氟烷基因型PCR—RFLP诊断技术在种猪性能测定中应用

在国内首先将氟烷基因型ＰＣＲ－ＲＦＬＰ诊断技术用于种猪性能测定中心的种猪测定。通过从猪毛、猪血中提取的ＤＮＡ，用特异性的引物进行ＰＣＲ扩增均能得到６５９ｂｐ的ＤＮＡ片断，并用ＨｈａⅠ内切酶消化ＰＣＲ产物，酶切结果能准确检测猪应激综合症，即ＲＹＲ１基因（氟烷基因）的突变。在测定的长白、约克、杜洛克猪中，发现长白猪Ｈａ１＾ｎ基因基因频率较其它品种高，为９．０％，杜洛克为４．２％，在大约克中未发现。     

6个猪种胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因座位遗传多态性检测

本文采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析方法对我国地方猪种民猪、香猪、桃源猪、内江猪、姜曲海猪以及用作对照的国外猪种杜洛克猪的ＩＧＦ－１基因座位进行研究。结果发现：ＩＧＦ－１基因ＰＣＲ扩增片段存在２个限制性内切酶ＨｈａＩ酶切位点，其中１个酶切位点产生遗传多态。此片段上共产生２个等位基因。在ＩＧＦ－１基因位点上，香猪除与桃源猪基因频率差异不显著之外，与其它猪种之间基因频率差异极显著（Ｐ＜０．０１），而其它各猪种之间差异均不显著     

6个猪种胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因座位遗传多态性检测

本文采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析方法对我国地方猪种民猪、香猪、桃源猪、内江猪、姜曲海猪以及用作对照的国外猪种杜洛克猪的ＩＧＦ－１基因座位进行研究。结果发现：ＩＧＦ－１基因ＰＣＲ扩增片段存在２个限制性内切酶ＨｈａＩ酶切位点,其中１个酶切位点产生遗传多态。此片段上共产生２个等位基因。在ＩＧＦ－１基因位点上,香猪除与桃源猪基因频率差异不显著之外,与其它猪种之间基因频率差异极显著（Ｐ＜０．０１）,而其它各猪种之间差异均不显著     

猪FSHβ亚基基因RFLPs研究初报

本文用猪ＦＳＨβ基因ｃＤＮＡ作为探针,对二花脸猪、梅山猪、长白猪、大约克猪、香猪基因组ＤＮＡ进行ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨｉ和ＨｉｎｄⅢ三种性内切酶的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析,发现猪品种之间在该位点变异较大,而且发现ＦＳＨβ／ＲａｍＨＩＲＦＬＰｓ中,太湖猪表现出品种内一致性。本研究为进一步分析ＦＳＨ是否对太湖猪高的排卵率有影响了一定基础。     

猪RYR_1基因的PCR-RFLP分析和氟烷基因利用的研究

采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析技术，以血液或猪毛提取ＤＮＡ为模板，建立了快速和简便的从分子水平上鉴别ＲＹＲ１基因型的方法，其准确率为１００％。不同品种（系）初步配套杂交结果显示：皮特兰×抗应激猪的胴体品质优于杜洛克×抗应激猪（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），而肉质优于皮特兰×应激群猪（Ｐ＜０．０１），并提出了氟烷基因的利用策略     

二花脸与大约克猪21-羟化酶基因位点限制性片段长度多态性比较

本研究采用ＲＦＬＰｓ分析方法对１２头无亲缘关系的二花脸和１２头无亲缘关系的大约克猪的２１－羟化酶基因位点限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）类型进行比较研究,结果５种限制性内切酶（ＢａｎⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＴａｑⅠ）在２品种中形成了Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ９种ＲＦＬＰｓ类型。其中大约克出现Ａ～Ｈ８种类型,而二花脸只有Ⅰ类型,表明大约克和二花脸在此基因位点存在显著差异。     

中国肾型IBV毒株的基因型及其S1基因的巢式PCR

用本研究建立的ＩＢＶＳ１基因的巢式ＰＣＲ方法鉴定了国内５个肾型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分离株。以此５个分离株及３个标准毒株的ＲＴ－ＰＣＲ产物（１７４９ｂｐ，含Ｓ１基因）为模板，１对内部引物经巢式ＰＣＲ都获得１７２９ｂｐ的产物，另１对内部引物的巢式ＰＣＲ有大小不同的产物（１６７８ｂｐ或０．５、０．６ｋｂ）。参照以前的ＲＦＬＰ分析结果，探讨了中国肾型ＩＢＶ毒株的基因型状况。     

北方常见猪品种介绍

猪品种按地理区域进行分类：华北类型有民猪、黄淮海黑猪、里岔黑猪、八眉猪等;华南类型有滇南小耳猪、蓝塘猪、陆川猪等;华中类型有宁乡猪、金华猪、监利猪、大花白猪等;江海类型有著名的太湖猪（梅山、二花脸等的统称）;西南类型有内江猪、荣昌猪等;高原类型有藏猪（阿坝、迪庆、合作藏猪）。北方常见引进品种有长白猪、大约克夏猪和杜洛克猪,常见本地品种有三江白猪、东北民猪和辽宁黑猪。1长白猪长白猪原产于丹麦,世界各地均有分布。     

