苜蓿花药培养及倍性鉴定

在不同低温预处理时间,不同培养基和不同激素组合下进行了苜蓿花药培养实验。结果表明,花药4℃低温预处理24h、48h较72h诱导效果好。NB培养基对愈伤组织的诱导效果比战培养基好。最佳愈伤组织诱导培养基组合为NB＋2,4-D0．5mg／L＋NAA0．3mg／L＋6-BA0．5mg／L＋KT3．0mg／L。通过不同蔗糖浓度对愈伤组织的诱导效果比较,表明低浓度的蔗糖有利于降低愈伤组织的褐化率,高浓度的蔗糖有利于单倍体愈伤组织的诱导。分化培养的最佳组合为MS＋NAA0．2mg／L＋6-BA3．0mg／L。诱导生根最好的培养基为1／2MS培养基,最适合蔗糖浓度为10g／L。     

影响中苜2号苜蓿愈伤组织诱导的主要因素分析

以MS为基本培养基,采用L16（4^5）正交试验设计,研究不同外植体类型及植物生长调节物质对中苜2号愈伤组织生长情况、诱导率的影响,筛选适合中苜2号愈伤组织诱导的最佳外植体类型和最优激素配比。结果表明,以下胚轴为外植体诱导的愈伤组织生长状况良好,诱导率高,为诱导愈伤组织的最佳外植体;2,4-D浓度是影响愈伤组织诱导率的最主要因素,其次是外植体类型;诱导中苜2号愈伤组织的最佳培养基为：MS＋2,4-D 0．2mg／L＋NAA0．01mg／L＋6-BA1mg／L＋KT0．2mg／L。     

植物激素对2个紫花苜蓿品种再生体系的影响

采用MS为基本培养基,附加不同浓度的2,4-D、KT和NAA,对"盛世"和"甘农4号"2个紫花苜蓿品种进行了组织培养再生体系的研究。结果表明:下胚轴是愈伤组织诱导的最佳外植体材料;2,4-D浓度增加对"甘农4号"紫花苜蓿出愈率影响不明显,但"盛世"紫花苜蓿的出愈率随着2,4-D浓度的增加呈显著升高趋势;2个品种的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L KT+30g/L蔗糖+7.5 g/L琼脂;最适分化培养基为MS+KT0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖20 g/L;最佳诱导生根的培养基为1/2 MS+NAA0.5 mg/L。     

天蓝苜蓿组织培养及再生体系的研究

以野生天蓝苜蓿种子发育5～7d无菌苗的子叶、下胚轴和种子苗叶片为外植体，对其愈伤组织诱导及其分化的基本培齐与外源激素组合和浓度配比进行试验。结果表明：对子叶、下胚轴和叶片愈伤组织诱导最适宜的基础培养基分别是MS、B5和SH；激素的种类及其浓度配比对于愈伤组织的诱导因不同的外植体有很大的差异。其中，子叶、下胚轴以MS＋NAA（0．5～1．0mg／L）＋6-BA（0．7mg／L）效果较好，叶片以SH＋NAA（0.5—1．0mg／L）＋2，4-D（1.5～5mg／L）十6胡A（0．7mg／L）较好，少量下胚轴在MS＋NAA（0．5mg／L）＋6-BA（0．7mg／L）和MS＋NAA（0．5mg／L）＋KT（0．5mg／L）的培养基中直接分化出胚状体，并成功发育成植株。在培养基Whb5上，子叶、下胚轴和叶片的分化都得到了很好的效果，分化率分别为43％、57％、40％，15～30d后都能再生植株。     

仙客来愈伤组织的诱导及其抗褐变的研究

该试验以仙客来的叶片、叶柄、花梗为外植体,分别以MS为基本培养基,并添加了不同种类和浓度的植物生长激素,对其进行愈伤组织的诱导.另外,还初步研究了活性炭(AC)、VC、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和黑暗培养对仙客来外植体抗褐变的作用.结果表明,以叶片为外植体诱导效率最高,叶柄、花梗次之.叶片愈伤组织诱导的最适培养基为1/2MS 6-BA 2.0 mg/L 2,4-D 0.5 mg/L KT 0.25 mg/L;叶柄愈伤组织诱导的最适培养基是MS 6-BA 0.2mg/L NAA 2.5 mg/L;花梗愈伤组织诱导的最适培养基是MS 6-BA 0.2 mg/L 2,4-D0.5 mg/L.5种抗褐化处理方法中黑暗培养抗褐化效果最好.     

