蒲公英提取物对佐剂性关节炎大鼠的保护作用及机制

采用弗氏完全佐剂(FCA)建立大鼠佐剂性关节炎模型,设空白组、模型组、阳性组和蒲公英提取物高、中、低剂量组(10.0,5.0,2.5g/kg),分别对大鼠足趾肿胀、体质量、脾脏指数、胸腺指数和血清中TNF-α、IL-1β、PGE_2、OPG、RANKL的含量进行测定并计算RANKL/OPG,HE染色观察大鼠踝关节软骨组织及滑膜组织的病理变化。结果显示:蒲公英提取物高、中、低剂量组均不同程度降低佐剂性关节炎大鼠原发性和继发性足趾肿胀,增加体质量,下调脾脏指数和胸腺指数,抑制血清中TNF-α、IL-1β、PGE_2、RANKL的分泌,促进OPG的分泌,抑制大鼠踝关节炎性细胞浸润和滑膜增生。结果表明:蒲公英提取物对大鼠佐剂性关节炎具有一定的保护作用,为临床应用提供有效的依据。     

牛磺鹅去氧胆酸的抗炎作用机理

运用大鼠佐剂性关节炎(AA)模型,牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)按0.2g/kg剂量,经灌胃给药后,测量致炎前和致炎后不同时期大鼠足跖肿胀度,并采用荧光分光光度法和ELISA双抗夹心法分别测定AA大鼠外周血中NO、LTB4含量。结果:TCDCA连续给药21d,可显著抑制AA大鼠不同时期的足跖肿胀,显著降低血清中NO水平;TCDCA连续给药4d,可显著降低AA大鼠外周血中LTB4含量。结论:TCDCA的抗炎作用与其抑制LTB4和NO产生有关。     

TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE_2分泌的影响

[目的]进一步探讨牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)在抗炎免疫方面的潜在调节作用。[方法]以AA大鼠成纤维样滑膜细胞作为研究对象,采用ELISA方法检测TCDCA和IL-1β作用下AA大鼠成纤维样滑膜细胞上清液中PGE_2的含量,分析TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE_2分泌情况的影响。[结果]TCDCA能够对IL-1β刺激下AA大鼠纤维样滑膜细胞PGE_2的分泌产生下调作用(P0.05)。[结论]TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE_2的分泌具有抑制作用,为TCDCA在兽医临床应用提供依据。     

老鹳草膏对大鼠佐剂性关节炎疗效观察及血清IL-1β和TNF-α表达的影响

为了观察老鹳草膏对大鼠佐剂性关节炎(AA)的治疗效果,测定其对血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,探讨老鹳草对类风湿性关节炎(RA)的作用机理,试验采用SD大鼠60只,随机分为4组,即空白对照组、试验对照组、老鹳草组和甲氨喋呤(MTX)组,模型组尾根部皮内注射完全弗氏佐剂(CFA),定时测定关节肿胀度,第10天开始药物干预试验,第45天乙醚麻醉后眼底采血,采用ELISA方法检测血清中各细胞因子的浓度。结果表明:老鹳草可降低AA大鼠血清高浓度的IL-1β、TNF-α水平,与试验对照组相比差异极显著(P0.01),与MTX组相比差异显著(P0.05),有助于恢复机体免疫稳定状态。说明老鹳草能降低大鼠足关节肿胀度,可在免疫水平进行保护性调节,提示对治疗人RA有一定作用。     

理中汤和白头翁汤对寒湿和湿热泄泻大鼠相关指标的影响

为研究理中汤和白头翁汤对寒湿和湿热泄泻大鼠的影响，采用番泻叶+寒湿、湿热环境建立寒湿泄泻和湿热泄泻大鼠模型，给予理中汤和白头翁汤进行治疗，检测大鼠腹泻指数，血常规，胸腺、脾脏指数，观察结肠、回肠病理组织变化。采用ELISA检测血清中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。采用生化试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)与丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量。结果显示，理中汤和白头翁汤可分别改善寒湿和湿热泄泻大鼠腹泻指数，血常规，胸腺、脾脏指数，改善结肠、回肠病理组织损伤，降低血清中的IL-6、IL-1β和TNF-α含量，提高血清中SOD的含量，降低MDA的含量。表明理中汤和白头翁汤用于治疗寒湿和湿热泄泻具有显著效果，而理中汤对湿热泄泻、白头翁汤对寒湿泄泻无效果，提示临床应辨证用药。     

