不同日月龄兔感染RHDV后圆小囊的比较病理学观察

为探讨圆小囊在免体全身抗感染免疫中的功能作用，采用组织病理学及免疫组织化学方法，对比观察了2日龄、1月龄及2月龄实验免感染RHDV后圆小囊的病理变化，同时采用ELISA方法对实验兔的血清及肝、肾、脾中的RHDV含量进行了测定，重点对实验兔圆小囊黏膜上皮内淋巴细胞(IEL)进行了统计比较，结果显示：2月龄以内兔人工感染RHDV后，临症表现、剖检及组织病理学观察均未见异常。血清及RHDV的靶器官肝、脾、肾中均未检测出RHDV抗原。2月龄以上兔感染RHDV后，无论从临床症状，还是大体剖检，组织病理学观察，均出现了明显的病理学改变，而且感染后血清RHDV抗原检测呈阳性反应。圆小囊、肝、脾、肾等组织器官都呈现RHDV免疫组化强阳性反应。2月龄以内的乳兔及仔兔感染RHDV后，圆小囊虽未出现明显的形态结构改变，免疫组化染色也未见RHDV抗原阳性反应物，但IEL明显增多，2日龄兔IEL由1．2％增加到4．2％；1月龄兔的IEL由10．1％增加到26．1％。1月龄仔兔还表现出固有层中淋巴细胞明显增多。     

兔出血症病毒在小鼠体内分布及免疫试验

应用纯化兔出血症病毒(RHDV)接种小鼠3d后剖杀,分离组织,通过电镜观察、血凝试验(HA)、RT-PCR,进行体内分布检测;同时将小鼠接种3次后10 d,分离脾淋巴细胞进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测.电镜观察未见到病毒粒子;HA检测结果为肝脏的HA价最高,肺脏最低;RT-PCR未检测到目的基因;WST检测结果表明,免疫组刺激指数高于对照组;免疫组的IFN-γ和IL-2检测指数高对照组;IL-4检测结果低于对照组.RHDV接种小鼠分离的肝脏具有血凝性,能产生良好的细胞免疫反应.     

原核表达的兔出血症病毒衣壳蛋白对兔的免疫保护效果

 为了检验大肠杆菌表达的兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白（VP60）对兔的免疫保护效果，将34只清洁兔随机分成3组：单用免疫佐剂对照组（8只）、单用重组VP60组（8只）和重组VP60加免疫佐剂组（18只），分别经皮下注射，VP60的免疫剂量为每只每次400 μg，免疫2次，间隔7 d。在第2次免疫7 d后，VP60加免疫佐剂组的兔血清抗体水平显著高于单用VP60免疫组（ELISA 1∶64 000 对比1∶4 000 / HI 1∶128 对比1∶16），表明免疫佐剂可明显加速重组VP60诱导抗体产生的进程，用RHDV NJ85强毒攻击，免疫佐剂对照组与单用VP60免疫组的实验兔均全部死亡（8/8和8/8），VP60加免疫佐剂组均全部存活，保护率为100%（18/18）。用RHDV血凝试验（HA）检测，死亡兔的肝脏组织液HA效价大于1∶512，而存活兔的肝脏组织液HA效价小于1∶2，肝脏组织触（涂）片检查和细菌培养均为阴性，证明病死兔系RHDV感染所致。用RHD重组亚单位疫苗在养兔场进行800只兔的田间免疫试验，安全有效，没有出现不良反应。对重组菌进行冻存、复苏、培养、诱导表达和质粒酶切分析，证明VP60基因在宿主菌内保持稳定。     

仔兔球虫病的预防与诊治

2010年7月份榆树市某乡某养兔场,自繁自养仔兔200多只,日龄50天左右开始发病,发病率在40%左右,病兔主要表现为精神不振,食欲减退,眼、鼻分泌物增多,眼结膜苍白,腹泻、尿频等。三日后有2只重症仔兔死亡,表现为两后肢肌肉痉挛,伸直抽动,头向后仰,倒地而死。根据临床观察以及死亡仔兔和重症仔兔剖检变化及实验室检测,诊断该兔场仔兔感染了兔球虫病。笔者结合该兔场仔兔球虫病的诊治过程浅析了兔球虫病的有关常识,供广大养兔场（户）参考借鉴。     

兔巴氏杆菌病与大肠杆菌病混合感染诊断与防治

2002年1月,哈密市一兔场饲养的育肥仔兔760只发病死亡,年龄在45～65日龄,体重1 000～1 660 g,品种有依普吕、新西兰、比利时及杂交商品仔兔,经流行病学、临床症状、剖检变化、镜检以及针对性的防疫和治疗确诊为兔巴氏杆菌病与大肠杆菌病混合感染.     