不同激素和外植体对柱花草愈伤组织诱导及体细胞胚的影响

以MS为基本培养基,以柱花草无菌苗的幼根、下胚轴、子叶、茎和真叶为材料,采用正交设计方法,研究不同外植体和激素对柱花草愈伤组织诱导和体细胞胚的影响。结果表明:外植体类型及2,4-D、KT、NAA、6-BA浓度对愈伤组织诱导率的影响均达极显著水平(P0.01),其中2,4-D浓度是最主要的影响因素,其次为外植体类型。下胚轴和真叶为柱花草愈伤组织诱导的理想外植体,愈伤诱导培养基的最优配方为MS+1.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.01mg/L NAA+0.1mg/L 6-BA。NAA、6-BA浓度对柱花草体细胞胚产生率的影响达极显著水平(P0.01),NAA浓度是主要影响因素,体细胞胚产生的最佳培养基配方为MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+2.0g/L CH。     

紫花苜蓿组织培养再生体系的建立

以紫花苜蓿无菌苗的下胚轴、子叶、叶片和叶柄为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对胚性愈伤组织诱导的影响以及不同分化培养基对胚状体分化的影响。结果表明：下胚轴外植体胚性愈伤组织诱导率最高;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH＋2．0mg／L2,4-D＋0．5mg／L6-BA;最佳胚状体诱导培养基为MSO＋2．0mg／L6-BA＋0．5mg／LNAA;成苗培养基为1／2MS＋1％蔗糖＋0．7％琼脂。     

不同苜蓿品种再生体系的差异性比较

以陇东野生紫花苜蓿、阿尔冈金、甘农1号、游客4个苜蓿品种的下胚轴为外植体,比较不同苜蓿品种外植体愈伤组织诱导、分化及再生能力的差异,研究不同激素浓度及配比对再生体系建立的影响。结果表明,4个苜蓿品种下胚轴诱导率依次为阿尔冈金甘农1号陇东野生紫花苜蓿游客;在愈伤组织诱导培养基MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA上诱导率最高;MS+0.5 mg/L KT+0.3 mg/L NAA为最佳分化培养基,分化率在84.5%~93.5%;适宜的生根培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,附加1%蔗糖,各品种再生植株的移栽成活率为100%。     

安祖花组织培养苗再生体系的优化

以安祖花组织培养苗杂AO茎段为试验材料,用正交设计法研究6-BA,2,4-D和KT激素的不同浓度和大量元素中NH4NO3对安祖花愈伤组织诱导的影响;及6-BA,NAA和IBA 3种激素对不定芽分化的影响。结果表明:KT是影响杂AO愈伤诱导的主要因素,不加KT的愈伤诱导率明显高于加KT的愈伤诱导率;各因素影响的主次关系为KT>2,4-D>BA>NH4NO3;最适愈伤诱导的培养基为1/2MS(NH4NO31 100mg/L)+BA(1mg/L)+2,4-D(0.25mg/L);愈伤诱导率为91.2%。6-BA是影响不定芽分化的主要因素,1mg/L 6-BA不定芽诱导率明显高于1.5和2mg/L的诱导率;各因素影响主次关系为6-BA>NAA>IBA;不定芽诱导率的最佳配方为MS+BA(1mg/L)+NAA(0.1mg/L)+IBA(0.1mg/L);不定芽诱导率为83.5%。     

苜蓿组织培养体细胞胚发生体系的建立

采用17个农艺性状优良的苜蓿Medicago sativa丰产品种,诱导体细胞胚发生,结果表明:苜蓿无菌苗子叶在含有2.0 mg/L 2,4-D和0.25 mg/L KT的MS培养基(有机物质有改变)上诱导出愈伤组织;愈伤组织在含有0.05 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA的MS培养基上形成胚性愈伤组织,并伴随着体细胞胚的发生;发育到子叶期的体细胞胚在不加任何激素的MS培养基上就可以萌发,再生成完整植株。     

