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采集新疆焉耆地区的老果园的苹果树枝条、叶片和韧皮部,利用自行设计的方法提取总RNA,根据GenBank中的X99487序列设计引物,利用RT-PCR技术扩增出苹果凹果类病毒(ADFVd)特异条带,通过回收克隆测序,结果表明,获得的7条序列,有5条同源性很高,均在98%以上,另外2条的同源性只有85%左右,这7条序列均已在GenBank中登录(登录号:EU031497_EU031503)。在此基础上利用插入ADFVd目的DNA的质粒为模板,成功合成了地高辛标记的cDNA探针,该探针能很好地用于ADFVd的检测。同时利用原位RT-PCR技术,做了进一步检测,证明苹果叶片中有苹果凹果类病毒存在,主要分布在叶肉细胞的细胞核中。 相似文献
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为了避免选择标记基因的使用对环境及植物体的生长发育带来的不利影响,消除人们对转基因植物中选择标记基因的安全性顾虑,培育无选择标记的转基因植物目前已成为植物基因工程研究的热点.现主要综述几种剔除选择标记基因方法在转基因植物中的研究进展. 相似文献
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分子标记在桃上的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
遗传标记有形态标记、细胞标记、生化标记和分子标记等几种方法。分子标记是随着分子生物学的发展新近形成的遗传标记方法 ,能从生物体的遗传物质 (DNA)去揭示生物体的遗传本质。有关分子标记应用的原理及其在果树上的应用已有文献综述[1~ 2 ] 。本文根据笔者对 2 0 3份桃类植物的分子标记研究和国内外有关桃分子标记方面的研究报道 ,对分子标记在桃上的应用作一简要介绍。1 分子标记技术在桃种质资源研究上的应用1 1 桃属种的系统发育和分类 笔者采用RAPD技术 ,用从 2 0 0多个随机引物筛选的 2 2个引物 ,对桃属主要种的DNA进… 相似文献
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含有ps-2雄性不育基因的番茄材料可通过自交获得100%的雄性不育后代,从而方便地应用于番茄杂交制种。以优良的加工番茄品系92155为父本,以来自保加利亚含有ps-2基因的不育材料CMC1ps2为母本,构建了123个F2代分离群体,育性表型分离比例完全符合孟德尔遗传规律,为隐性单基因。根据番茄形态和分子标记整合遗传连锁图谱,选取相应的SSR、RFLP及COS标记,分别筛选了5对SSR引物、13对由RFLP探针序列转化来的CAPS引物及1对COSⅡ引物。经连锁遗传分析,获得了与ps-2基因紧密连锁的1个SSR标记(SSR450)和1个CAPS标记(命名为TG123),它们与ps-2基因的连锁遗传距离分别是4.9cM和11.6cM,位于该基因两侧,均为共显性标记。这两个标记的获得可直接用于标记辅助育种和杂种纯度鉴定,加速番茄雄性不育的转育与利用。 相似文献
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梨叶片中苹果褪绿叶斑病毒的引物原位标记检测 总被引:1,自引:0,他引:1
选用带苹果褪绿叶斑病毒的香梨叶片,制备成适合进行原位RT-PCR的石蜡切片。设计特异引物,利用引物原位标记技术对切片组织中的病毒进行了检测研究,结果表明,PRINS-FITC染色法和PRINS-Rhodamine染色法均能获得良好的检测效果,有病毒部位分别显示绿色荧光和红色荧光,而且荧光出现的位置与原位RT-PCR检测的结果一致。由此证明引物原位标记技术可用于果树病毒的原位检测。 相似文献
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辣椒细胞质雄性不育系和保持系SSH-cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以辣椒细胞质雄性不育系A1、A5为驱动方(driver),以其相应的保持系B1、B5为测验方(tester),利用抑制差减杂交技术构建了1个辣椒细胞质雄性不育保持系表达基因的正向差减cDNA文库。从差减文库中筛选到189个阳性单克隆,经高密度点阵膜杂交筛选和测序分析,共获得了42条表达序列标签(ESTs)。BLAST比对分析后,得到了35条有比对结果的序列,其中包括26条已知功能基因序列和9条未知功能基因序列,已知基因功能多与基础物质代谢、胁迫应答、信号转导等方面有关;有7条ESTs没有比对结果,可能代表一些新基因。 相似文献
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AIM: To detect Duchenne muscular dystrophy (DMD) genetic deletion/duplication from the peripheral blood and amniotic fluid in the patients of DMD/Becker muscular dystrophy (BMD) by using multiple ligation probe amplification(MLPA) and fluorescent in situ hybridization(FISH), and to analyze the predictive value of these two techniques in prenatal diagnosis of DMD/BMD. METHODS: Five patients and 15 of their female relatives from 3 DMD/BMD families were selected and MLPA analysis was conducted. Deletions/duplication regions were used as directions for producing FISH probes labeling from BAC clones, with the X chromosomal centromere probe as control. The results of MLPA and FISH in