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1.
中国禽肾病变IBV分离株S1基因的RT-PCR/RFLP特性 总被引:1,自引:0,他引:1
对中国13个省市分离到的29个肾病变IBV毒株作了S1基因的RT-PCR/RFLP特性鉴定.用相同的一对引物,8个毒株———广东/01/83,河南/04/94,河南/05/94,内蒙/01/93,江苏/01/93,河南/01/93,天津/02/93,内蒙/02/93,经RT-PCR扩增获得了包含有S1基因cDNA的1734bp的片段;河南/06/95的为一1000bp左右的片段;其它20个毒株没有结果.经RFLP分析,广东/01/83,河南/04/94,河南/05/94,内蒙/01/93归类于Massachusets血清型,江苏/01/93归于Gray血清型,河南/01/93,天津/02/93,内蒙/02/93是新的变异株.研究结果表明,国内禽肾病变IB的致病毒株,在不同的地区有其特异的变异株,也有一个共同的血清型———Masachusets型的毒株 相似文献
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采用RT-PCR技术,利用2对引物,从猪瘟病毒(CSFV)强毒石门株感染的猪血中成功扩增了NS4B基因,片段大小分别为757bp和774bp。克隆后经酶切鉴定,自动测序和序列分析,结果显示该基因较为保守,与其他猪瘟病毒毒株均有很高的同源性,与同属的BVDVSD-1株和NADL株也有较高的同源性。 相似文献
3.
采用RT-PCR技术,利用2对此物,从猪瘟病毒(CSFV)强毒石门株感染的猪血中成功扩增了NS4B基因,片段大小分别为757bp和774bp。克隆后经酶切鉴定,自动测序和序列分析,结果显示该基因较保守,与其他猪瘟病毒毒株均有很同的同源性,与同 BVDVSD-1株和NADL株也有较高的同源性。 相似文献
4.
RT-PCR和Digoxigenin标记的核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒试验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用2对已发表的引物和1对自行设计的引物对同一IBVH120株进行RT-PCR,分别获得了S1基因上与引物设计相一致的1720bp,228bp,602bp,的扩增片段。用自行设计的引物对7个毒株(H120,H52,M41,Conn,Gray,T,Holte)和5个分离株(宜毒,上毒,云毒,HK,118)的含毒尿囊液或纯化病毒进行RT-PCR。结果除Holte株,2个分离株(宜毒,云毒)外,其余均被成功地扩增出602bp的片段。将IBVH120株06kbPCR产物用Digoxigenin标记为探针,分别与上述各IBV毒株的核酸及其扩增产物进行核酸杂交,均呈现阳性反应,而该探针不与IBDV和NDV的DNA,EDS-76病毒的DNA及正常鸡胚尿囊液抽提物反应。RT-PCR和核酸杂交技术提供了直接从尿囊液中快速检测出病毒,作为诊断IBV的新方法。 相似文献
5.
本研究利用对应于PRRSVATCCVR-2332株及LV株ORF5基因保守序列的1对均为25个碱基的引物1005PS、1006PR对PRRSV中国分离株B13进行RT-PCR,扩增出了包括完整ORF5基因的DNA片段,片段长约730bp。将此片段定向克隆入pUC18载体的EcoRI和stI位点之间,获得了B13ORF5基因与pUC18载体的重组质粒。通过EcorI/PstI、EcorI/HindⅢ 相似文献
6.
鸽Ⅰ型禽副粘病毒F基因克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR技术获得了编码鸽Ⅰ型禽副粘病毒GD-P1分离株F0裂解位点附件884bp的F基因cDNA片段,并将其克隆到pGEM-T Easy质粒中,获得了重组质粒T-pPMV-F-I,核酸序列测定和分析表明,该片段与新城疫病毒强毒株F48E9和HER/33相应区域的同源性分别为87.5%和88.19%,与新城疫病毒弱毒株LaSota和B1株的同源性分别为83.83%和84.15%。该病毒F0裂 相似文献
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犬冠状病毒RT—PCR检测方法的建立和初步应用 总被引:9,自引:1,他引:9
根据Weseling发表的犬冠状病毒(CCV)K378株纤突蛋白(S)基因序列,设计合成了4条寡聚核苷酸引物P1(18bp,1520~1537bp)、P2(19bp,2072~2090bp)和P3(20bp,2621~2640bp)、P4(20bp,2944~2963bp)。以此为引物,以从美国引进的CCVNL-18参考株反转录产物为模板,在国内首先建立了CCVRT-PCR方法,并初步应用于国内CCV分离株的鉴定。结果表明,以P1、P2和P3、P4为引物,只能从CCVNL-18株反转录产物中扩增出大小分别为571bp和343bp核苷酸片段,与理论设计值大小一致,而正常CRFK细胞和狂犬病等5种对照病毒扩增结果为阴性。RT-PCR可检出1μL做105和103倍稀释的CCVNL-18株反转录产物,说明其具有很高的敏感性。初步应用试验结果,可从2株国内分离的CCV反转录产物中扩增出571bp和343bp核苷酸片段。通过本研究不仅建立了敏感、特异的CCVRT-PCR检测方法,也为其S基因的克隆和序列测定奠定了基础。 相似文献
8.
