禽流感检测方法研究进展

无菌采集病料经处理后接种9-11日龄鸡胚，收取尿囊液测定血凝活性，若为阴性则应继续盲传2—3代。对具有血凝活性的尿囊液需先用新城疫(ND)抗血清做血凝抑制(HD试验，以排除ND感染。然后用免疫扩散等方法来检测特异性核心抗原——核糖蛋白(NP)或基质蛋白(MP)，再用血凝抑制试验     

H9N2流感病毒在鸡胚中繁殖规律及血凝活性的研究

为了研究H9N2流感病毒在鸡胚中的繁殖规律及其血凝活性,试验用H9N2河南分离毒株接种鸡胚,对收获的尿囊液进行10倍系列稀释,选取不同浓度尿囊液分别接种不同日龄鸡胚,测定不同日龄鸡胚接种病毒后尿囊液产量及其血凝效价,探讨影响毒株血凝活性的因素。结果表明:10日龄鸡胚接种1×10-5病毒时收获的尿囊液产量最多且血凝效价最高;筛选分析影响H9N2病毒血凝活性因素时发现,缓冲液的p H值为3.0~5.5时发生溶血,水浴温度为70~80℃时几乎完全丧失活性。     

鸽新城疫病毒在鸡胚中的生长规律

目前,国内用于ND免疫预防的主要措施是以鸡胚作为病毒繁殖的载体,收集尿囊液,经灭活制成不同佐剂的灭活疫苗。为了探索ND在鸡胚中的生长规律,笔者采用ND接种9日龄鸡胚,以HA检测不同时间的胚体、卵黄、尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中ND的血凝效价,从而掌握ND在鸡胚内的生长规律。1材料与方法1.1材料1.1.1鸡蛋来源于非疫区的非免疫区的非免疫鸡场。1.1.2鸽新城疫种毒种毒为自行分离,经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所鉴定确认为ND。1.1.3红细胞采自20周龄健康非免疫的伊沙蛋用公鸡,由本所提供。1.2方法1.2.1病毒的接种将种毒作1∶100稀释…     

鸡减蛋综合征病毒血凝特性和在鸭胚中繁殖规律的研究

EDS病毒CH—1分离株能凝集鸡、鸭和鹅等禽类的红细胞,但不能凝集兔、小白鼠和人O型血红细胞。该病毒的血凝特性对缓冲液种类和浓度无严格要求。可耐受56℃24小时,但80℃作用30分钟,则几乎完全丧失血凝活性。1.0％胰酶和0.5％β—巯基乙醇对病毒血凝活性无明显影响,用0.1～0.4％甲醛37℃作用24小时血凝活性无变化,而0.5～1.0％甲醛处理后,病毒血凝价下降4～7个滴度。病毒反复冻融6次对血凝特性无影响。EDS病毒接种10日龄鸭胚后24小时就可检测到病毒的血凝滴度(2~(3.2))、96～120小时病毒在鸭胚液中的血凝滴度达到高峰(HA>2~(14)),此时胚液量也最大。病毒在鸭胚尿囊液和尿囊膜中的血凝滴度最高,其次是羊水,胚体中血凝滴度最低。     

禽流感（AIV）的实验室检测方法

1 病原学检测 将病料以尿囊腔途径接种于9～11日龄的SPF鸡胚．收集死亡鸡胚尿囊液，将收获的鸡胚尿囊液进行血凝价检测，当血凝滴度达1：16以上时，确定病毒分离为阳性。若初次传代获得的尿囊液未检测到血凝性，需再盲传2代。若仍未检测到血凝性则认为病毒分离阴性。     

鸡传染性支气管炎和鸡新城疫混合感染的诊断

某养鸡场28~43日龄的肉鸡临床出现呼吸道症状,通过鸡胚接种、血凝及血凝抑制试验,进行实验室病毒分离鉴定,本病确诊为鸡传染性支气管炎(IB)和鸡新城疫(ND)混合感染。对混有IB病毒和ND病毒的鸡胚尿囊液进行酸处理,去除ND病毒,获得纯IB病毒。分离的传染性支气管炎毒株,体外和体内试验表明该传染性支气管炎病毒株对鸡新城疫病分离毒株的血凝性有强的干扰作用,对鸡新城疫的疫苗Lasota株干扰作用不明显。     