Establishing regeneration systems of Gannong No.4 alfalfa

为实现对甘农4号紫花苜蓿Medicago sativa cv.Gannong No.4的遗传改良,研究拟建立一个操作简便、可重复性强、遗传性稳定、培养周期短和再生率高的转基因受体系统,为其遗传改良奠定基础。研究以MS为基本培养基,在不同浓度的2,4 D与6 BA的诱导培养基上,以甘农4号紫花苜蓿下胚轴为外植体,诱导愈伤组织,诱导率为86.85%～99.56%,其中MS+2 mg/L 2,4 D+1 mg/L 6 BA诱导率最高;浅黄色至淡绿色的愈伤组织在MS+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L NAA培养基上的分化最好且植株颜色嫩绿。丛生芽在1/2MS+0.5 mg/L NAA的生根培养基上可再生成完整的苜蓿植株。     

影响中苜2号苜蓿愈伤组织诱导的主要因素分析

以MS为基本培养基,采用L16(45)正交试验设计,研究不同外植体类型及植物生长调节物质对中苜2号愈伤组织生长情况、诱导率的影响,筛选适合中苜2号愈伤组织诱导的最佳外植体类型和最优激素配比.结果表明.以下胚轴为外植体诱导的愈伤组织生长状况良好,诱导率高,为诱导愈伤组织的最佳外植体;2,4-D浓度是影响愈伤组织诱导率的最主要因素,其次是外植体类型;诱导中苜2号愈伤组织的最佳培养基为:MS+2,4-D 0.2mg/L+NAA 0.01mg/L+6-BA 1mg/L+KT 0.2mg/L.     

紫花与杂花苜蓿再生影响因子的比较研究

对紫花苜蓿(Medicago sativa L.)(秘鲁、关中、甘农3号)及杂花苜蓿(Medicagovaria Martyn)(甘农1号、甘农2号)组培再生体系各影响因子进行比较研究。结果表明:紫花、杂花苜蓿的组培再生能力差异较大,前者显著高于后者;在愈伤组织诱导中,子叶节是最佳的外植体材料;2,4-D浓度增加对紫花苜蓿出愈率影响不明显,但杂花苜蓿的出愈率随着2,4-D浓度的增加呈明显的升高趋势;紫花苜蓿的最佳愈伤组织诱导培养基为MS₊2,4-D2.0mg/L+蔗糖30g/L,诱导率均在95%以上;杂花苜蓿为MS₊2,4-D 4.0mg/L+蔗糖30 g/L,两个品种诱导率分别为65.6%、73.3%;5个品种的最适分化培养基均为MS₊KT 1.0 mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖20 g/L或MS₊BA4.0 mg/L,分化率也各有差异,紫花苜蓿不定芽的分化率可达到70%左右,而杂花苜蓿在30%左右;最佳诱导生根的培养基为1/2MS₊IBA 1.0 mg/L;本研究建立了紫花苜蓿高频再生组织培养体系,为实现外源基因的高效遗传转化奠定基础;通过紫花苜蓿和杂花苜蓿的再生体系影响因子的比较研究,为杂花苜蓿再生体系的建立提供参考。     

羊茅种子愈伤组织诱导及再生体系的建立

以羊茅(Festuca ovina)成熟种子为外植体材料,在改良的MS(MSM)培养基上分别添加不同质量浓度的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、激动素(KT)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、奈乙酸(NAA),探讨不同的激素组合对愈伤组织诱导、植株分化以及植株生根的影响,以建立羊茅无性系的高效再生体系。结果表明,羊茅在MSM+6.0 mg/L 2,4-D+0.02 mg/L KT的培养基中愈伤组织诱导生长最好;在MSM+2.0 mg/L6-BA+0.6 mg/L NAA培养基上植株分化率最高,达82%;在1/2 MSM+0.6 mg/L NAA培养基上生根率达100%。     

天蓝苜蓿组织培养及再生体系的研究

以野生天蓝苜蓿种子发育5～7d无菌苗的子叶、下胚轴和种子苗叶片为外植体,对其愈伤组织诱导及其分化的基本培养与外源激素组合和浓度配比进行试验。结果表明:对子叶、下胚轴和叶片愈伤组织诱导最适宜的基础培养基分别是MS、B5和SH;激素的种类及其浓度配比对于愈伤组织的诱导因不同的外植体有很大的差异。其中,子叶、下胚轴以MS+NAA(0.5～1.0 mg/L)+6-BA(0.7mg/L)效果较好,叶片以SH+NAA(0.5～1.0mg/L)+2,4-D(1.5～5 mg/L)+6-BA(0.7mg/L)较好,少量下胚轴在MS+NAA(0.5mg/L)+6-BA(0.7mg/L)和MS+NAA(0.5mg/L)+KT(0.5 mg/L)的培养基中直接分化出胚状体,并成功发育成植株。在培养基Whb5上,子叶、下胚轴和叶片的分化都得到了很好的效果,分化率分别为43%、57%、40%,15～30d后都能再生植株。     