花艽-6抗炎作用及其机理研究

本试验旨在研究和探讨抗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)药物花艽-6的抗炎作用及其抗炎机理。采用二甲苯致小鼠耳肿胀法、醋酸致小鼠毛细血管通透性增高法、甲醛和蛋清致小鼠足跖肿胀法,以及棉球致小鼠肉芽组织增生法分别研究了该药物的抗急性、亚急性和慢性炎症的作用。通过复制佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型研究花艽-6对其血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响。花艽-6对小鼠二甲苯所致的耳肿胀、醋酸所致的腹腔毛细血管通透性增高、甲醛和蛋清所致的足跖肿胀和棉花所致的肉芽组织增生均具有显著或极显著的抑制作用。花艽-6具有抗炎作用,可显著降低AA大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,对RA具有治疗作用。     

TCDCA对AA模型大鼠成纤维样滑膜细胞中三磷酸肌醇的影响

为了进一步探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型大鼠治疗作用的分子机制,以AA模型大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)为研究对象,采用酶联免疫吸附技术(enzyme linked immune sorbent assay,ELISA)检测了TCDCA对AA模型大鼠FLS中三磷酸肌醇(inositol trisphosphate,IP3)含量的影响。研究结果显示,与空白对照组相比较,TCDCA作用15 min和60 min时AA模型大鼠FLS中IP3的含量显著升高(P0.05),而当TCDCA作用30 min时AA模型大鼠FLS中IP3的含量极显著升高(P0.01)。由此可知,TCDCA能够提高AA模型大鼠FLS中IP3的含量。     

臭氧与药物治疗对兔骨性关节炎血清中IL-1β、TNF-α含量的影响

目的通过观察比较臭氧与药物治疗兔骨性关节炎血清中IL-1β、TNF-α水平的变化,探讨比较臭氧及药物治疗骨性关节炎的作用效果。方法新西兰兔80只,采用II型胶原蛋白酶关节腔内注射法诱导骨性关节炎模型。随机分为正常组、模型对照组、10ug/ml臭氧关节腔内注射组;20ug/ml臭氧关节腔内注射组;40ug/ml臭氧关节腔内注射组;低剂量药物灌胃组;中剂量药物灌胃组;高剂量药物灌胃组;每组10只。造模4周后进行臭氧干预,同时进行药物灌胃治疗,每周2次,共4周。末次注射及药物灌胃后4周抽取血液样本检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β含量。结果各治疗组及模型组的血清中TNF-α和IL-1β含量均高于正常组(p0.05);臭氧治疗组与模型组间的血清TNF-α和IL-1β含量无显著性差异(p0.05);药物灌胃治疗组与模型组间的血清TNF-α和IL-1β含量显著性差异(p0.05)。结论(1)骨性关节炎动物模型出现血清TNF-α和IL-1β含量升高,说明造模成功;(2)臭氧无抑制已升高的血清TNF-α和IL-1β含量的作用;(3)药物灌胃治疗均能抑制已升高的血清TNF-α和IL-1β含量的作用。     

神蜂精对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用

研究神蜂精对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:60只SD雄性大鼠进行随机性分组,分为正常组、模型组、神蜂精高剂量组(1.0 mL/kg/d)、神蜂精中剂量组(0.5 mL/kg/d)、神蜂精低剂量组(0.25 mL/kg/d)、阳性组(复方醋酸地塞米松乳膏给药组,1.0 g/kg/d),每组10只。除正常组外,其余组大鼠右后足跖皮下注射完全弗氏佐剂诱导产生佐剂性关节炎。造模14 d后连续给药28 d。测量注射足足爪肿胀程度和免疫器官重量,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-4(IL-4)和白介素-10(IL-10)的浓度。结果:(1)神蜂精治疗组均能显著降低大鼠右后足爪肿胀度(P<0.01);(2)神蜂精治疗组均能增加胸腺指数(P<0.05),降低脾脏指数(P<0.05);(3)神蜂精治疗组均能显著降低致炎性细胞因子TNF-α、IL-1β水平(P<0.01);(4)神蜂精高剂量组能显著增加抗炎性细胞因子IL-4、IL-10水平(P<0.01)。结论:神蜂精对AA大鼠关节炎症有一定的治疗作用,其可能机制是:保护胸腺和脾脏免疫器官,提高机体抗炎免疫能力;抑制致炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的生成,促进抗炎性细胞因子IL-4和IL-10的产生,产生免疫调节作用。     

牛磺鹅去氧胆酸对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞脂皮素-1基因表达的影响

观察牛磺鹅去氧胆酸 (taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型成纤维样滑膜(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞脂皮素-1(lipocortin 1,LC-1)基因表达的影响,并探讨TCDCA对AA大鼠FLS的作用机制。 制备AA大鼠模型,采用组织块培养法分离培养AA大鼠FLS,应用荧光定量RT-PCR技术检测TCDCA对AA大鼠FLS细胞LC-1 mRNA表达的影响。与模型组相比,TCDCA作用组AA大鼠FLS细胞LC-1 mRNA的表达显著高于模型组(P<0.05)。说明TCDCA能显著促进AA大鼠FLS细胞LC-1 mRNA的表达。     