detecting DMD/BMD patients and carriers of the peripheral blood and amniotic fluid were compared. RESULTS: The MLPA and FISH results of peripheral blood were fully accordant. Discordant results were found in 2 out of 3 amniotic fluid samples, where the FISH results were certified correct with the follow up investigations. CONCLUSION: Both MLPA and FISH are correct in detecting DMD deletion/duplication from blood samples, while more accurate results would be given by combination of FISH test. 相似文献
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AIM: To explore the possibility that proteasome is involved in nicastrin (NCT) degradation and NCT is ubiquitinated before degradation. METHODS: Following the generation of NCT stable cell lines, the methods of Western blotting, pulse-chase metabolic labeling technique, double immunofluorescent staining, combined with proteasomal inhibition were used to investigate the NCT expression in NCT stable cell line. RESULTS: Treatment of the cells with proteasomal inhibitors significantly increased both endogenous NCT (produced by the cell itself) and exogenous NCT (produced by the gene transfection) in SH-SY5Y cells. The effect of specific proteasomal inhibitor lactacystin on NCT expression was in time- and dose-dependent manners. Pulse-chase metabolic labeling experiment showed that the turnover of newly-synthesized radio-labeled nicastrin protein was blocked by lactacystin. The results of double immunofluorescent staining showed that NCT and ubiquitin were co-located in the cells. CONCLUSION: The proteasome is involved in the degradation of NCT in neuronal cells, and NCT is ubiquitinated before degradation. 相似文献
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辣椒Me3基因介导抗根结线虫相关基因的SSH分析 总被引:4,自引:3,他引:1
以辣椒(Capsicum annuum L.)双单倍体HDA149为试验材料,接种南方根结线虫(Meloidogyne incognita)12、24、36 h的根尖材料作为测验方(Tester),相应的未接种根尖材料作为驱动方(Driver),构建一个南方根结线虫诱导Me3 基因表达早期的抑制消减杂交cDNA文库,通过高密度点阵膜杂交差异筛选,获得了309条表达序列标签(EST)。通过测序,除去重复序列共得到259条EST序列,在GenBank上进行BLAST分析,30个EST片段未发现同源性基因,229个为具有同源性的已知基因,其中71个为功能未知的基因。在显微观察和抗性相关EST表达谱分析的基础上,推测在Me3基因介导的不亲和互作中,编码NBS-LRR结构的抗病基因参与了寄主对根结线虫的识别,激发了过敏性坏死反应的信号基因, 同时多种抗性相关的转录因子基因表达, 使以代谢为基础的防御反应和保护机制发挥抗线虫作用。 相似文献
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辣椒N 基因介导抗根结线虫作用早期表达基因的抑制性消减杂交SSH分析 总被引:4,自引:0,他引:4
以含N 基因的辣椒(Capsicum annuum L. ) 为试验材料, 接种南方根结线虫(Meloidogyne incognita) 12、24、36 h的根尖材料作为测验方( tester) , 相应的未接种根尖材料作为驱动方( driver) , 构建一个南方根结线虫诱导N 基因表达早期的正向抑制消减杂交cDNA文库, 并结合文库高密度点阵膜杂交差异筛选, 获得了237条表达序列标签( EST) 。在GenBank上进行BLASTn与BLASTx分析, 得到148条功能已知的EST序列, 获得已知的上调抗性相关EST 68个。分离出了具有NBS2LRR结构的抗线虫蛋白和类LRR抗性蛋白的基因, 防御作用相关的类萌芽素(GLP) 、HSR203J 蛋白、蜜腺蛋白、蛇毒素肽等基因,抗性相关的WRKY、ERFBP等转录因子基因, 以及G蛋白、142323蛋白等多种信号蛋白基因。通过GeneOntology分析, N 基因介导的早期表达抗病基因涉及病原物的识别、抗性信号传导、过敏性坏死、系统获得性抗性以及植物细胞保护机制等多个方面, 并有许多功能未知的基因有待于进一步的研究。 相似文献