转基因动物制备方法

动物转基因技术是通过将外源性目的基因整合到动物染色体上,使其在体内整合和表达,获得表达外源基因动物的技术。该技术广泛应用于转基因动物育种、基因功能研究、药用蛋白生产和器官移植等方面。其主要方法包括逆转录病毒感染法、显微注射法、体细胞核移植法、胚胎干细胞介导法、精子介导法等。本文旨在对动物转基因的各种技术和方法进行综述,甄别各自的优缺点,为科研工作者提供一定的参考。     

转基因动物制备技术

所谓转基因动物是指基因组整合有外源基因,并且能将外源基因稳定遗传给后代的一类动物。本文简要介绍了转基因动物制备技术的受精卵原核显微注射法、干细胞嵌合体法、体细胞克隆法和病毒载体法四种主要技术的原理、方法及优缺点。     

转基因动物制作、鉴定和应用研究新进展

近来年,-些研究者在原有的转基因动物制作方法基础上作了改进,如逆转录病毒注射MⅡ期的卵母细胞,体细胞核移植技术法,精子与外源基因合并注射卵母细胞作为载体法以及基因打靶法等.此外转基因动物鉴定和应用也取得了突破性进展.     

转基因动物制作、鉴定和应用研究新进展

近年来，一些研究者在原有的转基因动物制作方法基础上作了改进，如逆转录病毒注射MⅡ期的卵母细胞，体细胞核移植技术法，精子与外源基因合并注射卵母细胞作为载体法以及基因打靶法等，此外转基因动物鉴定和应用也取得了突破性进展。     

转基因技术及转基因动物研究进展

转基因技术为从分子到个体多方面研究基因提供了新的方法和思路。本文介绍了原核注射法，载体法等转基因技术和转基因动物的检测方法。以及转基因动物在提高动物生长速度，提高动物产毛性能，制药，抗病育种以及由于转基因动物所产生的一些问题进行了探讨。     

抗真菌和抗除草剂基因多价植物表达载体构建及对烟草遗传转化的研究

利用基因重组技术,将木霉几丁质酶基因(Chi)和β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu)进行融合并将其引入含bar基因的载体pAHC25中,成功构建了由Ubiquitin启动子分别驱动Chi-linker-Glu和bar的中间载体,然后将其上的Ubi-Chi-linker-Glu-nos和Ubi-bar-nos表达盒引入pBI121中,获得兼具除草剂抗性基因bar和真菌抗性基因Chi与Glu的三价植物表达载体pBIb-CG,并对烟草进行遗传转化,经PCR及Southern检测,共获得转基因烟草32株。外源基因已整合到烟草基因组中。离体抑菌试验表明转基因烟草叶片提取液对木霉菌和镰刀菌表现出一定的抗性。     

转基因小鼠的制备

近二十年来,分子生物学研究获得了长足的发展,而其核心部分基因工程技术的发展尤为突出,特别是转基因动物技术的出现,它不仅为人们研究外源基因在整体动物中的表达调控规律提供了最为有效的手段,而且还可通过改变动物的基因型,使其表现型更符合人类的需要,以培育优良品种及生产人类所需的有生物活性的蛋白质.因此,动物的基因转移这一生物技术已经广泛地应用于生命科学研究的众多领域.所谓转基因动物是指用实验手段将特定外源基因导入动物早期胚胎细胞,由此整合到染色体上,并通过生殖细胞系传递给后代的一类新动物.常见的转基因方法有DNA显微注射法、胚胎干细胞介导法、逆转录病毒转染法、精子载体法、电转移法等,其中以DNA显微注射法最为成熟,使用最广泛、最可靠,该法常用的哺乳动物是实验小鼠.本文所要介绍的就是显微注射法制备转基因鼠所涉及的关键技术和原理(一般程序如图1所示).     