増液承气汤对热结肠道型气分证大鼠肠道组织结构、血清IL-1β、IL-6及TNF-α含量的影响

为了探讨增液承气汤对热结肠道型气分证大鼠肠道组织结构及血清炎性细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α含量的影响,给热结肠道型气分证模型大鼠预防性或治疗性灌服增液承气汤,测定大鼠体温、体重、肠道黏膜组织结构变化和血清相关炎性细胞因子含量。结果表明:热结肠道型气分证大鼠肠道屏障功能受损,肠道黏膜脱落,部分绒毛断裂,炎性细胞浸润,上皮内淋巴细胞(IEL)数量增多,杯状细胞(GC)数量减少,且血清中炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α均会出现显著升高(P0.05)。预防性给予增液承气汤后,可有效减轻肠道黏膜脱落,绒毛断裂和炎性细胞浸润等损伤,并能有效降低大鼠血清中IL-6和TNF-α含量(P0.05);治疗性给予增液承气汤能有效地降低大鼠体温,使大鼠肠道组织结构基本恢复正常,恢复肠道黏膜免疫屏障功能,可有效降低大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量。增液承气汤可通过降低体温、维护肠道组织结构正常,降低IEL及升高GC细胞数量,抑制血清炎性细胞因子的分泌而起到良好的防治作用。     

TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE2分泌的影响

[目的] 进一步探讨牛磺鹅去氧胆酸（taurochenodeoxycholic acid,TCDCA）在抗炎免疫方面的潜在调节作用。[方法] 以AA大鼠成纤维样滑膜细胞作为研究对象,采用ELISA方法检测TCDCA和IL-1β作用下AA大鼠成纤维样滑膜细胞上清液中PGE₂的含量,分析TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE₂分泌情况的影响。[结果] TCDCA能够对IL-1β刺激下AA大鼠纤维样滑膜细胞PGE₂的分泌产生下调作用（P<0.05）。[结论] TCDCA对IL-1β刺激下AA大鼠成纤维样滑膜细胞中PGE₂的分泌具有抑制作用,为TCDCA在兽医临床应用提供依据。     

牛磺鹅去氧胆酸对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞ICAM-1表达的影响

为了研究牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对佐剂性关节炎模型大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)中细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响,采用qPCR与ELISA法检测了FLS中ICAM-1的表达量,结果表明,1×10~(-6)~1×10~(-4) mol/L TCDCA在基因与蛋白水平均能够显著或极显著抑制IL-1β刺激下FLS中ICAM-1的表达(P<0.05或P<0.01),且该抑制作用可被糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)阻断剂米非司酮(RU486)拮抗,提示TCDCA对佐剂性关节炎的治疗作用与抑制GR活性进而抑制ICAM-1表达有关。     

牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞EP_2受体mRNA表达的影响

为探讨TCDCA对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)EP2受体mRNA表达的影响,采用Elisa法测定AA模型大鼠FLS内cAMP的含量,以确定TCDCA作用于FLS的最佳药物浓度;采用RT-PCR法测定最佳TCDCA药物浓度对FLS中EP2受体mRNA的表达量。结果表明,PGE2刺激FLS后,FLS内cAMP的浓度和EP2受体mRNA的表达量均显著升高(P0.05),而TCDCA(10-4~10-7 mol/L)能够显著降低PGE2(10-6mol/L)刺激的FLS内cAMP浓度(P0.05),且存在剂量依赖性;TCDCA(10-5~10-7 mol/L)还能够显著降低EP2受体mRNA的表达量(P0.05)。这表明TCDCA对PGE2-EP受体-cAMP信号通路产生影响,是其发挥抗关节炎作用的重要分子机制之一。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-1β、IL-8和TNF-α mRNA表达量的影响

探讨中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞IL-1β、TNF-α、IL-8mRNA表达量的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC BLβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100、75、50、0μg/mL中药复方多糖共培养24h,收集细胞,采用real-time PCR方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达。结果显示,与对照组相比,不同剂量中药复方多糖均能提高不同MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达量(P0.05)。中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达量最高,中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达量最高。中药复方多糖能不同程度的促进各MHC B-LβⅡ基因型鸡IL-1β、TNF-α、IL-8基因mRNA的表达,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量略有不同。     

