核酸杂交技术在植物病毒诊断、鉴定与分类中的应用

用带标记的互补脱氧核糖核酸(cDNA)作探针的核酸杂交技术,是70年代发展起来的新技术,近年已广泛应用于生命科学的众多学科中。由于它具有特异性强、灵敏度高、适用面广及快速简便等特点,近十年来已应用于植物病毒及类病毒的诊断、鉴定与分类中。国外,很多植物病毒及类病毒已制备了     

马铃薯Y病毒复制酶基因不同位置cDNA区段介导对PVY的不同抗性

为探究靶序列位置对RNA介导的病毒抗性产生的影响,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)复制酶基因(nuclear inclusion b,NIb)不同位置的cDNA区段,反向插入双元载体pROKII中,构建了发夹RNA(hairpin RNA,hpR-NA)结构的植物表达载体。将构建的植物表达载体采用冻融法转入农杆菌LBA4404,叶盘法转化烟草NC89,获得转基因植株。攻毒试验表明:PVYNIb基因不同位置cDNA区段介导的对PVY的抗性存在显著差异;3′端1/2处和中间位置的序列可介导高水平的病毒抗性,抗性植株的比例在50%以上,而5′端、5′端1/2处和3′端的序列介导的抗性效率较低,抗性植株的比例仅为10%~30%。Northern杂交显示:抗病植株中RNA的积累量明显低于同类型的感病植株,抗性与RNA积累量呈负相关;抗病转基因植株中有siRNA存在,表明病毒抗性是由RNA介导的。     

从海南省杂草胜红蓟和假马鞭上检测到粉虱传双生病毒

 利用三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)及PCR检测的方法对采自海南的胜红蓟(Ageratum conyzoides)和假马鞭(Stachytarphetajamaicensis)的5个病样进行了检测,表明均为粉虱传双生病毒。PCR扩增产物克隆后进行序列测定,结果表明存在2类双生病毒,其中样品Hn2存在2类病毒的复合侵染。这是在海南首次报道存在有粉虱传双生病毒。     

ICTV最新十五级分类阶元病毒分类系统中的植物病毒

 本文报告了国际病毒分类委员会(ICTV)于2020年3月批准的最新2019病毒分类系统,全面采用了十五级分类阶元,分别为:域、亚域、界、亚界、门、亚门、纲、亚纲、目、亚目、科、亚科、属、亚属、种。寄主为植物的病毒包括了植物病毒和亚病毒感染因子(类病毒、卫星病毒和卫星核酸)。植物病毒共有1 608种,涉及2个域、3个界、8个门、13个纲、16个目、31个科、8个亚科、132个属、3个亚属。亚病毒感染因子包括33种类病毒,涉及2个科、8个属;6种卫星病毒,涉及4个属;142种卫星核酸,涉及2个科、2个亚科和13个属。     

柑桔类病毒病害的检测技术

柑桔类病毒病害的检测技术陈国庆（浙江省科学院柑桔研究所黄岩３１７４００）类病毒（ｖｉｒｏｉｄ）是一种不同于真菌、细菌和病毒等的植物病原因子，可引起许多植物发生病害。柑桔裂皮病和木质陷孔病都是由类病毒或类病毒复合物引起，可导致树势衰退，植株矮化，树冠生...     

不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响

 灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义。本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素。通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体。分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针。比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响。结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDP-Star为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05 pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍。利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行。     

组织培养技术在植物病毒和类病毒研究中的应用

组织培养技术在植物病毒和类病毒研究中的应用陈纯贤，万蜀渊（华中农业大学柑桔研究所武汉４３００７０）植物病毒和类病毒不能在人工培养基上生长，但可以在离体培养的寄主组织或细胞里繁殖。利用组织培养技术为研究病毒、类病毒等植物病原与寄主细胞的关系，建立离体鉴...     