兔出血症病毒体内分布和抗体消长规律研究

为了了解疫苗的使用剂量与抗体消长规律的相互关系,并降低生产成本,通过对大耳白兔接种兔出血症病毒(RHDV),无菌分离各个组织后,应用血凝试验和RT-PCR方法检测各组织的血凝效价和基因;制备RHD组织灭活疫苗接种成年兔,进行1～6周抗体消长规律研究.血凝试验结果为肝脏的血凝效价最高,其次为脾脏、骨髓、心脏、肾脏、肌肉、淋巴结、脑组织,肺脏最低;对照组的组织血凝效价均为阴性.所有组织经RT-PCR检测均检出目的基因,对照组均未检测到目的基因.不同剂量接种兔后1～6周均检测到抗体.结果表明:2种试验方法检测结果相符;雌雄个体阳性检测率差异不显著;接种剂量大的试验组产生的抗体水平较高;接种血凝效价为160的疫苗时可达到保护作用;病死兔的组织均可以制备疫苗用于免疫动物.     

1例蛋鸡腺病毒感染的诊断及对SPF鸡的致病性

2018年11月,山东省某蛋鸡场80日龄左右鸡群出现采食下降、精神沉郁、消瘦等症状,日死亡率达1%,临床剖检病变主要为心包积液、肝脏有出血点、肾脏肿大等。为明确患病蛋鸡死亡原因及确定病原,无菌采取病死鸡肝脏、肾脏等,并展开病毒分离、PCR检测等实验室诊断,结果表明,病料接种鸡胚,胚体有明显出血症状,肝脏有出血点,PCR扩增产物测序结果与已发表的血清4型禽腺病毒Hexom基因同源性为99%。上述结果表明,该分离株为血清4型禽腺病毒。将分离到的腺病毒对2周龄SPF鸡进行攻毒试验研究其致病性,每日观察鸡的精神状态,记录死亡情况,发现胸肌接种0.3 mL/羽的病毒剂量对SPF鸡的致死率高达100%,死亡时间在72～144 h;对死亡鸡剖检均可见明显的心包积液,肝脏出血坏死;组织病理学观察发现肝细胞核内形成嗜碱性包涵体。     

牛病毒性腹泻病毒人工感染泌乳兔试验

为了解BVDV JH-1毒株对泌乳兔的致病性,分别采用滴鼻攻毒、口腔灌胃攻毒和静脉注射攻毒的方法感染泌乳兔。通过测定感染后泌乳兔的体温、观察临床、病理剖检和病原学检测等方法,可见泌乳兔接种病毒2 d内出现腹泻,但体温正常。个别泌乳兔有排出肠黏膜现象,剖检可见胃黏膜脱落、肠溃疡灶等病变。肠道黏膜经PCR方法可检测到BVDV。结果说明BVDV首次感染泌乳兔后,对泌乳兔产生致病性作用。     

鸡新城疫的诊断及病理分析

[目的]对疑似鸡新城疫病例进行诊断,从而对防控该病提供依据。[方法]应用常规病理剖检技术解剖死亡鸡只,观察病理变化。病死鸡组织脏器研磨等处理后接种10日龄SPF鸡胚,取尿囊液进行平板血凝试验（HA）与平板凝集抑制试验（HI）。取病鸡肠道、腺胃、脑、十二指肠、肺脏等组织制作石蜡切片,HE染色,镜检。[结果]HA和HI结果显示,收集的尿囊液可凝集鸡红细胞,同时这种凝集作用又可被抗新城疫阳性血清抑制。病理剖检可见,各组织脏器有明显的出血性病变,实质细胞均出现不同程度的损伤。[结论]该分离毒株被确诊为鸡新城疫病毒。     