参照了已表的IBV Beaudette株全基因组序列,自行设计合成了3和引物(youl+、you2-youM+),引物you1+和you2-在S1基因两侧,跨幅约1610bp,引物you2-和youM+在S1基因的3’端,跨幅约530bp。用这两对引物对5个IBV地方分离株(HN2,HN4,JX1,SC2和SC1)进行RT-PCR,均成功地扩增出相应大小的目的片段。病毒在电镜下观察中以形态多变的冠状病毒粒子。 相似文献
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为探索鸽新城疫的流行特点,在分子水平上阐明鸽新城疫病毒分离株鸡新城疫毒株之间的相互关系,我们用RT-PCR技术获得了分离株F0裂解位点附近300bp的基因片段,将其克隆到pUC19载体上得到一重组克隆pNDV21,序列分析表明,插入片段与鸡析城疫强毒Texas相应区域的同源性为87.7%,而与弱毒株D26/76及La Sota的同源性分别是91.7%和98%。 相似文献
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传染性支气管炎病毒地方分离毒株S1基因的RT-PCR方法研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以传染性支气管炎病毒(IBV)标准毒株M41为材料,根据Genbank公开序列自行全成一对特异引物,用于扩增IBV的完整S1基因。建立了针对IBV基因组RNA特点的RT-PCR方法。对反应体系中的重要反应物Mg^2+、dNTP和引物浓度进行优化,确定其浓度值分别为1.5mmol/L,200μmol/L和40μmol/L。使用此反应体系对国内IBV地方离毒株JS/95/03,SD/97/01等10多 相似文献
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禽传染性支气管炎病毒免疫原基因的PCR获取及其酶切鉴定 总被引:3,自引:1,他引:3
分绍用RT-PCR(反转录-聚合酶链反应)获取禽传染性支气管炎病毒M41株和广东地方致弱株D41免疫原(S1)基因的详细方法,所用引物为IBV Beaudette株S1基因两侧的对应序列,跨幅为1.7kb,结果表明,两株病毒所获的PCR产物与预期的一致;用此对引物,以IBV D41株S1基因PCR产物为模板,扩增出一样的DNA片段,试验还显示,国内外几家公司有关RT和PCR的分子生物学试剂可以兼用 相似文献
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IBDV南京野毒株VP2结构蛋白基因克隆与表达 总被引:5,自引:0,他引:5
用微机辅助设计合成了一对引物,用于扩增传染性法氏囊病病毒中国地方株VP2基因片段。RT-PCR增出-1321bp的目的的片段,分子杂交鉴定为VP2基因。 相似文献
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参考人、鸡,鼠的ESR基因序列,设计一对引物,采用PCR技术扩增出猪的ESR基因一段DNA片段,将该片段克隆到pGEM-T Easy质粒载体中,重组质粒经PCR鉴定和酶切分析确定克隆成功,经测序结果分析确定该片段为猪ESR基因与其他动物第4号外显子相对应的一段DNA片段,大小为332bp。 相似文献
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新城疫病毒Ulster株经SPF鸡胚增殖和超速离心纯化后,以酚-SDS法提取其基因组RNA,作为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的模板。根据其已发表的F和HN基因核苷酸序列,合成一个长为30mer的寡核苷酸(位于F基因内)和一对分别长为28、30mer的寡核苷酸(位于HN基因两侧)分别作为反转录引物和PCR引物。扩增反应产物经琼脂糖凝胶电泳分析,出现一条长为1.93kb的特异性条带,与预期相符。并将此特异性条带克隆入质粒载体pGEM-3Zf(+)中,并经限制性核酸内切酶分析(REA)。RT-PCR和REA结果证实其为新城疫病毒Ulster株的血凝素-神经氨酸酶基因。 相似文献
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根据已发表的猪瘟病毒序列,设计并合成了3对引物,利用RT-PCR技术,从猪瘟病毒石门株感染猪血中成功扩增了各cDNA片段,覆盖整个NS5A基因,片段大小各为774,685,917bp。克隆后测序。序列比较结果显示,该基因在CSFV中较为保守。与同属的BVDV的序列同源性较低,且氨基酸的同源性低于核苷酸的同源性。推测它参与决定瘟病毒的特异性。 相似文献
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本文重缚和构建了新城疫病毒(NDV)融合蛋白基因,并对该基因进行了鉴定,将新城疫病毒F基因片段经RT-PCR扩增,插入经EcoRI/SalI酶切的克隆载体pUC18及表达载体pGEMEX,转化大肠杆菌JM109株,用氨苄青霉素平板法初步筛选克隆,再用双酶切法,核酸探针,PCR及核苷酸序列分析法鉴定,表明插入成功并且阅读框架正确。 相似文献
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根据已报道的TMVU1株系(TMV-U1)的序列设计了特异性引物,利用RT-PCR技术,从烟草花叶病毒蚕豆分离物(TMV-B)上扩增移动蛋白(MP_基因及其邻近序列,将比CDNA片段克隆于pBluscriptSK质粒上,进行测序分析,结果表明MP基因由807个核苷酸组成,编码268个氨基酸,与TMV-U1的MP基因序列比较,核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性的99.01和98.89%,与TMV 相似文献
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鹅副粘病毒F蛋白基因的克隆和序列分析‘ 总被引:1,自引:0,他引:1
鹅副粘病毒分离株YG97经10日龄鸡胚增殖后纯化,提取病毒基因组RNA,采用PT-PCR一次性扩增出与预期设计的1.7kb大小相符的特异性条带。将扩增产物提纯后克隆入pEGM^R-T载体,经转化、筛选及酶切鉴定后,初步获得了含鹅副粘病毒F基因的阳性克隆,并进行了序列测定。序列分析表明:扩增的F基因片段的长度为1695bp,共编码553个氨基酸,F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为^112R-RQ-K-R- 相似文献