火龙果愈伤组织诱导及再生体系的建立

为建立稳定、快速、高效的火龙果再生体系,以金都1号火龙果不同成熟度的茎段为外植体,探讨不同激素浓度配比、培养条件等对其愈伤组织及不定芽发生的影响。结果表明: 幼芽茎段和幼嫩茎段较适宜作为火龙果的诱导外植体。诱导率明显高于成熟茎段的诱导率。幼嫩茎段诱导愈伤组织最适合的培养基是MS +TDZ 0.6 mg/L + KT 0.8 mg/L +2,4-D 1.0 mg/L,诱导率是81.7%,不定芽再生率达到36%,幼芽茎段诱导的愈伤组织培养基为MS +6BA2.0mg/L +2,4-D 1.0 mg/L,诱导率高达91.7% 愈伤组织诱导不定芽的培养基为MS+NAA 0.2mg/L+6-BA 2.0 mg/L,生根诱导最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L     

早开堇菜组织培养及植株再生体系的建立

以野生早开堇菜为材料,研究了不同外植体类型(子叶节、叶片、叶柄)和不同激素配比对其不定芽诱导、愈伤组织诱导和分化的影响,成功建立了早开堇菜组织培养植株再生体系。结果表明,1) 诱导子叶节和叶柄不定芽诱导的最适培养基为 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,叶片不适合作为直接诱导不定芽的外植体。2) 3种外植体均能诱导愈伤组织,子叶节愈伤组织诱导的时间最短,其次为叶柄,叶片最晚。子叶节和叶柄愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D,诱导率分别为98.3%和96.7%;叶片愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.05 mg/L NAA,诱导率可达88.3%。3) 最适愈伤组织分化培养基为:MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,分化率为100%。4)不定芽增殖的最佳培养基为:MS+1.5 mg/L 6-BA+0.075 mg/L NAA,增殖率为4.68。 5)再生苗移植到添加1.0 mg/L 6-BA的1/2 MS培养基上,生根率92.3%。6)组培苗移栽到珍珠岩∶河沙∶腐殖质(1∶2∶2)的混合基质时,100%成活,且植株长势好。     

外源激素对紫穗狼尾草愈伤组织诱导及分化的影响

以紫穗狼尾草(Pennisetum alopecuroides)幼芽基部为外植体,研究了外源激素对其愈伤组织诱导及分化的影响,筛选适宜的激素种类及浓度配比,为狼尾草无性系抗性育种奠定基础。结果表明,2,4 D对愈伤组织诱导的作用最显著,生长素NAA和KT的作用相近,均以0.5~1.0 mg·L-1为宜;NAA对愈伤组织分化的作用较明显,以0.5~1.0 mg·L-1与3.0 mg·L-16 BA配合效果最佳,KT的作用不明显。最佳诱导培养基为MS+2,4 D 3.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1 +KT 1.0 mg·L-1;最佳分化培养基为MS+NAA 0.5 mg·L-1 +6 BA 3.0 mg·L-1。     

柠条锦鸡儿的组织培养

以柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii Kom.)无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究其愈伤组织诱导及植株再生。结果表明:柠条锦鸡儿子叶和下胚轴均能诱导出愈伤组织,其适宜诱导培养基分别为M S+2,4-D2.0(mg/L)+KT0.1(mg/L)和M S+2,4-D2.0(mg/L)+BA0.5(mg/L);子叶诱导不定芽的适宜培养基为M S+6-BA0.2(mg/L)+NAA0.05(mg/L),下胚轴诱导不定芽的适宜培养基为MS+6-BA0.5(mg/L)+NAA0.05(mg/L);适宜生根培养基为1/2M S+IBA0.5(mg/L)+NAA0.5(mg/L)。本试验结果可为柠条锦鸡儿的快速繁殖利用及品种改良提供依据。