兔病毒性出血症伴发绿脓杆菌病的诊治

1994年12月某免疫兔场发生疫病.经诊断为兔病毒性出血症病毒与绿脓杆菌混合感染所致.1 发病情况某兔场有仔兔(?)只,(?)过兔瘟(?)巴氏杆菌杆菌—魏氏梭菌三联苗.1994年12月仔兔长至(?)月龄时约有1/4开始发病,病兔表现精神沉郁,食欲减退或不食.体温升高.呼吸急促,患兔有血样稀便,鼻孔流血,多于1～2d死亡.剖检见气管、肺出血明显.肝肿大出血.十二指肠充满血样液体,肠道内尤其十二指肠,空肠粘膜出血严重2 实验室诊断2.1 病毒学检查 取3只病兔肝分别磨碎后用灭菌生理盐水制成10%悬液,在96孔V型(?)量滴定板上按常规法用人O型血进行红细胞凝集(HA)试验,其凝集价2份(2/3)为1:1024,3份(3/5)为1:256,证明病料中均含有病毒.用已知兔病毒性出血症阳性血清按常规法进行红细胞凝集抑制试验(HI),结果以上病料中病毒的血凝性均被血清抑制,说明病料中的病毒为兔病毒性出血症病毒.     

一株鹅源巴氏杆菌强毒株的分离及鉴定

为了确定导致山东某鹅场种鹅发病的病原.从病死鹅肝脏、心脏中分离并纯化细菌,根据其形态特征、培养特性、生化鉴定、PCR和致病性试验等进行鉴定.致病性试验结果表明,1.2×109 CFU/mL的菌液10倍系列稀释后,接种11日龄健康雏鸭后,该分离菌株对11日龄健康雏鸭的LD50为10-4.5 CFU/mL.死亡雏鸭的剖检病变与病死鹅类似,并分离出形态特征完全一致的菌落.病理组织学变化以十二指肠绒毛断裂、脱落、肝细胞脂肪变性、心肌纤维断裂为特征.药敏试验结果显示,该分离菌株对头孢曲松钠、阿莫西林、氨苄西林、氧氟沙星等较敏感.山东某鹅场中发病病原经分离鉴定为多杀性巴氏杆菌,为禽巴氏杆菌病的诊断与防治提供了科学的依据.     

鸡东县冬季幼羊死亡的原因及防治措施

黑龙江省鸡东县2013年冬季出现不同日龄幼羊死亡的现象,经过调查走访及流行病学调查和剖检、实验室检查,分析了造成幼羊死亡的主要原因,并采取了及时的防治措施。1发病死亡原因1.1霉菌中毒该县饲养羊大多是以放牧为主。由于2013年10月份接连下了两场大雪,玉米秸秆和玉米都出现了不同程度的霉变,幼羊采食后出现了死亡,甚至成年羊也出现死亡。剖检症状为：羊胃粘膜脱落;肝脏硬脆,有坏死灶;肠道有出血现象。     

兔出血症病毒在豚鼠体内分布及细胞免疫试验

应用纯化兔出血症病毒(RHDV)接种豚鼠,4d后剖杀,分离组织,通过电镜观察、血凝试验(HA)、RT-PCR等方法检测病毒在体内分布情况;应用纯化RHDV间隔2周接种豚鼠,3次免疫后10 d,分离外周血淋巴细胞进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测.结果表明:电镜观察未见病毒粒子;HA检测结果为肝脏HA效价最高,肺脏效价最低;RT-PCR方法未检测到RHDV目的基因;WST检测发现免疫组刺激指数高于对照;免疫组IFN-γ、IL-2检测结果高于对照,IL-4检测结果低于对照.RHDV在豚鼠部分组织具有血凝性,电镜未见病毒粒子,能使豚鼠产生细胞免疫反应,本研究为筛选鉴定“通用型”T细胞表位奠定基础.     

兔病毒性出血症病毒YM株衣壳蛋白基因的克隆和中国分离株的遗传变异分析

应用RT-PCR的方法从某兔场病死兔肝脏组织中分离到RHDV,命名YM株。克隆出衣壳蛋白VP60并测序,测序结果显示VP60全长1 740 bp,编码579个氨基酸。从Gen Bank下载包括EBHSV、RCV、RHDV共45条序列,运用生物信息学软件分析,构建系统进化树和氨基酸同源性比较,世界不同地区RHDV分离株氨基酸保守性较高,可达94.1%~99.7%,EBHSV与RHDV氨基酸同源性约为75%,而RCV与RHDV的同源性90%。系统进化树分析显示,所选的RHDV可分为两个基因群,一组是包括WX-84的经典RHDV群,另一组是抗原变异RHDVa群,包括了除WX/84其余所有的中国分离株。总的来说RHDVa已经替代经典的RHDV在中国流行。     