哺乳动物精子载体转基因技术新研究

精子载体法是以精子作为外源基因的载体，在受精过程中将外源基因导入动物胚胎，从而使外源基因进入子代的基因组中。相对于显微注射法、反转录病毒感染法、胚胎干细胞法等方法而言，它的主要优点是利用精子的自然属性克服了人为机械操作给胚胎造成的损伤，提高了转基因效率，而且操作简便、成本低廉。因而成为转基因动物研究的热点技术。现就精子结合外源基因的机制进行简要介绍，并对发展起来的精子细胞输精管内注射法、曲细精管徽注射法和睾丸直接注射法等精子载体转基因新途径进行综述。     

转基因动物

转基因动物是把基因工程和胚胎工程结合起来,创造了改变动物遗传性状的新方法,用这种技术可使不同物种同的基因人为地按着人们的设计进行转移。把由此创建的具有异种物种基因的动物叫转基因动物。基因导入方法首先通过热处理超速离心法、散弹射击法或人工合成法等技术获得目的基因(使之具有启动子和增强子序列),再与载体质粒体外重组,而后把这种含目的基因的重组质粒转入细菌形成了工     

慢病毒载体及慢病毒介导的RNA干扰

慢病毒载体是高效的基因转导工具,能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞.将慢病毒载体与RNA干扰结合能在哺乳动物的各类细胞中特异性抑制同源基因的表达,它将是基因功能研究和基因治疗的有力手段.应用慢病毒栽体进行转基因动物的制备,转基因的效率将得到显著提高.慢病毒介导的RNA干扰具有高效、稳定、特异性强的特点,它能在哺乳动物的各类细胞、多种疾病的离体细胞中实现稳定的RNA干扰.该技术被广泛用于基因功能的研究,在疾病的基因治疗上也具有良好的前景.     

转基因动物研究进展

转基因动物技术始于 2 0世纪 80年代 ,近 3 0年来 ,随着研究的深入 ,转基因动物的制作技术得到了突破性的发展。最初的原核注射法是应用最普遍、最可靠、效果最稳定的一种方法。但该方法存在价格昂贵 ,整合率低及不能定点整合的问题 ,所以近几年来转基因动物技术已出现了胚胎干细胞法 ,精子载体法 ,体细胞核移植法和人工酵母染色体法等一系列新方法。随着这些技术的不断发展 ,转基因动物技术应用正以其突出的优越性指导着多个领域的工作。目前 ,它的应用已渗透到基础理论、疾病动物模型、人异种器官移植、制药、畜牧兽医等领域。转基因动物应用正走向产业化的道路 ,具有十分广阔的前景。但作为一个新兴的技术 ,转基因动物研究还面临着一些急需解决的问题     

可调控胰腺癌(Pca)转基因小鼠模型制备的研究进展及展望

可调控胰腺癌转基因小鼠的模型,对人类胰腺癌的发病机制具有可模拟性,所以在人类胰腺癌的治疗方面具有广泛的应用前景。本文主要介绍运用转基因技术制备可调控胰腺小鼠模型的基本原理、国内外胰腺癌的最新研究进展及其该技术的应用前景。     

Technical development for production of gene-modified laboratory rats

Transgenic rats have been used as model animals for human diseases and organ transplantation and as animal bioreactors for protein production. In general, transgenic rats are produced by pronuclear microinjection of exogenous DNA. Improvement of post-injection survival has been achieved by micro-vibration of the injection pipette. The promoter region, structural gene, chain length and strand ends of the exogenous DNA are not involved in the production efficiency of transgenic rats. Exogenous DNA prepared at 5 microg/ml seemed to be better integrated than lower and higher concentrations. Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) has been successfully achieved in rats using a piezo-driven injection pipette. The ICSI technique has not only been applied to rescue infertile male strains but also to produce transgenic rats. The optimal DNA concentration for the ICSI-tg method (0.1 to 0.5 microg/ml) is lower than that for the conventional pronuclear microinjection. Production efficiency was improved when the membrane structure of the sperm head was partially disrupted by detergent or ultrasonic treatment before exposure to the exogenous DNA solution. For successful production of transgenic rats with a modified endogenous gene, establishment of embryonic stem cell lines or alternatively male germline stem cell lines and technical development of somatic cell nuclear transfer are still necessary for this species.     