马铃薯检疫性病毒的分子生物学检测技术进展

综述了包括RT-PCR、NASH、dsRNA分析、PCR微量板杂交、NASBA、DIAPOPS、LCR等在内的分子生物学技术在马铃薯病毒检疫中的应用.为快速、准确地定性或定量检测马铃薯检疫性病毒,检测时应根据不同的实验条件、检测目的和检疫要求采用相应的方法.     

生物技术与植物保护

本文论述生物技术对植保领域的影响,内容涉及脱毒技术,植物病原诊断方法(ELISA和核酸杂交)、抗除草剂转基因植物、转基因抗虫性和转基因抗病毒性的培育。     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测豆类种传病毒的研究

本文介绍使用微量板酶联免疫吸附法(ELISA)检测TMV(杆状)、SMV(线状)、CMV(球状)、AMV(杆菌状多粒体)四种不同形态、不同分类组群的病毒。此法非常灵敏,能够检测病毒提纯液的最低浓度为7.6～10亳微克/毫升,也能检出稀释1563～10240倍病叶粗澄清液中的病毒,灵敏度比琼脂双扩散法高1000倍以上。 ELISA可以直接检出单粒种子中的病毒,而且可以分别检出单粒种子不同部位如大豆的种皮、种胚、胚乳及胚根中的病毒存在。该法适用于检测大量标样,对植物检疫来说,这是一个很好的方法。     

同时检测樱桃绿环斑驳病毒和桃潜隐花叶类病毒的二聚cRNA探针制备和应用

<正>樱桃绿环斑驳病毒(Cherry green ring mottle virus,CGRMV)和桃潜隐花叶类病毒(Peach latent mosaic viroid,PLMVd)是桃树上的主要病原。在检测中发现,我国桃树病毒多以CGRMV与PLMVd复合侵染为主,侵染率较高。通过分子克隆,串联几个病毒核酸序列合成多聚探针,能同时检测多个病毒和类病毒(Torchetti et al.,2012)。目前尚无关于CGRMV单一探针和同时检测CGRMV与PLMVd二聚探针的报道。本研究通过设计带酶切位点的特异引物制备二聚cRNA探针,以期建立适用于田间果树样品中CGRMV和PLMVd的快速检测技术,为桃树病毒病害的防治提供理论基础。     

ELISA检测植物病毒过程中减少非特异反应的有效方法—酶联板处理

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种快速、准确、经济、简便的免疫学检测手段,并具有作大规模检测和灵敏度高的优点。但用于植物病毒粗汁液检测,往往存在着病健样品的吸收值之比(P/N)太低,阴阳性反应难以判别的问题。酶联板的处理能消除或大大减缓此问題。在本实验中,我们用氢氧化钠/乙醇液处理酶联板,效果十分显著。在对不同组10种植物病毒粗汁液的检测中,使用处理板并设未处理板作对照,结果前者无一例外的大大提高了病毒特异性吸收值及P/N值,从而使ELISA检测植物病毒粗汁液的特异性吸收值提高0.8～5倍,灵敏度提高10～1000倍。     

立枯丝核菌质粒DNA的分离及鉴定

30余种植物病原真菌体内的病毒或类病毒粒子已有报道。有的还进行了病毒对真菌致病力影响的研究。一些真菌衰退病有人报道过,但几乎没有报道植物病原真菌表现出退化型症状。Castanho和Butler认为,在立枯丝核菌常规移植过程中,从健壮分离体中获得的严重罹病分离体表现出一种衰退现象。这种衰退常与三个大小不同的双链RNA(ds RNA)之一些片断有关;在一     