禽流感检测方法

将病料以尿囊腔途径接种9-11日龄的SPF鸡胚,收集死亡鸡胚尿囊液。将收获的鸡胚尿囊液进行血凝价检测,当血凝滴度达1：16以上时。确定病毒分离为阳性。若初次传代获得的尿囊液未检测到血凝性,需再盲传两代．若仍未检测到血凝性则认为病毒分离阴性。将收获的鸡胚尿囊液进行血凝抑制试验,若被AIV标准阳性血清抑制,     

鸽新城疫(ND)灭活疫苗安全性试验研究

用四批鸡胚尿囊液制备的ND油乳剂(Ⅰ号)灭活疫苗及鸡胚尿囊液、尿囊膜、羊膜、羊水混合制备的油乳剂(Ⅱ号)灭活疫苗和用鸡胚尿囊液制备的ND蜂胶佐剂(Ⅰ号)灭活疫苗及鸡胚尿囊液、尿囊膜、羊膜、羊水混合制备的蜂胶佐剂(Ⅱ号)灭活疫苗分别进行安全性试验观察,15d生长曲线表明,不影响鸽的生长,甚至有提高的趋势.     

鸡新城疫、传染性法氏囊病弱毒混合苗免疫试验

为减少因多次免疫接种给鸡群造成应激,我们将鸡新城疫(ND)与传染性法氏囊病(IBD)弱毒疫苗按一定比例混合后免疫雏鸡,获得了满意效果。现报道如下。材料和方法一、ND(N_(70)型)La Sota疫苗:本室保存,按常规方法接种鸡胚收获尿囊液。血凝价为1∶1280。     

鸽新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的生长规律

运用红细胞凝集试验(HA)，对鸽新城疫病毒(NDV)在坞胚尿囊液中的生长变化的研究表明，ND—gs病毒经尿囊腔接种9日龄坞胚，24h内病毒处于“掩蔽期”，24h后开始生长，96h左右死亡，血凝价达到最高。这一结果，为该病毒的进一步的研究奠定了基础。     

金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明金银花抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药3种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在3种不同的加药方式中,不同浓度的金银花提取液均能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,其作用效果与提取液浓度呈正比例相关。结果表明,金银花提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

影响鸡新城疫和减蛋综合征病毒血凝试验因素的探讨

鸡新城疫(ND)是目前对养鸡业危害最大的传染病之一。鸡减蛋综合征(EDS76）是一种由腺病毒引起的、以产蛋下降及蛋壳形成不全为特征的传染病。目前主要用弱毒疫苗和油乳剂灭活疫苗来预防这两种疾病的发生。ND和EDS76的病毒均具有囊膜，其上有血凝素，能凝集红细胞(RBC)，且两种病毒可通过鸡胚或鸭胚尿囊腔接种来增殖，故可用血凝试验检测尿囊液中病毒的含量。血凝试验具有操作简便、快速和实用性强等特点，但影响因素较多。为了克服不利因素的影响，选择出最佳的试验条件，笔者对几个常见的影响因素进行了初步探讨，现介绍如下。一…     

鹅源新城疫病毒云南流行毒株的分离鉴定

取病死鹅的脑和脾脏,常规处理,接种9～10日龄非免疫鸡胚,结果可使鸡胚致死;用死亡鸡胚的尿囊液进行血凝试验,结果能凝集鸡、鸭、豚鼠的红细胞;再用死亡鸡胚的尿囊液进行血凝抑制试验,结果死亡鸡胚的尿囊液的血凝性能被抗鸡NDV阳性血清所抑制,而不能被抗AIV-H5N1阳性血清和抗EDSV-76阳性血清所抑制。试验结果提示,本试验所分离的病原为一株鹅源的新城疫病毒（命名为：KM2007株）。     