一株鹅副粘病毒分离株的增殖最佳条件及其致病性研究

为了探讨鹅副粘病毒在鸡胚中增殖的最佳条件及其致病性,将不同血凝滴度的鹅副粘病毒分别接种于9～11日龄鸡胚尿囊腔,收获孵化36、48、60、72和84 h的鸡胚尿囊液,测定血凝滴度。结果表明将血凝价为1∶64的鹅副粘病毒稀释50倍后,接种9日龄鸡胚,37℃培养48～72 h获得的尿囊液血凝价可达1∶256～1∶512,平均尿囊液量可达9.4 mL/胚。动物试验表明增殖获得的鸡胚尿囊液具有较强的致病性,将该尿囊液接种10日龄鸡胚和颈部皮下注射21日龄非免疫雏鹅,结果接种后鸡胚于30～48 h全部死亡。雏鹅平均死亡时间为62.6 h。特征性剖检病变为脾脏肿大,有灰白色坏死点;胰脏出血,有灰白色坏死点;肠道出血,溃疡;病料分离培养的病毒液HA价高达28,能凝集鸡红细胞,并出现解凝现象。     

兔出血症病毒感染机体后炎性因子的检测分析

兔出血症病毒(RHDV)感染成年兔可以诱导兔体内产生强烈的炎性反应,是病毒感染后急性死亡的重要原因之一。为揭示病毒感染机体后体内重要炎性因子的表达情况,采用荧光定量PCR方法检测RHDV感染后6、12、24、30、36 h兔外周血、肝脏和脾脏内病毒增殖情况以及IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ炎性因子的表达情况。结果表明,兔出血症病毒拷贝数在外周血、肝脏和脾脏内随着感染时间的变化呈快速上升的趋势。外周血、肝脏和脾脏在病毒感染中,促炎性因子IL-6和TNF-α表达水平都明显上调。肝脏促炎性因子IL-6在30 h左右达到最大值,而在外周血和脾脏中则持续上调。抑炎因子IL-10随着炎性因子的上调也随之上升,但其表达水平只有较低程度的上调。IFN-γ相对表达水平在肝脏和脾脏有短暂的上调,在外周血中则持续下调。     

一例新西兰仔兔魏氏梭菌病诊断及防治措施

采用剖检和革兰氏染色方法对病死兔进行诊断后,确诊为仔兔魏氏梭菌病。在采取对兔舍及周围设施消毒,将病兔隔离治疗,未感染兔群接种魏氏梭菌灭活苗以及改善养殖环境等防治措施后,发病兔场的病情得到有效缓解和遏制。     

一株山羊源肠炎沙门氏菌对小鼠的致病性研究

[目的]探讨山羊源肠炎沙门氏菌(swun3816)对小鼠的致病性。[方法]从四川省某山羊养殖场腹泻粪便中分离出1株肠炎沙门氏菌,采用灌胃途径测定swun3816对BALB/c小鼠的半数致死量,根据毒力测定结果选择合适的剂量,建立swun3816感染小鼠模型,并于感染后6、12、24、48、72、96 h随机选择3只小鼠进行剖检,观察其大体病变,同时采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及肠道等器官,制备石蜡切片,观察其病理组织学变化。[结果]经灌胃途径接种102~108CFU/m L swun3816均可致小鼠的不同程度发病和死亡,LD50为155.6 CFU/只;用5×10~3CFU/只剂量给小鼠灌胃,建立了swun3816小鼠模型,感染小鼠最初出现精神沉郁、食欲减退和眼部浆液性渗出物等症状,感染后8.5 h开始出现死亡,第6天出现死亡高峰,剖检可见肺脏淤血和出血斑,脾脏淤血肿大,肝脏表面有大小不一的不规则灰白色坏死灶;肠液分泌增多呈黄色,小肠黏膜出血,肠壁变薄。病理组织学观察显示,肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、心脏出现变性、坏死和炎性细胞浸润等病变,十二指肠、空肠和回肠绒毛断裂脱落;盲肠、结肠、直肠在整个试验期间未见明显病变。[结论]山羊源肠炎沙门氏菌swun3816能引起小鼠全身性感染,具有很强的致病力。     

禽腺病毒4型感染的诊断与防制

2015年8月,河南新郑某鸡场30日龄肉鸡突然出现死亡。病死鸡心包内存在大量积液,肝脏充血、肿大。PCR检测禽腺病毒4型核酸,呈现阳性,结合发病情况和剖检病变,诊断为禽腺病毒4型感染。然后对该鸡场采取了综合防制措施,取得了较好的效果。