具有较强的致病性。     

致鹅败血症粪肠球菌的分离鉴定

为确定导致通辽某鹅场雏鹅败血症的病原,本研究将从病鹅心、肝、淋巴结和脑组织液中分离的革兰氏阳性球菌纯化培养,进行形态学和生长耐受性观察,菌属区别、分群和菌种鉴定试验,16S rDNA检测、系统进化分析和致病性试验。结果表明,分离菌株(HQ831431)为中等致病力粪肠球菌,具有β型溶血特性,可致小鼠急性败血症。分离菌株与参考菌株ATCC29212及国内外分离的其他15株粪肠球菌16S rDNA的同源性均在99.0%以上,位于系统发育树的同一分支。