鸽新城疫蜂胶佐剂灭活疫苗急性毒性试验研究

用四批鸡胚尿囊液制备的ND蜂胶佐剂灭活疫苗(0701、0702、0703、0704)和四元材料(尿囊液、尿囊膜、羊膜、羊水)混合制备的ND蜂胶佐剂灭活疫苗(0701、0702、0703、0704)以1个使用剂量皮下注射1日龄乳鸽,进行急性毒性试验观察。15 d生长曲线表明,不影响鸽的生长,甚至有提高的趋势。     

鸽新城疫油乳剂灭活疫苗急性毒性试验研究

用四批鸡胚尿囊液制备的ND油乳剂灭活疫苗（0801、0802、0803、0804）和四元材料（尿囊液、尿囊膜、羊膜、羊水）混合制备的ND油乳剂灭活疫苗（0801、0802、0803、0804）以1个使用剂量皮下注射1日龄乳鸽，进行急性毒性试验观察。15d生长曲线表明，不影响鸽的生长，甚至有提高的趋势。     

不同病毒在SPF鸡胚与普通鸡胚繁殖性能的比较

利用HI和AGP方法检测普通种蛋中ND和IBD的卵黄抗体水平,利用HA和EID50检测方法比较多种病毒(如NDV、IBV、IBDV及AEV)在SPF鸡胚与普通鸡胚上繁殖性能的差异。研究结果表明:普通种蛋中ND及IBD的卵黄抗体水平普遍较高,在SPF鸡胚上新城疫LaSota病毒繁殖量是普通鸡胚的5～20倍,尿囊液血凝效价平均高2.0～2.5滴度。MA5毒株在SPF胚病毒液EID50为普通鸡胚的10倍以上熏且每次检测的结果比较接近。IBDV、AEV等病毒在普通鸡胚上几乎不能增殖。     

乌鸡新城疫病毒中发型毒株的分离与鉴定

从发病的43日龄乌鸡群中分离到1株病毒，经鸡胚传代培养后，测定其F3代尿囊液血凝（HA）效价为2^8，HI试验中能被鸡ND阳性血清中和，鸡胚平均死亡时间（MDT）为60．8h，1日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）为0．8，血凝解脱时间小于10min，血凝素热稳定性差。表明该分离株为新城疫病毒中发型毒株。     

不同病毒在SPF鸡胚与普通鸡胚繁殖性能的比较

利用HI和AGP方法检测普通种蛋中ND和IBD的卵黄抗体水平，利用HA和EID50检测方法比较多种病毒(如NDV、IBV、IBDV及AEV)在SPF鸡胚与普通鸡胚上繁殖性能的差异。研究结果表明：普通种蛋中ND及IBD的卵黄抗体水平普遍较高，在SPF鸡胚上新城疫La Sota病毒繁殖量是普通鸡胚的5～20倍，尿囊液血凝效价平均高2.0～2.5滴度。MA5毒株在SPF胚病毒液EID50为普通鸡胚的10倍以上，且每次检测的结果比较接近。IBDV、AEV等病毒在普通鸡胚上几乎不能增殖。     

鸡新城疫和减蛋综合征二联灭活苗的制备及其免疫效果观察

用鸡新城疫(ND)Lasota系N79克隆株和减蛋综合征(EDS-76)GC_2毒株,分别接种鸡胚和鸭胚,收获尿囊液毒,血凝价分别达1:2048和1:10000以上,用一定浓度福尔马林37℃作用16～18小时进行灭活,按一定比例混匀,加入7号白油油相中,制备三批二联油乳剂灭活苗,接种产蛋母鸡,接种后15天产生EDS-76 HI抗体,并在一个月内持续升高,而ND HI抗体产生时间略早,至接种后2～3周达到高峰,两者无干扰性;接种一个月后攻毒,对ND保护率4/4,对EDS-76保护性良好;实际应用时选择肌肉注射或皮下注射,0.5～1毫升/羽。     

鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明鱼腥草抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药三种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在三种不同的加药方式中,不同浓度的鱼腥草提取液都能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价;鱼腥草提取液和新城疫病毒同时注入鸡胚时,鱼腥草原液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液于新城疫病毒接种后注入鸡胚时,2倍稀释液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液先于新城疫病毒注入鸡胚时,4倍和8倍稀释液抗病毒效果最好。结果表明,鱼腥草提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。