诱导多能干细胞技术在猪转基因研究中的应用前景

长期以来,猪都是科学研究中重要的生物模型,转基因猪在生物模型、器官移植和动物良种繁育等方面有着极其重要的研究及应用价值,而现在的转基因克隆猪的成功率及成活率都普遍偏低。诱导多能干细胞技术在再生医学和畜牧业等领域有着广泛而诱人的应用前景,但目前还较少被应用于转基因猪的研究中。作者对转基因技术和诱导多能干细胞技术的发展历程,特别是诱导多能干细胞技术在猪转基因研究中的应用进行简述,以期为开展相关研究的科研人员提供一定的参考。     

新型饲料添加剂——丁酸钠

丁酸钠(Sodium Butyrate)是丁酸的钠盐形式,研究发现其水解成丁酸后具有广泛的生理功能,如作为肠细胞能量源、促进肠细胞分化增殖,改进小肠形态促进消化吸收等,近年来发现其在提高动物生产性能方面也发挥着作用。本文综述了丁酸钠的理化性质、营养生理功能和其在动物生产中的应用,并简要展望了丁酸钠研究和应用的前景。     

体细胞核移植技术在转基因动物研究中的应用

利用基因工程技术将目的基因整合入动物体细胞染色体中，并将其作为供体核移植入受体－－去核卵母细胞构成重建胚，然后将其移植入假孕母体，待其妊娠、分娩，便可得到经定向遗传修饰的转基因克隆动物。本文就这一领域的发展历史、研究现状、应用前景及存在的问题等方面作一概述。     

Advances in farm animal transgenesis

The first transgenic livestock were produced in 1985 by microinjection of foreign DNA into zygotic pronuclei. This was the method of choice for more than 20 years, but more efficient protocols are now available, including somatic cell nuclear transfer and lentiviral transgenesis. Typical applications include carcass composition, lactational performance and wool production, as well as enhanced disease resistance and reduced environmental impact. Transgenic farm animal production for biomedical applications has found broad acceptance. In 2006 the European Medicines Agency (EMA) approved commercialization of the first recombinant pharmaceutical protein, antithrombin, produced in the mammary gland of transgenic goats. As the genome sequencing projects for various farm animal species are completed, it has become feasible to perform precise genetic modifications employing the emerging tools of lentiviral vectors, small interfering ribonucleic acids, meganucleases, zinc finger nucleases and transposons. We anticipate that genetic modification of farm animals will be instrumental in meeting global challenges in agricultural production and will open new horizons in biomedicine.     

RAPD技术及其在动物医学中的应用

RAPD技术即随机扩增多态性DNA技术，是一种建立在PCR基础上的新的DNA多态性检测技术，其主要特点是利用随机寡核苷酸引物扩增基因组DNA片段，通过凝胶电泳分析其指纹图谱特征。该技术具有快速灵敏，程序简便等优点，现已经广泛应用于多个领域，此文综述了RAPD技术的原理、优缺点、影响因素及其在动物医学中的应用。     

Male Germ Cell Transplantation

Transplantation of male germ line stem cells from a donor animal to the testes of an infertile recipient was first described in 1994. Donor germ cells colonize the recipient's testis and produce donor-derived sperm, such that the recipient male can distribute the genetic material of the germ cell donor. Germ cell transplantation represents a functional reconstitution assay for male germ line stem cells and as such has vastly increased our ability to study the biology of stem cells in the testis and define phenotypes of infertility. First developed in rodents, the technique has now been used in a number of animal species, including domestic mammals, chicken and fish. There are three major applications for this technology in animals: first, to study fundamental aspects of male germ line stem cell biology and male fertility; second, to preserve the reproductive potential of genetically valuable individuals by male germ cell transplantation within or between species; third, to produce transgenic sperm by genetic manipulation of isolated germ line stem cells and subsequent transplantation. Transgenesis through the male germ line has tremendous potential in species in which embryonic stem cells are not available and somatic cell nuclear transfer has limited success. Therefore, transplantation of male germ cells is a uniquely valuable approach for the study, preservation and manipulation of male fertility in animals.     

万寿菊的生物活性及其在动物生产中的应用研究

万寿菊中主要含有叶黄素、黄酮、精油和α-三联噻吩等活性成分,具有抗炎、抗氧化、抑菌杀虫等生物活性.万寿菊在动物生产中具有提高机体免疫力和生产性能、改善畜产品品质等重要作用.文章对万寿菊的生物活性及其在动物生产中的应用进行综述,旨在为万寿菊的进一步开发利用提供参考.