青海本地黄牛的遗传变异性及基因分化

通过对柴达木黄牛和青海东部黄牛ＨＢ,ＫＥ,ＴＦ,ＰＴＦ,ＰＡ,ＡＭＹ１,ＡＬＰＡ,ＡＬＰＢ,ＲＢＣ－ＬＤＨ１,Ｓ－ＬＤＨ１,α－ＬＡ,β－ＬＧ,αｓ１－ＣＮ和β－ＣＮ１４个生化遗传基因座多态性的分的,研究青海本地黄牛的遗传变异性及两个群体间的基因分化。结果发现：（１）青海本地黄牛１４个生化遗传基因座的Ｐｐｏｌｙ为８５．７％,Ｈ为０．２６６２,Ｎｅ为１．４８６１个,Ｈ．Ｉ．为０．５７９８;（２）柴达木黄牛与青海东部黄牛两群体之间的遗传距离为０．００５８,基因分化系数为０．００７１,表明青海本地黄牛两群体间的基因分化程度极小。     

德阳市种畜场长白猪选育群的氟烷基因分析

本文采用ＰＣＲ－ ＲＦＬＰ技术检测了德阳市种畜场长白猪选育群第三世代的氟烷基因型,摸清了Ｈａｌｎ 基因在该群体中的分布,Ｈａｌｎ 基因频率为 １３．８２％ 。检测结果为该场建立长白猪应激抵抗群提供了科学依据     

昆虫抗真菌肽Thanatin-CAD双价基因的合成、克隆及其表达

为促进昆虫抗菌肽基因在转基因抗病育种和生物工程制药的应用,通过设计嵌合引物结合分段PCR的方法将抗真菌肽Thanatin基因与Cecropin AD基因(CAD基因)融合拼接为Thanatin-CAD双价基因,采用T-A克隆法将其克隆至pGEM-T Easy载体,进行测序,结果证实与预期设计的完全一致;然后再将其亚克隆至表达载体pET-21d中,用IPTG诱导含重组表达质粒的菌株,对表达产物进行生物活性测定,初步结果显示Thanatin-CAD双价基因的融合表达产物对受试细菌无抑菌活性,但对部分病原真菌有较强的抑菌作用。     

基于连接酶检测反应的并行分型系统检测鸡肉风味相关候选基因多态性

旨在建立一个基于聚合酶链反应—连接酶检测反应(LDR)的基因多态性并行检测系统,检测鸡肉风味相关候选基因脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因、细胞外脂肪酸结合蛋白(Ex-FABP)基因和腺苷琥珀酸裂解酶(ADSL)基因的多态性,并分析其在优良地方鸡种——清远麻鸡和快大型隐性白羽鸡中的分布差异。采集165只隐性白羽鸡和185只清远麻鸡母鸡的血液并提取DNA,应用PCR-LDR方法检测A-FABP51C/T、Ex-FABP1011T/C和ADSL3484C/T的基因型。结果,所得分型结果同直接测序分型结果一致。3个多态位点在2个品种鸡中均表现为中度多态,并且在不同品种中的分布均存在差异,在A-FABP51C/T位点上达到显著水平。结果表明,建立的基于连接酶检测反应的基因多态性并行检测系统是一种准确、灵敏的SNP检测方案,为鸡肉风味性状相关基因的多态性研究提供了基础。     

军牧1号白猪、杜洛克猪、西藏小型猪和大白猪ESR、FSHβ、EGF基因的多态性分布

摘要：ESR、FSHβ和EGF基因与猪繁殖性状密切相关。为检测军牧1号白猪、西藏小型猪、杜洛克猪和失白猪ESR、FSHβ和EGF基因的多态性分布情况,采用PCR和PCRRFLP的方法对61头军牧1号白猪,51头杜洛克猪,51头西藏小型猪和69头大白猪的ESR、FSHβ和EGF基因多态性进行了检测。结果显示,对于各个基因的优势等位基因,在军牧1号白猪群体中,ESR基因位点A等位基因频率为0．6393,FsHp基因的13等位基因频率高达0．9098,EGF基因的A等位基因频率仅有0．0164杜洛克猪群体中,ESR基因A等位基因频率为0．6078,FSHβ基因的B等位基因频率为0．8235,而EGF基因的八等位基因频率仅为0．0297;西藏小型猪群体中,ESR基因A等位基因频率是0．4608,FSHβ基因B等位基因频率仅为0．0687,H;F基因A等位基因频率为o．1961;大白猪群体中。ESR基因位点有频率为0．5000的有害A等位基因,而FSHβ基因和EGF基因的13等位基因频率则分别为0．8013和0．7391。所有基因型分布均符合哈代温伯格平衡（P〉0．05）。     