用单克隆抗体检测病毒

繁殖与推广植物检疫签准的无毒种子、无性繁殖材料是防止病毒传播、控制水果、蔬菜和观赏作物的许多严重病毒病害的根本方法。几十年来,植物病毒学家已经用免疫化学技术来探测和分类植物病毒。自从1977年引用酶联免疫吸附测试(ELISA)于物植病毒的检测以来,血清学测定方法在植物检定中已广为应用。高质量抗血清的需求大增。在许多检定程序中血清学测定显得日趋重要。为提高血清学方法的灵敏度,血清的质量必须改进,避免非专化性反应出现。在植物病毒提纯过程中,某些植物材料总是附随于病毒,也作为抗原而刺激产生其专化性抗体反应。血清学测试越有效,每次测试需要的抗体量越少,寄主抗体的低含量也就显得越重要。许多在凝胶双扩散测试中能用的血清,除非先用健康植物汁液交互吸收过,否则不适合于做ELISA反应;某些情况下,即使是吸附收过的抗血清在ELISA反应中仍不能用。三十多种植物病毒的单克隆抗体(MCAs)已能制备了,在植物病毒的基础研究和应用研究中MCAs都有许多大用途。现在许多MCAs已应用于病毒检测和病毒间相互关系的研究。MCAs在研究根本性问题上也是有用的:如病毒怎样装配?为何病毒感染某种植物而不感染其它种植物?病毒怎样克服那结合到农作物中的抗性?在植物体中病毒是怎样运动的?在阐述病毒感染过程中的复杂生化反应时MCAs也是有用的。本文将集中谈谈用MCAs检测病毒和未来几十年病毒检测中MCAs将在哪些方面进行改进。     

用生物素标记外壳蛋白基因cDNA探针检测葡萄扇叶及马铃薯Y病毒

 以葡萄扇叶病毒(GFV)干u马铃薯Y病毒(PVY)外壳蛋白基因的重组质粒为模板,用聚合酶链式反膨技术(PCR)分别合成了长度为1.5kb和0.75kb的生物素标记双链cDNA探针,在斑点杂交反应中,探针的最适使用浓度为1/100,GFV探针检测GFV-RNA的灵敏度为10pg,检测提纯GFV的灵敏度为25pg,检测感病苋色藜的最大稀释倍数为10000倍;PVY探针检测PVY-RNA的灵敏度为30pg,检测提纯PVY灵敏度为500pg,感病烟草检测的最大稀释度为8000倍,阴性对照均无杂交信号出现。     

哈蜜瓜种子带细菌性果斑病菌检测技术的研究

哈蜜瓜细菌性果斑病是世界性的检疫对象之一,主要以种子带菌进行远距离传播,本文通过温室育苗、室内分离和PCR(聚合酶链式反应)技术对哈蜜瓜种子带菌情况和主要带菌部位进行了检验,结果表明:3种方法都可以对种子带菌情况进行检测,分离检测和PCR检测还可以确定种子的带菌部位,PCR技术具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等特点.另外检测结果也表明种子带菌以种皮为主,种仁的带菌量较少.     

植物病毒分子检测方法概述

植物病毒粒体主要由核酸和蛋白外壳构成,蛋白外壳由许多外壳蛋白(CP)组成. CP和核酸因病毒的不同而异,是检测、鉴定植物病毒的主要依据.广义的植物病毒分子检测方法包括蛋白质检测(或血清学试验)和核酸检测方法,本文分别介绍.     

辣椒轻斑驳病毒葫芦岛分离物RNA杂交检测体系的建立

辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)可引起辣椒叶片以及果实的花叶和畸形症状,造成相当的经济损失。为了建立辣椒轻斑驳病毒的高特异性和灵敏度的分子检测体系,采用非放射性的化合物地高辛(DIG)标记检测PMMoV正义链的RNA探针,建立了该病毒Dot blot杂交和Northern blot杂交检测体系,并通过RT-PCR法验证了杂交体系的检测特异性。结果表明,RNA探针对PMMoV具有很高的检测特异性和灵敏度,适用于病毒的早期检测以及相关分子研究。     

种传植物病毒及新检测技术

一、研究种传植物病毒的意义 较早以前,人们认为病毒的种传问题远不及真菌、细菌等病原的种传普遍和重要,在植物病毒病的流行过程中不是主要因素。但隧着植物病毒学和种子病理学发展,及各种检测技术的改进和提高,已报道的种子传带病毒数量,和由种子带毒的植物种类和数量越来越大(见表)。种子传毒逐渐引起了植病、