硒对雏鸡空肠和回肠IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达的影响

通过复制缺硒雏鸡模型,对雏鸡空肠和回肠中主要细胞因子的变化进行不同时间点的检测,为硒调控肠黏膜免疫的机制研究奠定基础。选取120只1日龄的SPF雏鸡,随机分为对照组和试验组2组。对照组雏鸡饲喂全价饲料,试验组雏鸡饲喂缺硒饲料。分别在试验期7,14,21,28d对雏鸡进行剖杀并取其空肠与回肠,利用实时荧光定量PCR法检测IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平。结果显示,试验组与对照组相比,缺硒雏鸡空肠在试验期14,21d时,IL-1β、IL-6和TNF-α细胞因子的表达量均升高,且差异极显著(P0.01);28d时,除IL-1β的表达量降低(P0.05),其他细胞因子的相对表达量升高(P0.01)。试验组与对照组相比,缺硒雏鸡回肠在试验期14,21d时,IL-1β、IL-6和TNF-α细胞因子表达量均升高(P0.01);在28d时,IL-6和TNF-α的相对表达量升高(P0.05)。结果表明,缺硒能够上调肠黏膜炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的相对表达量,这可能与硒缺乏导致雏鸡肠黏膜中氧自由基含量升高有关。     

大鼠急性冷应激模型的建立

通过分析冷刺激对大鼠血清中细胞因子、皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量以及外周血淋巴细胞中热休克蛋白70(Hsp70)表达量的影响,构建大鼠急性冷应激模型,旨在为其相关研究提供研究基础。本试验急性冷刺激时间为12h。利用ELISA方法检测各组大鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、CORT、ACTH的含量;采用Western blot和qRT-PCR方法检测各组大鼠外周血淋巴细胞中HSP70及mRNA表达量。结果表明,与对照组相比,急性冷刺激组大鼠血清中IL-2和ACTH的含量显著升高(P0.05),IL-4、IL-6、TNF-α和CORT的含量极显著升高(P0.01),IL-10无显著变化(P0.05);外周血淋巴细胞内HSP70及其mRNA表达量呈显著升高水平(P0.05)。成功构建大鼠急性冷应激模型。     

黄芩苷黄芩素小檗碱对LLC-PK1细胞炎症模型中TNF-α IL-1β及IL-6表达的影响

研究中药黄芩苷、黄芩素、小檗碱对细菌脂多糖(LPS)诱导的猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)中肿瘤坏死因子-α(TNG-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。用噻唑蓝比色法(MTT法)筛选LPS、黄芩苷、黄芩素和小檗碱对细胞作用的最佳浓度,用RT-PCR检测TNF-α、IL-1βmRNA表达,以确定细胞炎症模型是否建立成功;炎症模型建立后,用最佳浓度的黄芩苷、黄芩素和小檗碱分别作用细胞24h,用qPCR检测TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA的表达量。结果LPS刺激组细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达量极显著高于正常对照组(P0.01),黄芩苷、黄芩素和小檗碱作用组细胞TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA表达量比LPS刺激组显著降低(P0.05),与对照组无显著差异(P0.05)。上述结果表明,黄芩苷、黄芩素和小檗碱通过抑制炎症细胞TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA的表达,从而发挥抗炎作用。     

复方中药加味四物汤对LPS诱导RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响

目的:研究复方中药加味四物汤的抗炎效果。方法:选择小鼠RAW264.7细胞为模型细胞,采用噻唑蓝法(MTT法)检测加味四物汤(mSWD)对该细胞的细胞毒性。用脂多糖(LPS)刺激小鼠RAW264.7细胞,使其活化,建立体外炎症模型,并通过ELISA和RT-PCR方法检测加味四物汤在50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL不同浓度时对体外炎症模型分泌TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性细胞因子的影响。结果:加味四物汤浓度在0～320μg/mL范围内对小鼠RAW264.7细胞无毒副作用;浓度为50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL时对炎症模型分泌细胞因子TNF-α和IL-6有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;而浓度为200μg/mL时,对IL-1β分泌有抑制作用。结论:LPS诱导小鼠RAW264.7细胞能使TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白含量和mRNA表达量增加,加味四物汤可抑制该生物反应,发挥间接抗炎作用。     

黄芪总黄酮对大鼠佐剂性关节炎病理损伤的影响

采用弗氏完全佐剂建立大鼠佐剂性关节炎(AA)模型,研究黄芪总黄酮(TFA)对AA大鼠关节组织病理损伤的保护作用。取36只大鼠随机分为6组,即空白组,模型组,阳性组,黄芪总黄酮高、中、低剂量组,除空白组外,其余各组大鼠右后足趾皮内注射含弗氏完全佐剂的卡介苗(10mg/mL)0.1mL,建立AA模型。次日,各组灌胃相应药物,连续28d,同时测定大鼠足趾肿胀度和关节炎指数;第29天将大鼠处死,HE染色观察大鼠踝关节滑膜组织及软骨组织的病理组织学变化;免疫组化法观察大鼠滑膜和软骨细胞NF-κB p65的表达。结果表明,TFA能明显降低大鼠原发性足趾肿胀度及多发性关节炎指数;TFA能减轻AA大鼠踝关节炎性细胞浸润及滑膜增生,减少血管翳生成;TFA能抑制NF-κB p65的高表达。说明TFA对AA大鼠的病理损伤有潜在的保护作用。