鸡传染性支气管炎X毒株S1基因的克隆与真核表达

根据GenBank中报道的鸡传染性支气管炎病毒（IBV）S1基因序列，设计了1对引物，克隆了IBV强毒株X的S1基因，基因大小为1．62kb。将其导入真核表达载体系统pIRES1neo中，表达蛋白为61000。     

鸡传染性支气管炎M41毒株S1基因的克隆与真核表达研究

根据Genbank中公布的IBVS1基因序列 ,设计了一对引物 ,克隆出IBV强毒株M41的S1基因 ,基因大小为 1 .62kb ,导入真核表达载体系统pIRS1neo中 ,表达蛋白分子量为 61ku ,并具有中和活性。为今后开发鸡传染性支气管炎基因工程疫苗奠定了基础。     

鹤源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析

采用K-B法检测40株鹤源大肠杆菌对17种抗菌药物的耐药性。根据耐药表型和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型流行情况,指导临床合理用药。结果表明:15株大肠杆菌为产ESBLs株。扩增出了与预期片段大小相符的TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型基因。产酶大肠杆菌耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重。     

禽类干扰素及其基因工程研究进展

干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞所产生的一类高活性多功能的糖蛋白。干扰素自被发现以来,由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视,在其基因结构、作用机理以及体外重组表达等方面都取得了巨大突破。作者综述了干扰素的基因结构、基因工程及重组干扰素的应用研究进展。     

犬瘟热病毒小熊猫株H、F和N基因的克隆及表达

根据GenBank中发表的犬瘟热病毒（CDV）的核苷酸序列，设计并合成了扩增CDVH、F和N基因的3对引物，经RT—PCR分别扩增获得了CDV小熊猫株（LP株）H、F和N基因，并对H、F及N基因进行了克隆和序列测定。序列分析表明，CDV LP株属于强毒谱系，与CDV流行株的亲缘关系近．H基因含有较多潜在的糖基化位点．F和N基因相对比较保守。将CDV LP株H、F和N基因克隆入真核表达栽体pVAX1的CMV启动子下游，构建了CDV基因疫苗表达载体pVAXLPH、pVAXLPF、pVAXLPN，体外转染BHK-21细胞．用间接ELISA方法检测到目的蛋白的表达。用构建的3个表达质粒免疫小鼠，从小鼠血清中检测到了抗CDV抗体．初步证实用CDVH、F和N基因作为核酸疫苗免疫动物，可以激活机体的免疫应答。     

4株鸡肾型IBV陕西分离株3种主要结构蛋白基因的遗传变异分析

采用RT—PCR方法对近年来本实验室分离的4株肾型IBV陕西分离株的纤突蛋白S1基因、膜蛋白基因（M）和核蛋白基因（N）分别进行扩增,测序后进行遗传变异分析。结果显示：与肾型疫苗株w93相比,各分离株S1基因均存在广泛的点突变,并且都存在基因插入现象,分离株之间氨基酸同源性为75．8％～99．4％;M基因除了存在点突变外,W09和WNl2在其5’端还存在9个核苷酸的缺失,分离株之间氨基酸同源性为91．0％～99．6％;N基N无插入和缺失,但存在基因点突变,分离株之间氨基酸同源性为99．3％～99．5％。4株IBV分离株在S1、M和N基因氨基酸系统进化树上分属于不同的进化群,且都与较早的肾型IBV陕西分离株w118遗传距离较远。结果表明,4株鸡肾型IBV流行毒株的s1、M和N基因均存在不同程度变异,这可能是免疫鸡群肾型鸡传染性支气管炎长期流行的主要原因．     

不同猪种肉质相关基因Hal、RN和FTO的多态性研究

为了明确肉质相关基因氟烷基因(Hal)、酸肉基因(RN)和脂肪肥胖相关基因(FTO)在国内外不同猪种群体间的遗传变异特性,本研究以大约克、长白、杜洛克和金华猪等猪种群体为研究对象,应用PCR-RFLP技术分别检测了Hal、RN和FTO基因的多态性,并分析了FTO基因上2个多态位点g.276G＞T和c.594C＞G的遗传变异情况.结果表明:(1)在杜洛克猪中发现了Hal的基因型HalN Haln,其频率为0.166,但未发现基因型Haln Haln,其它猪种群体中仅检测到了基因型HalN HalN;(2)在已检测的所有猪种群体中只检测到RN基因的rn/rn基因型,未发现rn/RN和RN/RN基因型;(3)在FTO的g.276G＞T位点上,金华猪呈现单态,其它猪种群体均呈现多态.在FTO的c.594C＞G位点上,4个猪种群体均呈现多态,3个外来猪种群体均以CC基因型频率较高,而金华猪则以GG基因型频率较高.研究结果提示,由于Hal基因在养猪生产中的利弊双重性,因此在某些猪种群体中仍然存在较高频率的HalN Haln基因型.此外,结合FTO基因的生理功能和已有的研究结果,可在特定的猪群中将其作为影响猪肉质性状的候选基因.本研究发现FTO的基因型分布在我国优良地方猪种金华猪与国外3个种猪群间存在较大差异,为深入研究不同品种猪的肉质形成机理提供了基础数据.